|
|
Development of electrophoretic method for determination of ethanolamines in antifreeze mixtures
Hamráková, Katarína ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Táto práca sa zaoberá vývojom, optimalizáciou a testovaním použiteľnosti elektroforetickej metódy pre stanovenie etanolamínov v nemrznúcich zmesiach. Metóda bola testovaná s reálnou matricou chladiacej kvapaliny. Pre stanovenie bola využitá kapilárna elektroforéza s nepriamou UV detekciou. Etanolamíny - monoetanolamín, dietanolamín a trietanolamín - sú organické látky, ktoré sa v nemrznúcich zmesiach používajú ako inhibítory korózie, pretože sa glykoly, ktoré sa do týchto zmesí pridávajú, môžu vplyvom vysokej teploty či kyslíka zo vzduchu premeniť na kyseliny, ktoré spôsobujú koróziu kovov. Metóda bola optimalizovaná výberom vhodného zloženia základného elektrolytu, jeho pH, vhodným pomerom jednotlivých zložiek tlmivého roztoku a výberom vhodného vnútorného štandardu. Základným elektrolytom bol tlmivý roztok zložený z 60 mM kyseliny octovej a 30 mM histidínu, pH 4,59 a ako vnútorný štandard bol použitý lyzín. K meraniam sa používala kremenná kapilára s vnútorným priemerom 50 µm, celkovou dĺžkou 50,0 cm a efektívnou dĺžkou 41,5 cm. Bolo otestované meranie z krátkeho konca a skrátenie kapiláry na 35,0 cm s efektívnou dĺžkou 26,5 cm, ktoré bolo ďalej využívané. Vzorka bola dávkovaná hydrodynamicky tlakom 5 kPa po dobu troch sekúnd. Detekcia prebieha pri vlnovej dĺžke 214 nm. Metódou je možné stanoviť...
|
|
|
VÝVOJ UHPLC-MS/MS METODY KE STANOVENÍ NILOTINIBU V KRYSÍM SÉRU
Černá, Kateřina ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout UHPLC-MS/MS metodu ke stanovení nilotinibu v krysím séru. Tato UHPLC-MS/MS metoda byla následně použita ke sledování farmakokinetického průběhu uvolňování účinné látky v modelovém organismu - krysa v rámci projektu zaměřeném na formulační vývoj tablety obsahující nilotinib s pomalejším uvolňováním než doposud. Optimální nastavení metody bylo následující. Chromatografická kolona Acquity UPLC BEH PHENYL 100x2,1 mm, 1,7 μm od firmy Waters. Mobilní fáze se skládala z methanolu a destilované vody, obojí s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí při použití gradientové eluce. Průtok mobilní fáze byl 0,3 ml/min, teplota na dávkovači 15 řC, teplota kolony 40 řC, doba analýzy 6,5 minuty a objem nástřiku 2 μl. Byl sledován MRM přechod pro nilotinib: 530,2 → 289,10 (Q1 = -26 V; CE = -31 V; Q3 = -20 V) a pro nilotinib D6: 536,2 → 295,15 (Q1 = -26 V; CE = -31 V; Q3 = -14 V). Nastavení iontového zdroje bylo následující: průtok nebulizačního plynu 3 l/min; průtok sušícího plynu 10 l/min; teplota zdroje 300 řC; teplota desolvatační kapiláry 250 řC. Metoda byla částečně validována. Koeficient determinace 1,0000 ukazuje výbornou linearitu metody. Správnost, vyjádřená relativní chybou, byla do 20 %. Přesnost, vyjádřená pomocí RSD, byla do 9 %. Všechny hodnoty splňují validační...
|
|
|
Studium nucené degradace canagliflozinu s využitím HPLC
Máchalová, Jitka ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
Tato práce se zabývá vývojem a optimalizací metody pro stanovení canagliflozinu pomocí HPLC s UV a MS detekcí. Vyvinutá metoda byla následně použita pro studium nucené degradace této sloučeniny a zkoumání hlavních degradačních produktů vzniklých vystavením canagliflozinu oxidativnímu stresu. Canagliflozin je derivát fenolického glykosidu a inhibitor glukoso-sodného transportéru 2, který stimuluje močovou exkreci glukózy potlačením reabsorpce glukózy z proximálního tubulu v ledvinách. Canagliflozin se používá k řízení hladiny glukózy v krvi u pacientů s diabetem mellitu typu 2. V optimalizované metodě byla použita kolona Agilent Poroshell 120 SB-Aq (2,1 × 100 mm, 2,7 µm) a jako mobilní fáze byla použita směs pufru (10mM HCOOH upravená hydroxidem amonným na pH 3,5) a acetonitrilu. Součástí validace metody bylo testování přesnosti, opakovatelnosti, meze detekce a kvantifikace, linearity a lineárního dynamického rozsahu, robustnosti metody a testování stability vzorku. Mez detekce metody byla 8,9·10-5 mg ml-1 (2,0·107 mol l-1 ) a mez kvantifikace byla 3,0·10-4 mg ml-1 (6,8·10-7 mol l-1 ). Pro koncentraci 0,3 mg ml-1 byla opakovatelnost (n = 7) retenčního času, vyjádřená jako relativní směrodatná odchylka, 0,17 % a plochy píku 0,75 %. Pro koncentraci 5·10-3 mg ml-1 byla opakovatelnost retenčního času...
|
|
|
Využití kapilární elektroforézy při analýze sacharidové složky glykopeptidů
Šimonová, Alice ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Cílem této diplomové práce byl vývoj metody pro stanovení osmi monosacharidů nejčastěji se vyskytujících v glykoproteinech pomocí kapilární elektroforézy. Konkrétně se jednalo o stanovení glukosy, galaktosy, manosy, N-acetylglukosaminu, N-acetylgalaktosaminu, fukosy, N-acetylneuraminové kyseliny a xylosy. Celková délka křemenné kapiláry s vnitřním průměrem 10 m byla 50,0 cm a efektivní délka 35,0 cm. Základním elektrolytem byla směs hydroxidu sodného o koncentraci 50 mmol/l, hydrogenfosforečnanu sodného o koncentraci 22,5 mmol/l a cetyltrimethylamoniumbromidu o koncentraci 0,2 mmol/l. Vzorky byly dávkovány hydrodynamicky tlakem 5 kPa po dobu 70 s, separace probíhala při napětí -30 kV a tlaku 270 kPa vkládaném na výstupní vialku a detekce analytů probíhala pomocí bezkontaktního vodivostního detektoru. Meze detekce se pohybovaly v rozmezí od 5 do 7 mg/l a meze stanovitelnosti od 16 do 22 mg/l. Opakovatelnost ploch píků a jejich migračních časů vztažených na vnitřní standard kyseliny 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinethansulfonové poskytla hodnoty relativních směrodatných odchylek menších než 4 %. Nakonec byly určeny vhodné podmínky pro hydrolýzu oligosacharidů na monosacharidy před jejich separací. Hydrolýza probíhala v 4M kyselině chlorovodíkové při 100 řC v blokové lázni, hydrolýza netrvala déle než...
|
|
|
Studium oxidační degradace tikagreloru
Tonnerová, Barbora ; Kubíčková, Anna (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Tikagrelor je protisrážlivá látka, která se používá jako léčivo při akutních koronárních syndromech. Jaterním metabolismem vzniká aktivní vedlejší produkt, který funguje na principu reverzibilního blokátoru P2Y12 adenosindifosfát receptoru. Tikagrelor je rozpustný v nejméně 50 % (obj.) methanolu. V rámci této práce byla vyvinuta a validována metoda stanovení tikagreloru pomocí ultravysokoúčinné kapalinové chromatografie. Nejlepších výsledků bylo dosaženo při gradientu mobilní fáze (0-4 min: 20→80 % A; 4-6 min: 80 % A; 6-6,5 min: 80→20 % A; 6,5-8,5 min: 20 % A), kde A označuje acetonitril. Zbylá procenta mobilní fáze doplňuje roztok octanu amonného o koncentraci 20 mmol·dm-3 a pH 8,0. Jako reverzní stacionární fáze byla použita kolona Kinetex C18 100A (100 x 2,1 mm, 1,7 µm; Phenomenex, USA). Retenční čas tikagreloru při těchto podmínkách byl 4,91 min. Dále byla vyvinutá metoda použita ke sledování oxidační degradace tikagreloru peroxidem vodíku. Z výsledků vyplývá, že k oxidačnímu rozkladu 20 % tikagreloru dochází po 7 hodinách oxidace při 50 řC. Stejnou rychlostí zániku účinné látky vznikal jeden degradační produkt, jehož retenční čas byl 3,95 min.
|
|
| |
|
| |
|
|
Vývoj elektroforetické metody stanovení síranů v krevní plazmě
Hnízdilová, Lucie ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Hraníček, Jakub (oponent)
Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout metodu pro stanovení síranů v krevní plazmě pomocí kapilární zónové elektroforézy. Byla použita křemenná kapilára o vnitřním průměru 50 μm a efektivní délce 41,5 cm. Plazmatické proteiny byly sráženy acetonitrilem. Jako optimální základní elektrolyt byla určena 0,4M kyselina mravenčí s 15mM chromanem draselným. Separační napětí bylo 25 kV. Vzorek byl dávkován napětím -5 kV po dobu 40 s. K vyhodnocení byla využita nepřímá UV detekce při 260 nm. Vzhledem ke složité matrici je vhodné provést kvantifikaci metodou standardního přídavku. Po vztažení ploch píků na vnitřní standard (500μM chlorečnany) byla relativní směrodatná odchylka 5,97 %. Výhodou této metody oproti dříve používaným srážecím metodám je krátká doba analýzy a jednodušší úprava vzorku. Klíčová slova kapilární elektroforéza, anorganické ionty, sírany, krevní plazma
|
|
| |
|
|
Změny základního elektrolytu způsobené elektrolýzou při průběhu kapilární zónové elektroforézy
Novotný, Tomáš ; Gaš, Bohuslav (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
3 Abstrakt Elektrodové reakce jsou nevyhnutelným vedlejším jevem standardní separace kapilární zónovou elektroforézou. Elektrolytické produkty vznikající následkem elektrolýzy vody, ke které dochází ve většině využívaných konfigurací, mohou způsobit postupné změny základního elektrolytu nacházejícího se v zásobních vialkách a uvnitř křemenné separační kapiláry. Degradací základního elektrolytu dochází ke snížení přesnosti a reprodukovatelnosti experimentů provedených kapilární zónovou elektroforézou. Změny ve složení základního elektrolytu jsou významně ovlivněny samotným složením výchozího pufru, kdy různé elektrolyty mají různou tendenci se s časem degradovat. Správný výběr složení a správná manipulace se základním elektrolytem v elektrodových vialkách může vést k vyšší přesnosti a reprodukovatelnosti provedených experimentů. Klíčová slova: Kapilární zónová elektroforéza, elektrolýza, základní elektrolyt, bezkontaktní vodivostní detekce
|
host ::
RSS.