|
|
Analýza a izolace intermediátů biosyntetické dráhy alkylprolinových derivátů
Cudlman, Lukáš ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Michalíková, Klára (oponent)
(CZ) Tato diplomová práce je zaměřena na přípravu, analýzu a izolaci intermediátů biosyntetické dráhy 4-alkyl-L-prolinových derivátů pro jejich strukturní identifikaci. Mezi sloučeniny obsahující inkorporované 4-alkyl-L-prolinové deriváty patří klinicky používané antibiotikum, linkomycin A, ze skupiny linkosamidů, dále některé pyrrolobenzodiazepiny s protinádorovými účinky a bakteriální hormon hormaomycin. Studiem intermediátů biosyntetických drah těchto biologicky aktivních sloučenin je možné získat poznatky, které mohou být využity při přípravě nových a účinnějších derivátů biologicky aktivních metabolitů. První část diplomové práce se zaměřuje na žlutě zabarvené dikarboxylové intermediáty 1 a 2 biosyntetické dráhy 4-propyl-L-prolinu - prekursoru linkomycinu A. V přítomnosti methylačního činidla S-adenosyl-L-methioninu a C-methyltransferasy LmbW se podařilo částečně přeměnit intermediát 1 na intermediát 2. Obě sloučeniny byly identifikovány pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie z absorpčních i hmotnostně-spektrometrických spekter. Byla vyvinuta semi- -preparativní chromatografická metoda pro izolaci obou intermediátů. Neočekávaně byla zjištěna výrazně nižší stabilita intermediátu 2 ve srovnání s intermediátem 1 v in vitro enzymatické reakční směsi. Druhá část diplomové práce se...
|
|
| |
|
| |
|
|
Studium biologicky aktivních sekundárních metabolitů produkovaných vybraným kmenem hub rodu Geosmithia metodou UPLC-DAD-TOF-MS
Musil, Karel ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Tesařová, Eva (oponent)
(CZ) Tato práce se zabývá studiem kmenu hub RJ0258 (Geosmithia sp.9), u kterého byla dříve zjištěna produkce sekundárních metabolitů s antimikrobiální aktivitou. Produkce sekundárních metabolitů je značně závislá na kultivačních podmínkách a následné získávání těchto metabolitů na typu použité extrakční metody. Práce zahrnuje optimalizaci kultivačních podmínek houbové kultury pro zajištění maximální produkce látek s antimikrobiální aktivitou, následné zpracování fermentačního média, metodiku extrakce těchto biologicky aktivních látek a jejich separaci kapalinovou chromatografií. Při provedených testech bylo zjištěno optimální složení kultivačního média - agar s maltózovým extraktem (MEA - 100 ml, maltózový extrakt - 2 g, glukosa - 2 g, pepton 0,1 g, úprava pH na 5-6). Dále bylo zjištěno, že nejvhodnější doba kultivace je 11 dní od počátku kultivace, kdy dochází na základě testů biologické aktivity k největší produkci sekundárních metabolitů s antimikrobiální aktivitou. Po kultivaci bylo fermentační médium extrahováno metodou kapalina-kapalina roztokem 5% kyseliny octové v ethylacetátu. Po odpaření a rozpuštění získaného extraktu byl extrakt analyzován metodou UPLC-DAD-TOF-MS. Analýzy probíhaly na koloně Acquity UPLC BEH C18 a extrakt byl separován za použití lineární gradientové eluce s mobilními...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Analýza historických léčivých přípravků s obsahem alkaloidů, sulfonamidu, derivátů barbiturové kyseliny a derivátu pyrazolu
Kudláček, Karel ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
Léčivé přípravky obsahující chinin (injekční roztoky), sulfanilamid, aminofenazon, barbital (tablety), kofein, fenobarbital (dražé) a theofylin (čípek) staré sedmdesát let byly analyzovány pomocí RP-HPLC. Kvanti-fikace probíhala metodou HPLC-UV a UV-spektrofotometrií. Degradační produkty byly detegovány metodami HPLC- UV, a HPLC-MS. Separační podmínky byly optimalizovány. Chininové vzorky obsahují 92 %, resp. 87 % deklarovaného obsahu chininu. Chinotoxin byl identifikován jako rozpadový produkt chininu. Koncentrace theofylinu a kofeinu v příslušných formách zůstala po letech nezměněna. Nižší množství účinné látky (pokles o 8-22 %) bylo nalezeno v přípravcích obsahující sulfanilamid, barbital, fenobarbital a aminofenazon. Degradační produkty nebyly u těchto léčiv nalezeny.
|
|
|
Produkce sekundarních metabolitů u aktinomycet z rhizosféry brambor.
Komžák, Ondřej ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Erban, Tomáš (oponent)
Tato bakalářská práce je zaměřena na hledání producentů sekundárních metabolitů potlačujících patogenní bakterii Streptomyces scabies (synonymum scabiei), která způsobuje strupovitost u některých druhů zemědělských plodin a tím významné ekonomické ztráty. Metodou sekvenace genů 16S rRNA byly identifikovány kmeny bakterií z rhizosféry brambor a jednoduchým kultivačním testem určeny kmeny, které účinně potlačují Streptomyces scabies. Další práce v rámci tohoto projektu bude zaměřena na identifikaci těchto sekundárních metabolitů metodou HPLC.
|
host ::
RSS.