|
|
Interakce MRP2 transportérů s vybranými antiepileptiky
Bačová, Jitka ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Trejtnar, František (oponent)
Cíl studie: Na základě současných studií, které odhalily zvýšenou expresi efluxního transportéru MRP2 v hematoencefalické bariéře pacientů rezistentních k léčbě antiepileptiky, byla učiněna hypotéza, že by tato zvýšená exprese MRP2 mohla přispívat k selhávání antiepileptické léčby, k tzv. refrakterní epilepsii. Cílem naší studie bylo testovat substrátovou afinitu vybraných antiepileptik k MRP2 transportéru. Zvlášť jsme se soustředili na fenobarbital, etosuximid, primidon, valproát, karbamazepin, klonazepam a lamotrigin. Dále jsme testovali inhibiční potenciál těchto antiepileptik k MRP2-řízenému transportu. Metody: Ke studiu substrátové afinity testovaných antiepileptik k MRP2 byly provedeny transportní experimenty na epiteliálních buněčných monovrstvách kultivovaných na mikroporózních membránových filtrech. Konkrétně byly pro tento účel použity polarizované MDCKII buňky transfekované cDNA lidského MRP2 a jako kontrolní MDCKII-NeO buněčné linie, kde je vlastní exprese MRP2 utlumena. Pro určení inhibičního potenciálu byly na výše zmíněných buněčných kulturách provedeny akumulační zkoušky za použití známého fluorescenčního substrátu MRP2 kalceinu. Výsledky: Testovaná antiepileptika nejsou ani substátem ani inhibitorem MRP2 transportéru. Závěr: Naše data nepotvrdily hypotézu, že se zvýšená exprese...
|
|
|
Postoje a zkušenosti studentů s návykovými látkami
Mašová, Veronika ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Višňovský, Peter (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ POSTOJE A ZKUŠENOSTI STUDENTŮ S NÁVYKOVÝMI LÁTKAMI: Postoje studentů 3. ročníku Farmaceutické fakulty Univerzity Karlovy v Hradci Králové k drogám v akademickém roce 2005/2006 Diplomová práce Veronika Mašová Diplomová práce se zabývá postoji, zkušenostmi a informovaností studentů třetího ročníku Farmaceutické fakulty Univerzity Karlovy v Hradci Králové v akademickém roce 2005/2006 k ilegálním drogám. V teoretické části práce jsou vymezeny základní pojmy, dále je popsána farmakologie některých návykových látek a na konci této části je přehled drogové situace v Evropě a České republice. Experimentální část práce je zaměřena na interpretaci výsledků, které byly získány z anonymního dotazníkového šetření. V závěru práce jsou výsledky porovnány s výsledky stejné dotazníkové studie, která proběhla mezi studenty 1. ročníku farmacie ve stejném akademickém roce, s výsledky z jiných fakult v České republice (z Prahy a Brna) a se studií ESPAD. Dotazníkového šetření se zúčastnilo139 studentů, kteří byli ve věku 20 - 30 let, průměrný věk byl 21,7 let. Z výsledků studie vyplývá, že průměrný věk studentů, kdy poprvé vyzkoušeli drogy, je 17,9 let. Studenti mají největší zkušenosti s marihuanou. Byla nabídnuta 74,5% studentům a vyzkoušelo ji 52,5% studentů....
|
|
|
Postoje a zkušenosti studentů s návykovými látkami
Stejskalová, Lucie ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Višňovský, Peter (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ POSTOJE A ZKUŠENOSTI STUDENTŮ S NÁVYKOVÝMI LÁTKAMI: Postoje studentů 3. ročníku Farmaceutické fakulty Univerzity Karlovy v Hradci Králové k alkoholu a tabáku v akademickém roce 2005/2006 Lucie Stejskalová Diplomová práce se zaměřuje na postoje, zkušenosti a informovanost o legálních návykových látkách (alkohol, tabák) studentů třetího ročníku Farmaceutické fakulty Univerzity Karlovy v Hradci Králové v akademickém roce 2005/2006. Je rozdělena na část teoretickou a část experimentální. Teoretická část práce se zaměřuje na vymezení základních pojmů, možné příčiny vzniku drogových závislostí, prevenci drogových závislostí, hlavní typy drogových závislostí a následně se věnuje podrobněji farmakologii alkoholu a tabáku. Experimentální část práce je zaměřena na interpretaci výsledků, které byly získány z anonymního dotazníkového šetření. V závěru práce jsou výsledky porovnány s výsledky stejné dotazníkové studie, která proběhla mezi studenty farmacie v roce 2000. Získané informace jsou také porovnány s výsledky z jiných fakult v České republice (z Prahy, z Brna) a se studií ESPAD. Dotazníkového šetření se zúčastnilo190 studentů, kteří byli ve věku 21 - 23 let, průměrný věk byl 22,0 let Jak je patrné z této studie, zkušenost s legálními drogami,...
|
|
| |
|
|
Ovlivnění buněčné direrenciace u nádorových buněk analýzou exprese proteinu Serca3 jako markeru diferenciace
Šerá, Pavlína ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
V předložené práci jsme studovali proces buněčné diferenciace navozený inhibitory histon deacetyláz v buněčných liniích získaných z různých typů nemalobuněčného karcinomu plic. Cílem práce bylo studovat vzájemné spoluovlivnění procesu buněčné diferenciace a exprese proteinu SERCA (ATPázy Sarko/Endoplazmatického retikula), který zajišťuje transport vápníku z cytozolu do endoplazmatického retikula. Buněčné linie různých plicních nádorů byly kultivovány in vitro za přidání různých inhibitorů histon deacetylázy ze skupiny mastných kyselin s krátkým řetězcem. Exprese SERCA proteinu byla hodnocena pomocí metody Western blot za použití primárních monoklonálních protilátek IID8 a PLIM430, které rozpoznávájí enzymy SERCA2 a SERCA3. Naše experimenty ukazují, že exprese proteinů SERCA a proces buněčné diferenciace jsou vzájemně propojeny ve všech sledovaných buněčných liniích nádoru plic (A549, Calu-3, ChaGoK-1, NCI-H292 and NCI-H460). Po navození buněčné diferenciace inhibitory histon deacetylázy jako jsou butyrát, valerát či fenylbutyrát sodný, byla pozorována především zvýšená exprese proteinu SERCA3. Zvýšení exprese proteinu SERCA3 bylo specifické, neboť úroveň exprese proteinu SERCA2 i po přidání léčiv zůstala nezměněna. Souhrnem lze říci, že naše výsledky potvrzují a rozšiřují původní hypotézu...
|
|
|
Principy transportu léčiv přes placentu: nové aspekty pro farmakoterapii v těhotenství
Schönwälderová, Denisa ; Čečková, Martina (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
8. SOUHRN Po thalidomidové aféře se náhled na farmakologickou nedostupnost placenty významně změnil. Následně byl přijat názor, že placentu prostupuje v podstatě jakákoliv chemická látka. Jelikož je potřeba léčit chronické choroby matky i během těhotenství, strhla se vlna výzkumů, která měla dát této léčbě racionální podklad. Postupné získávání informací o jednotlivých složkách placentární bariéry umožnilo vznik in vitro a in vivo modelů, které podpořily studium léčiv. Syncytiotrofoblast hraje důležitou roli v rychlosti přestupu léčiv přes bariéru. Pro distribuci léčiv je nezbytné uvažovat změny ve farmakokinetice během těhotenství (vazba na bílkoviny, distribuční objem, krátký eliminační poločas, polarizace, pH gradient mezi sérem matky a plodu). Pro většinu léčiv je nejdůležitějším mechanismem transportu pasivní difuze. Klíčovou roli v definitivním prostupu do fetálního kompartmentu má skupina ABC proteinů, v placentě zastoupena především P-glykoproteinem, skupinou MRP transportních proteinů a ABCG2 transportérem. P-gp byl objeven jako první a je nejlépe prozkoumán. Bylo definováno mnoho jeho substrátů a inhibitorů, jejichž vzájemné interakce jsou stěžejní pro racionální farmakoterapie v těhotenství. I když byla v rámci vlastní placentární tkáně definována celá řada enzymů (včetně izoforem CYP450), zdá...
|
|
|
Využití molekulárně biologických in vitro metod pro interpretaci mechanizmů vybraných lékových interakcí warfarinu
Rulcová, Alice ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Mladěnka, Přemysl (oponent)
1 Abstrakt Při biotransformaci xenobiotik jaterními enzymy cytochromu P450 může dojít k farmakokinetickým lékovým interakcím, kdy jedna látka zvyšuje aktivitu biotransformačních enzymů podílejících se na metabolismu jiného léčiva a urychlit tak jeho eliminaci. Zásadní roli v tomto mechanizmu má pregnanový X receptor (PXR), který prostřednictví transkripční aktivace indukuje řadu biotransformačních enzymů I. i II. fáze biotransformace včetně nejdůležitějšího enzymu CYP3A4. Cílem této experimentální diplomové práce je studium interakcí warfarinu a jeho enantiomerů s pregnanovým X nukleárním receptorem při transkripční regulaci cytochromu CYP3A4 na úrovni hepatocytů nebo hepatocytární buněčné linie HepG2 in vitro. Cytotoxicitu warfarinu na buněčné linii HepG2 jsme testovali pomocí metody MTT, cytotoxické působení warfarinu se v testovaných koncentracích neprojevilo. S využitím metod gene reporter assay a two-hybrid assay jsme zjistili, že R-warfarin indukuje expresi genu CYP3A4 prostřednictvím nukleárního receptoru PXR. Pomocí metody RT-PCR jsme pozorovali indukční vliv warfarinu a jeho enantiomerů na expresi genu CYP3A4 v izolovaných hepatocytech dvou dárců. Závěrem lze proto konstatovat, že warfarin aktivací PXR může způsobit farmakokinetické lékové interakce s farmaky metabolizovanými CYP3A4.
|
|
|
Role ABC transportérů v mechanizmu vzniku farmakorezistentních epilepsií
Hanousková, Tereza ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Trejtnar, František (oponent)
Diplomová práce shrnuje sou_asné poznatky o možné roli ABC transportér_ v mechanizmu vzniku farmakorezistentní epilepsie (FE). P_ibližn_ 30% z celkového po_tu epileptických pacient_ je totiž rezistentní k antiepileptické lé_b_. Pro FE je charakteristické, že v_tšina pacient_ je sou_asn_ rezistentní k n_kolika antiepileptik_m (AED), a_koli jejich mechanizmus ú_inku se liší. P_edpokládá se proto, že jednou z hlavních p_í_in FE je snížená dostupnost AED do mozku, kterou významn_ ur_ují ABC transportéry v hematoencefalické barié_e (HEB). V souvislosti s FE byly z rodiny ABC (ATP-binding casette family) transportér_ podrobn_ji studovány následující transportéry: P-glykoprotein (kódován genem MDR1), n_kte_í _lenové MRP rodiny (multidrug resistance associated protein family) transportér_ a BCRP (breast cancer resistance protein). Zvýšená exprese výše uvedených transportér_ byla popsána v endoteliálních bu_kách HEB, astrocytech a neuronech epileptogenní tkán_ pacient_ s FE. A proto modulace ABC transportér_ ve smyslu dosažení lepšího pr_niku AED do mozku by se mohla stát novou strategií lé_by FE. P_edevším podání inhibitor_ Pgp s nižší toxicitou, vyšší ú_inností a specifitou spolu s AED by mohlo zvrátit rezistenci a dosáhnout kontroly záchvat_ u FE. Také charakterizace genetických variant MDR1 genu a...
|
|
|
Implication of the Gabaergic System in Altered Responses to Stress Associated to Maternal Separation
Martišová, Eva ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Štaud, František (oponent)
IN CZECH (SOUHRN PRÁCE) Summary in Czech (Souhrn práce) 2 Tato práce se zabývá zapojením GABAergního systému do změněné reakce na stres vyvolané maternální separací u potkana. Cílem práce bylo studovat vliv maternální separace na GABAergní systém, přesneji na biochemické markery tohoto systému (hladiny GABA neurotransmiteru, exprese GABAA receptorů), a studovat na pohlaví závislé rozdíly v chování a neurochemických procesech u potkana indukované maternální separací. Aby bylo možné sledovat výše zmíněné cíle, nejprve bylo nutné vyvinout model maternální separace u potkana. Mláďata potkana byla separována od matky po dobu tří hodin denně od postnatálního dne 2 do postnatálního dne 21 (v postnatálním období, kdy jsou snížené schopnosti reagovat na stresove stimuly). V postnatální den 23 byla odstavena, rozdělena do skupin stejného pohlaví a bez významných manipulací ponechána vyrůst do dospělosti. Po dosažení dospělosti (> 60 dní) byli potkani rozděleni do dvou skupin. První skupina byla usmrcena dekapitací a jednotlivé regiony mozkové tkáně (přední a spánková kůra mozková, corpus striatum a hippocampus) byly použity ke stanovení hladin GABA vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a ke stanovení míry exprese GABAA receptorů western blot technikou. Druhá skupina byla podrobena Porsolt forced swimming...
|
|
|
Inhibice histon-deacatyláz a mitochondriální pohyb v neuronech
Prokopová, Iva ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Inhibice histon deacetyláz a mitochondriální pohyb v neuronech Mitochondriální pohyb je nezbytný pro správnou funkci neuronů a jeho narušení vede k neurodegeneraci. Podařilo se nám nalézt signifikantní rozdíly v pohybu mitochondrií mezi neurony striata a cortexu, získanými z mozku potkanů. Ve striatu se mitochondrie pohybují nižšími průměrnými rychlostmi a se sníženou celkovou dynamikou v porovnání s cortexem, přičemž zaujímají stejnou frakční okupaci nervových výběžků. V diplomové práci je diskutováno, jak tento fakt může přispět ke zvýšené náchylnosti k neurodegeneraci buněk striata. Použili jsme dvě různé metody analýzy mitochondriálního pohybu: manuální a polo- automatickou. Tyto metody dokáží určit průměrné rychlosti jednotlivých mitochondrií stejně jako celkovou dynamiku mitochondrií v určité sledované oblasti. Analyzovali jsme pouze neurony s vytvořenými synaptickými propojeními, mitochondrie se pohybovaly v obou směrech stejnými průměrnými rychlostmi, proto nebyly dále rozlišovány dle směru pohybu. Naše předběžné výsledky také odhalily, že inhibice histon deacetyláz pomocí trichostatinu A zvyšuje pohyb mitochondrií v neuronech striata, nezávisle na mitochondriální frakční okupaci a hladině Ca2+ ve výběžcích neuronů. Předpokládáme, že pravděpodobným mechanismem vzrůstu dynamiky mitochondrií...
|
host ::
RSS.