|
|
Permeation studies of a set antihistaminic drugs and the influence of verapamil in an in vitro Blood-brain barrier model
Mandíková, Jana ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Trejtnar, František (oponent)
Transportní studie přes model hematoencefalické bariéry (HEB) hrají důležitou roli ve vývoji nových léčiv. Poslední in vitro studie uvádí, že P-glykoprotein (P-gP) a pasivní transport mohou ovlivnit koncentraci druhé generace H1-antagonistů v CNS. Diplomová práce byla zaměřena na transportní studie první a druhé generace H1-antagonistů přes in vitro model HEB, sledování role efluxního transportéru P-gP a jeho olivnění P-gP inhibitorem verapamilem. Nežádoucí účinky první generace H1-antagonistů v CNS závisí na jejich schopnosti pronikat přes HEB a způsobovat tak útlum a ospalost. Druhá a třetí generace působí sedativně na pacienta jen mimořádně. Nedávné studie potvrdily, že omezený průnik moderních H1-antagonistů přes HEB může být způsoben jejich zpětným tokem z CNS cestou přes P-gP (Obradovic, Dobson et al. 2006). V transportních studiích jsme pracovali s in vitro modelem HEB, buněčnou linií PBMEC/C1-2. V následujících studiích jsme testovali tři zástupce H1-antagonistů (promethazin, fexofenadin a cetirizin) a známý substrát P-gP rhodamin 123. Přítomnost P-gP ve zkoumané buněčné linii jsme dokázali ve western blotting analýze. Funkční aktivitu P-gP jsme hodnotili v transportních studiích na Transwell modelu in vitro. Kvantitativní analýzu jsme provedli pomocí RP-HPLC a fluorimetru. Přítomnost verapamilu...
|
|
|
Studium vlivu selenu na proliferaci buněčných linií izolovaných z kolorektálního karcinomu
Žmolilová, Hana ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Selen je esenciální stopový prvek, který je součástí mnoha proteinů s funkcí katalytickou a strukturální. Antioxidační vlastnosti některých selenoproteinů, např. glutathion peroxidázy, mohou být zvláště důležité u ovlivnění karcinogeneze. Selen existuje v různých chemických formách - anorganických (seleničitany, selenany) a organických (selenoaminokyseliny, selenoproteiny). Biologická dostupnost a protirakovinná aktivita selenu závisí na koncentraci a chemické formě, ve které je aplikován. Ve své práci se zabývám vlivem L-Selenomethioninu a Se-methyl-L-selenocysteinu na proliferaci tří linií buněk kolorektálního karcinomu s různým nádorovým potenciálem (HT 29, SW 480, SW 620). K měření proliferace byla použita metoda BrdU - ELISA s chemiluminiscenční detekcí.
|
|
|
Komplementace dsbA mutantního kmene Francisella tularensis a analýza potenciálních vazebných partnerů proteinu DsbA
Šenitková, Iva ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Iva Šenitková Školitel: doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Školitel - konzultant: RNDr. Petra Špidlová, Ph.D. Název diplomové práce: Komplementace dsbA mutantního kmene Francisella tularensis a analýza potenciálních vazebných partnerů proteinu DsbA Konzervovaný hypotetický lipoprotein FTT1103 je virulenčním faktorem gramnegativní intracelulární bakterie F. tularensis. Tento protein je homologní k proteinům disulfid oxidoreduktázové rodiny DsbA. Proteiny této rodiny katalyzují tvorbu disulfidických vazeb, které jsou nezbytné pro utvoření správné konformace proteinů, pro jejich aktivitu a stabilitu. Cílem práce byla identifikace vazebných partnerů lipoproteinu FTT1103 běžně nazývaného DsbA, jejichž znalost by nám mohla pomoci v hlubším pochopení role lipoproteinu DsbA ve virulenci F. tularensis. Pomocí metod molekulární biologie jsme vytvořili fúzní gen ftt1103 se sekvencí kódující FLAG® kotvu a klonovali ho do plazmidového vektoru replikujícího se ve F. tularensis. Plazmidový vektor jsme elektroporací vnesli do in frame delečního mutanta F. tularensis subsp. holarctica kmen FSC200/∆1103, čímž došlo k jeho komplementaci in trans. Protein DsbA obsahující FLAG® epitop jsme spolu s jeho...
|
|
| |
|
|
Sojové isoflavonoidy, genistein a daidzein: Jejich biologické efekty na buněčné linie rakoviny prsu
Hůrková, Kristýna ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Karlova Univerzita v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Kristýna Hůrková Vedoucí diplomové práce: Profa . Dra . Natércia Teixeira, Profa . Dra . Georgina Correia da Silva, Doc.Pharm.Dr. Tomáš Šimůnek Ph.D. Název diplomové práce: Sojové isoflavonoidy, genistein a daidzein: Jejich biolgické efekty na buněčné linie rakoviny prsu Rakovina je jednou z hlavních příčin smrti na celém světě. Epidemiologické studie ukázaly, že ve státech s vysokým příjmem soji je nízká incidence rakoviny prsu. Soja obsahuje isoflavonoidy daidzein (D) a genistein (G), které mohou být zodpovědné za protektivní vlastnosti, ačkoli jejich přesný účinek ještě nebyl zcela objasněn. V této práci jsme hodnotili a srovnávali biochemické a biologické efekty sojového extraktu biotransformovaného houbou Aspergillus awamori (SBE) a čistých hlavních isoflavonoidů, G a D na placentární mikrosomy a estrogen-dependentní buněčnou linii rakoviny prsu stabilně transfektovanou genem aromatasy, MCF-7aro. Výsledky ukázaly, že D nezpůsobuje žádné patrné změny v žádném ze studovaných parametrů. V placentárních mikrosomech G způsobil pouze mírné snížení aktivity aromatasy. U buněk MCF-7aro bylo pozorováno na koncentraci závislé snížení viability po 48 hodinovém působení SBE, G a směsi G a D. Navíc bylo...
|
|
|
Biologické hodnocení fotodynamické aktivity amfifilních anionických fotosensitizérů
Halašková, Marie ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
1 ABSTRAKT Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Marie Halašková Školitel: RNDr. Miloslav Macháček, Ph.D. Název diplomové práce: Biologické hodnocení fotodynamické aktivity amfifilních anionických fotosenzitizérů Nádorová onemocnění jsou celosvětově rozšířeným zdravotním problémem a jednou z nejčastějších příčin úmrtí ve vyspělých státech, proto je věnováno značné úsilí výzkumu a vývoji nových protinádorových léčiv. Běžné konvenční léčebné metody, jako jsou chemoterapie, radioterapie, chirurgické zákroky či jejich kombinace, jsou často spojeny s vážnými vedlejšími účinky a vysokými náklady na léčbu. Fotodynamická terapie (PDT) se proto stává stále více uznávanou alternativní terapií pro léčbu mnoha maligních i nemaligních stavů. PDT je klinicky schválený neinvazivní způsob léčby, který se skládá ze dvou relativně jednoduchých kroků: podání fotosenzitivní látky a následné ozáření tumoru světlem za účelem aktivace fotosenzitizéru (PS). Aktivovaný PS reaguje s molekulárním kyslíkem za tvorby vysoce reaktivních forem kyslíku (ROS). Ty v nádoru způsobí stav oxidačního stresu, který vede ke smrti nádorových buněk, poškození cévního systému nádoru a vyvolání protinádorové imunitní reakce. Cílem této práce je zhodnocení fotodynamické aktivity nových...
|
|
|
Role of two lysine amino acid residues in transmembrane regions in agonist recognition of the human P2Y12 receptor
Ćwierz, Jan ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Jan Ćwierz Školitelé: Prof. Dr. med. Ivar von Kügelgen Doc. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název: Úloha dvou lysinových aminokyselin v transmembránových regionech lidského P2Y12 receptoru v rozpoznání agonisty. Lidský receptor P2Y12 exprimovaný na krevních destičkách hraje klíčovou úlohu v jejich fyziologické funkci. Význačně se podílí na zachování normální hemostázy a je často cílem protidestičkové léčby, jako je podávání clopidogrelu. Nahrazení aminokyselin zodpovědných za vazbu ADP, což je negativně nabitý endogenní agonista, může vést ke snížené interakci mezi ligandem a receptorem. Cílem práce bylo studovat roli dvou lysinových aminokyselin na pozici 174 a 173 aminokyselinového řetězce receptoru P2Y12 a následné změny jeho vazebného místo pro rozpoznávání 2-MeSADP. V rámci mé diplomové práce byly dva lysinové řetězce nesoucí kladný náboj nahrazeny neutrálním alaninem. Míra exprese receptorů v CHO buňkách byla analyzována pomocí imunofluorescenčního proteinu a konfokální mikroskopie. Přirozená (wild-type) a tři mutantní varianty receptoru (K173A, K174A and K173A/K174A) byly následně zkoumány s využitím standardní reportérové eseje. Exprese luciferázy byla stimulována pomocí...
|
|
| |
|
|
Cytotoxicita a metabolismus doxorubicinu v buněčné linii MCF7
Hanušová, Veronika ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Bc. Veronika Hanušová Titul, jméno, příjmení školitele: Doc. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Cytotoxicita a metabolismus doxorubicinu v buněčné linii MCF-7. Doxorubicin (DOX) patří mezi antracyklinová chemoterapeutika významně se podílející na léčbě mnoha solidních nádorů, včetně karcinomu prsu, ale také mnoha hematoonkologických onemocněních. DOX je metabolizován na 13-OH-doxorubicinol (DOX-OL) produkovaný zejména karbonyl reduktasou 1 (CBR1). DOX-OL je méně antineoplastický, ale více kardiotoxický než původní sloučenina. Cílem této práce bylo studium redukce DOX a testování možného zvýšení cytotoxicity DOX inhibicí jeho reduktas. K experimentům byla zvolena buněčná linie MCF-7, odvozená z prsního adenokarcinomu. Nejprve bylo zjištěno vhodné složení kultivačního média a optimalizován postup při přípravě vzorku pro HPLC analýzu. Při studiu metabolismu DOX v cytosolu MCF-7 buněk působil oracin (potencionální cytostatikum) jako významný kompetitivní inhibitor reduktas DOX. V testech cytotoxicity působil DOX toxičtěji v buňkách s přídavkem séra do média, oracin byl naopak toxičtější v buňkách bez přídavku séra. Kombinace DOXu s oracinem působila toxičtěji než...
|
|
| |
host ::
RSS.