|
|
Vyhledání referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA z Haemonchus contortus
Růžičková, Michaela ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Michaela Růžičková Školitel: Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Vyhledání referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA z Haemonchus contortus Haemonchus contortus je parazitická hlístice, jejíž multirezistence k anthelminti- kům je celosvětovým problémem ohrožujícím hlavně chovy malých přežvý- kavců. V roce 2013 byl publikován její genom a transkriptom, což umožnilo rozsáhlý výzkum genové exprese. Referenční geny pro tyto studie prozatím ne- byly stanoveny. Použití vhodných referenčních genů je nezbytné pro správnou normalizaci hladin exprese genů. Cílem této práce bylo navrhnout a zhodnotit potenciální referenční geny pro studie genové exprese u dospělců H. contortus. Navrženo bylo 11 genů, stabilita jejich exprese byla hodnocena na samcích a sa- micích dvou kmenů H. contortus, jednoho na anthelmintika vnímavého (ISE) a druhého multirezistentního (WR). Z jedinců byla extrahována RNA, přepsána reverzní transkripcí do cDNA. Tato byla zředěna a analyzována kvantitativní real-time PCR s detekcí pomocí SYBR Green I. Stabilita exprese byla hodnocena počítačovými programy BestKeeper, geNorm, NormFinder a komparativní CT metodou. Nejstabilnějšími geny se jeví ncbp, ama, sodc, gapdh a...
|
|
|
Detekce oxidativního poškození DNA pomocí kometového testu
Kúdelová, Terézia ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Prahe Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Terézia Kúdelová Školiteľ: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Školiteľ špecialista: Prof. RNDr. Rudolf Štětina, CSc. Názov diplomovej práce: Detekcia oxidačného poškodenia DNA pomocou metódy Comet Assay Opravné mechanizmy majú v organizme dôležitú úlohu. Pri poruche týchto mechanizmov vzniká nerovnováha, čo môže viesť k indukcii mnohých ochorení. Táto práca je zameraná na ochranu DNA pred oxidačným poškodením. Schopnosť ľudských buniek A549 poradiť si s oxidačným stresom bola sledovaná v podmienkach in vitro. Oxidačné poškodenie bolo indukované peroxidom vodíka (H2O2), ktorý v DNA inicioval vznik jednoreťazcových zlomov (SSBs) a súčasne oxidáciu pyrimidínových a purínových báz. Mechanizmus poškodenia a reparácie sa sledoval dvoma spôsobmi. V prvom prípade sa bunky najskôr ošetrili antioxidantom, a následne sa vystavili pôsobeniu H2O2. V druhom prípade sa bunky najskôr poškodili H2O2, a následne sa nechali reparovať s pridaním antioxidačnej látky. Testovanými antioxidantmi boli epigalokatechin galát (EGCG), glutathion (GSH) a jeho chemické modifikácie - S- allyldithioglutathion (GSH-A) a S-allyltrithioglutathion (GSH-B). Rozsah poškodenia DNA sa odhadoval pomocou metódy Comet Assay v alkalickej...
|
|
|
Imunochemické stanovení enzymů DHRS8 a DHRS12 v lidských tkáních
Svobodová, Markéta ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Markéta Svobodová Školitel: RNDr. Eva Novotná, Ph.D. Název diplomové práce: Imunochemické stanovení enzymů DHRS8 a DHRS12 v lidských tkáních Dehydrogenasa/reduktasa (SDR rodiny) člen 8 (DHRS8, SDR16C2) a dehydrogenasa/reduktasa (SDR rodiny) člen 12 (DHRS12, SDR40C1) jsou lidské mikrosomální enzymy, které patří do nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým řetězcem (SDR). Tato nadrodina představuje jednu z největších proteinových skupin. SDR enzymy se podílejí na metabolismu různých endogenních a cizorodých látek a jsou zapojeny do fyziologických i patologických procesů. Nicméně, stále existuje mnoho enzymů, které nejsou dostatečně charakterizovány. Doposud jsou k dispozici informace o DHRS8 jen na úrovni mRNA a o její katalytické aktivitě vůči 5α-androstan-3α-17β-diolu. Navíc neexistují dosud publikované informace (kromě predikce) ohledně DHRS12. Cílem této studie bylo prozkoumat expresi DHRS8 a DHRS12 v různých lidských tkáních na úrovni proteinu. Vzorky tkáně byly odebrány od čtyř mužů středního věku po náhlé smrti bez zjevného onemocnění. Detekce proteinů byla provedena pomocí Western blottingu a specifických protilátek. Rekombinantní forma hledaných proteinů (DHRS12, DHRS8) byla exprimována v...
|
|
| |
|
| |
|
|
Manželství a rozvod v České republice ve světle současné morálky
Zemanová, Lydie ; Ovečka, Libor (vedoucí práce) ; Sládek, Karel (oponent)
Bibliografická citace Pohled na manželství a rozvod ve světle současné morálky [rukopis]: diplomová práce /Lydie Zemanová; vedoucí práce: Libor Ovečka. -- Praha, 2014. -- 88 s. Anotace Práce se zabývá komparací různých pohledů na manželství a rozvod (např. z pohledu katolické církve, profánní pohled, právní systém ČR). Cílem předkládané práce je porovnat názory a vývoj pohledu na manželství a rozvod v současné společnosti. Budeme sledovat uvolnění mravů pod vlivem televize a reklam. Otázkou také je, zda umění odráží skutečnost života lidí, či zda život lidí určuje. Dále se podíváme na to, jak je současný člověk schopen kriticky myslet. Jakou má motivaci. Jak je těžké udělat dobrou věc, když většinová společnost se smířila se zlem. Sondou do problematiky budou také dotazníky. Je též nutno uvést, že to není závazný výzkum, neboť nebude dostatečné množství dotazníkových vzorků. Zkoumat se bude i uvolnění sexuality a důvody proč v současné době je stále více lidí tzv. "single". Za použití statistických údajů se pokusíme určit budoucí vývoj a rozebrat přirozené a svátostné hodnoty manželství, manželskou nerozlučitelnost a jednotu, vztah manželství a společnosti. Klíčová slova: manželství, rozvod, sexualita, teologie, morálka, kanonické právo, rodina
|
|
|
Studies of the interaction between human AQP5 and PIP
Nešverová, Veronika ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Univerzita Göteborg, Švédsko Kandidát: Veronika Nešverová Školitel: Vladimír Wsól Název diplomové práce: Studie interakce mezi lidským AQP5 a PIP Aquaporin 5 je membránová kanál, který udržuje vodní rovnováhu v buňkách slzných a slinných žláz. Nefunkční transport tohoto proteinu z cytoplasmy do cytoplasmatické membrány zřejmě hraje roli při rozvoji Sjögrenova syndromu - chronického autoimunitního onemocnění. Prolaktin-inducibilní protein je cytoplasmatická bílkovina, která přispívá k patogenezi této nemoci. Tento projekt se zabývá potenciální interakcí aquaporinu 5 s prolaktin- inducibilním proteinem. Oba rekombinantní proteiny byly exprimovány kvasink- ou Pichia pastoris a purifikovány pomocí nízkotlaké kolonové chromatografie v systému ÄKTA. Glykosylace prolaktin-inducibilního proteinu byla potvrzena specifickým barvivem detekujícím pouze glykoproteiny. Byly provedeny dva pokusy koeluce na HisTrap koloně. Frakce, které se eluovaly při druhém pokusu byly analyzovány pomocí hmotnostní spektrometrie. Výsledky avšak interakci nepotvrdily. K objasnění patogeneze Sjögrenova syndromu bude zapotřebí dalšího výzkumu. Hlavním...
|
|
|
Optimalizace transfekcí eukaryontních buněčných linií
Šplíchalová, Iva ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Štambergová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Iva Šplíchalová Vedoucí diplomové práce: RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Školitel specialista: Mgr. Vojtěch Vejvoda, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace transfekcí eukaryontních buněčných linií Optimalizace transfekce je proces, při kterém hledáme nejlepší podmínky pro transfekci. Tento proces předchází každé rutinní výrobě rekombinantních proteinů v laboratoři. Nejprve se volí expresní systémy, které by nejlépe vyhovovaly konkrétním požadavkům. Pří výběru se musí zohlednit rychlost, ekonomičnost a funkčnost vzniklého rekombinantního proteinu, která může být ovlivněna posttranslačními modifikacemi expresních systémů. Pro vnášení cílových genů do expresních systémů se využívá expresních vektorů. Cílem diplomové práce bylo optimalizovat podmínky pro transfekci eukaryontních buněčných linií CHO PF a HEK293 za pomoci tří komerčně dostupných kitů. Po optimalizaci následovalo srovnání transfekční účinnosti s doposud používanými transfekčními postupy ve firmě Generi biotech s.r.o. Pro optimalizace byl použit plazmid pMaxGFP. Účinnost transfekce byla hodnocena pomocí Neubauerovy komůrky a kvantifikací GFP v buněčném lyzátu. Pro ...
|
|
|
Effect of the subchronic and early-life permethrin exposures on rat liver: oxidative stress and endogenous antioxidant responses
Palan, Matyáš ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Dršata, Jaroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Univerzita Camerino Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmaceutická fakulta Katedra biochemických věd Katedra molekulární biologie Kandidát: Matyáš Palan Školitel: Associate Prof. of Biochemistry Rosita Gabbianelli, Ph.D. RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Název diplomové práce: Účinek podání permetrinu po narození a ve formě subchronických dávek na játra potkanů: vliv na oxidační stres a antioxidační odpověď Permetrin je široce používaný a pro savce málo toxický insekticid. Nicméně dlouhodobá expozice nebo expozice v počáteční fázi života může způsobovat problémy. Pro studium vlivu permethrinu na játra byly vybrány dva různé zvířecí modely. V modelu subchronické expozice byli použiti adolescentní potkani, kterým byl podáván permethrin (150 mg/kg tělesné váhy/den) po dobu 60 dní. Byli usmrceni ihned po ukončení expozice. Pro model expozice v počáteční fázi života byla použita mláďata potkanů, kterým byl podáván permethrin (34.05 mg/kg tělesné váhy/den) po dobu 15 po sobě následujících dní. Potkani byli usmrceni po 300 dnech od začátku léčby. Za účelem vyhodnocení dopadu expozice byly měřeny markery oxidačního stresu (peroxidace lipidů, obsah karbonylových skupin), množství superoxid dismutázy, katalázy, glutathion peroxidázy, aktivita glutathion transferázy, množství...
|
|
|
HPLC metoda pro stanovení testosteronu a její využití v charakterizaci karbonylreduktas
Plucha, Tomáš ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Skarka, Adam (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Tomáš Plucha Školitel: RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Název diplomové práce: HPLC metoda pro stanovení testosteronu a její využití v charakterizaci karbonylreduktas Karcinom prostaty patří mezi nádory závislé na hormonech, proliferace nádorově transformovaných buněk je závislá na aktivaci androgenního receptoru testosteronem. Terapii založenou na snížení koncentrace testosteronu do značné míry komplikuje produkce androgenů přímo v buňkách prostaty. Bylo prokázáno, že se na produkci androgenů se mimo jiných podílí také enzymy redukující karbonylové sloučeniny, především aldo-ketoreduktáza 1C3 (AKR1C3). Cílem práce bylo zavést HPLC metodu pro stanovení testosteronu a s jejím využitím zmapovat schopnost enzymů redukujících karbonylové sloučeniny katalyzovat in vitro reakci, při které vzniká aktivní androgen testosteron z neaktivního prekurzoru androstendionu. Vzorky enzymů byly inkubovány v prostředí androstendionu c = 20-120 µmol/l, po ukončení inkubace byly extrahovány pomocí etylacetátu. Ke stanovení vzniklého testosteronu byla použita HPLC analýza (kolona BDS Hypersil C18, 5µm, 250×4,6 mm, mobilní fáze metanol:voda, 70:30, detekce: DAD při 240 nm). Testovali jsme lidské jaterní subcelulární frakce,...
|
host ::
RSS.