|
|
Srovnání kolon pro separaci farmaceuticky významných látek metodou sekvenční injekční chromatografie
Vacková, Jana ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, PhD. Kandidát: Jana Vacková Název práce: Srovnání kolon pro separaci farmaceuticky významných látek metodou sekvenční injekční chromatografie Tato diplomová práce se zabývá vývojem separační metody na moderních chromatografických kolonách v systému Sekvenční injekční chromatografie (SIC). Systém SIC byl založen na systému SIChrom™ (FIAlab® , Bellewue, WA, USA) s osmicestným ventilem z nerezové oceli (VICI® Valco Instruments, TX, USA) a pumpou S17 (Sapphire™ Engeneering, MA, USA). Použité vzorky byly připraveny rozpuštěním 25 mg různých fenolických kyselin (kyselina protokatechová, kyselina vanilová, kyselina p-kumarová, kyselina ferulová, kyselina o-kumarová, kyselina sinapová a kyselina syringová) ve 25 ml methanolu. Použité kolony byly tři, a to kolona Ascentis Express C-18 (30 mm × 4,6 mm, 2,7 µm, Sigma - Aldrich, Supelco Analytical, Bellefonte, PA, USA), kolona Ascentis Express RP-Amide (30 mm × 4,6 mm, 2,7 µm, Sigma - Aldrich, Supelco Analytical, Bellefonte, PA, USA) a kolona Ascentis Express Phenyl-Hexyl (30 mm × 4,6 mm, 2,7 µm, Sigma - Aldrich, Supelco Analytical, Bellefonte, PA, USA). Jejich sorbent patří do skupiny částic s pevným jádrem. Mobilní fáze byla tvořena...
|
|
|
Elektro membránová extrakce za nehybných podmínek - Ultrarychlá izolace kyselých léčiv z neupravené lidské plazmy
Prosová, Klára ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Tato práce se zabývá studiem elektro-membránové extakce (EME) léčiv kyselé povahy z biologických vzorků za naprosto stabilních podmínek; čili bez využití třepání. Jak je z názvu patrné, EME přes kapalnou membránu na nosiči (SLM) je důsledkem existence elektrického potenciálového rozdílu mezi kompartmenty oddělenými membránou *1+*2+. Byla provedena extrakce tří kyselých léčiv z neupravené lidské plazmy, a to pomocí organického rozpouštědla (dekanol) imobilizovaného v pórech polymerního dutého vlákna (o tloušťce stěny 200 µm) jako SLM, do přijímacího roztoku, kterým byl roztok 10 mM NaOH. Hnací silou pro extrakci bylo 10-30 V. Byl studován vliv doby extrakce, napětí a hodnot pH dárcovského a přijímacího roztoku a byly navrženy optimální podmínky pro dosažení efektivity. Ketorpofen, ibuprofen a naproxen ze skupiny nesteroidních antiflogistik byly extrahovány ze vzorků plazmy s výtěžky dosahujícími hodnot 2 až 20 % za 5-10 minut. Systém byl během extrakce udržován v nehybném stavu a hnací silou pro přechod cílových analytů přes SLM bylo pouze napětí 20 V. Metoda představuje velice efektivní způsob předúpravy a zakoncentrování před separací za použití kapilární elektroforézy (CE) nebo vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Metoda vykazuje lineární odezvu signálu v rozmezí koncentrací 0.5 až 30...
|
|
|
Vývoj HILIC metodiky pro UHPLC-MS/MS stanovení pteridinů, porovnání selektivity různých stacionárních fází
Jánská, Radka ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Radka Jánská Školitel: PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HILIC metodiky pro UHPLC- MS/MS stanovení pteridinů, porovnání selektivity různých stacionárních fází Tato diplomová práce se zabývá vývojem HILIC metodiky určené k identifikaci a stanovení biologicky aktivních látek neopterinu, biopterinu, 7,8-dihydroneopterinu a 7,8- dihydrobiopterinu za použití ultra-účinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostním spektrometrem typu trojitého kvadrupolu. Testovány byly tři chromatografické kolony (BEH Glycan, BEH Amide a BEH HILIC), na kterých bylo zkoušeno několik druhů mobilních fází a jejich vliv na separaci zkoušených látek. Mobilní fáze byla tvořena vodnou složkou (kyselina octová a mravenčí, octan a mravenčan amonný a hydroxid amonný o nízké koncentraci) s acetonitrilem. Na chromatografické koloně BEH Glycan byly jako nejlepší vyhodnoceny mobilní fáze ve složení 1mM octan amonný o pH= 3,8 s acetonitrilem v poměru 30:70 a 1mM octan amonný o pH= 6,8 s acetonitrilem v poměru 28:72. Chromatografická kolona BEH Amide poskytla nejlepší výsledky při užití dvou mobilních fází ve složení 1mM octan amonný o pH= 4,8 s acetonitrilem v poměru 23:77 a 1mM octan amonný o pH= 6,8...
|
|
|
Detekce a kvantifikace trinitrotoluenu v reálných vzorcích s použitím metody ELISA
Hanusová, Lucia ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Analytické chemie Kandidát: Lucia Hanusová Školitel v Hradci Králové: PharmDr. Lucie Havlíková Ph.D Školitel v Boloni: Prof. Steffano Girotti Název diplomové práce: Detekce a kvantifikace trinitrotoluenu v reálných vzorcích s použitím metody ELISA 2,4,6-trinitrotoluen (TNT) je široce používaná výbušnina, která je vyráběna od začátku minulého století. Může se vyskytovat jako nečistota v životním prostředí, kontaminuje vodu, vzduch i půdu. Může se akumulovat v rostlinách a rybách, a může ovlivňovat lidské zdraví. Pro získání informací o znečištění životního prostředí, výskytu v lidském organismu nebo určení výbušniny po výbuchu je třeba spolehlivá a citlivá metoda. Proto tyto účely byla na vzorcích z výbuchu testována nepřímá kompetetivní ELISA metoda s chemiluminiscenční detekcí, která byla s úspěchem použita pro detekci a stanovení těchto vzorků. Po extrakci methanolem probíhá imunologická analýza za použití mnoha různých protilátek, nakonec je přidána protilátka značená křenovou peroxidázou a po přidání luminiscenční směsi dojde k vývoji světla, které se vyhodnotí. Metoda prokázala velmi dobrou citlivost, pro naše vzorky se limit detekce se pohybuje v řádu ng/mL [1].
|
|
|
Vývoj imunochromatografického stanovení pro testování reálných vzorků obsahujících TNT
Kosařová, Lucie ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Lucie Kosařová Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj imunochromatografického stanovení pro testování reálných vzorků obsahujících TNT V dnešní době je stále více vyžadováno velice rychlé získání výsledků. Zejména to platí pro látky nebezpečné a potenciálně nebezpečné. Jednou z takových látek je 2,4,6-trinitrotoluen (TNT), látka která byla testována v průběhu této práce. TNT byl značně používán jako výbušnina pro vojenské účely a je stále jednou z nejpoužívanějších výbušnin. Jeho výhody, jako nízké výrobní náklady, bezpečná manipulace a dobrá výbušnost, může vést ke zneužití této sloučeniny teroristy. TNT je navíc známým polutantem kvůli jeho toxicitě a nízké biodegradabilit. Může kontaminovat povrchovou i spodní vodu, půdu a sedimenty, a tak způsobovat problémy jak v životním prostředí, tak zdravotní problémy. Proto je požadováno stanovit tuto nitroaromatickou sloučeninu v minimálních koncentracích, velmi rychle i mimo laboratoř. Tyto požadavky může splnit lateral flow test. V průběhu této práce byl vyvinut imunochromatografický test (LFIA) založený na značení koloidním zlatem pro detekci TNT v reálných vzorcích. Tyto vzorky byly získány kontrolovaným výbuchem TNT,...
|
|
|
Extrakce na tuhou fázi metodou Lab-On-Valve
Koblasa, Lukáš ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Lukáš Koblasa Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: Extrakce na tuhou fázi metodou Lab-On-Valve Diplomová práce se zabývá vývojem metody pro přímé stanovení kalium šetřícího diuretika amiloridu ze vzorku moči metodou bead injection (BI) využívajícím systém Lab-on-Valve (LOV). Stanovení bylo založeno na selektivním zachycením amiloridu na kuličkách sorbentu (Sephadex-CM C-25 Ion-exchange), zatímco možné interferující komponenty moči byly vypláchnuty nosným proudem do odpadu. Po zakoncentrování byl amilorid z kuliček eluován roztokem elučního činidla (0,25 M HNO3 + 0,05 M KCl) o rychlosti průtoku 5 µl/s. Detekován byl pomocí fluorescenčního spektrometru při vlnové délce 272 nm. Amilorid byl naspikován do desetkrát zředěné moči, k jedné analýze ho bylo zapotřebí 300 µl. Linearita odezvy se pohybovala v rozmezí koncentrací 0,2 - 10,00 µg/ml (r = 0,990). Limit detekce (LOD) odpovídal koncentraci 0,05 µg/ml. Celá analýza trvala 280 sekund.
|
|
|
Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve
Krchňáková, Eva ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Eva Krchňáková Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve. Diplomová práce se zabývá možností automatizovat extrakci na tuhou fázi (SPE) ve spojení s mikročásticovou analýzou (BI). Cílem práce bylo vyzkoušet nahrazení mikročástic v mikročásticové analýze sorbentem z SPE, zjistit chování sorbentu v tomto systému a následně ověřit, zda je možné extrakci na tuhou fázi miniaturizovat se všemi kroky, které jsou k provedení metody nutné. V práci byla manuálně provedena extrakce na tuhou fázi, ve které bylo testováno 7 sorbentů: Lichrolut MERCK RP-18, DSC-18, DSC-18Lt, DSC-8, DSC-PH, DSC-CN a HLB Oasis. Z pokusu vyplynuly nejlepší možné podmínky pro provedení extrakce na tuhou fázi a to: aktivace sorbentu a eluce analytu 100% acetonitrilem, solvatace sorbentu, rozpuštění vitaminu D a vymytí balastu ze sorbentu zředěnou kyselinou octovou o pH 3. Pro systém je nejvhodnější sorbent HLB Oasis od firmy Waters, který je smáčivý s vodou a neměl by se rozptylovat po systému, což bylo po použití sorbentu potvrzeno. Ostatní sorbenty byly pro systém nevhodné z důvodu nesmáčivosti s vodou a velké jemnosti sorbentu. Sorbenty...
|
|
|
Využití SIA systému pro stanovení hliníku
Fialová, Barbora ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Barbora Fialová Školitel: PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Využití SIA systému pro stanovení hliníku Tato diplomová práce se zabývá stanovením hlinitých iontů ve vzorcích povrchové vody pomocí metody SIA. Pro stanovení hlinitých iontů byl použit postup uvedený ČSN 83 0520 část 22 B. Podstatou stanovení je komplexotvorná reakce hlinitých iontů s aluminonem, v průběhu reakce dochází ke vzniku barevného komplexu, intenzita zbarvení je přímo úměrná koncentraci hlinitých iontů ve vzorku. Detekce byla provedena spektrofotometricky. Nejdříve byly optimalizovány reakční podmínky ve zkumavce. Zde byla ověřena lineární závislost intenzity zbarvení na koncentraci Al ve vzorku pro rozsah koncentrací 0,02 - 1 mg/l s korelačním koeficientem 0,9932. Také byl vypočítán limit (LOD = 0,0119 mg/l) a limit kvantifikace (LOQ = 0,0390 mg/l). Následně byla reakce převedena do SIA systému a byla provedena optimalizace reakčních podmínek v SIA systému. Kalibrační křivka vykazovala linearitu v rozmezí koncentrací 0,02 - 0,6 mg/l Al ve vzorku s korelačním koeficientem 0,9971. Zakřivení kalibrační křivky v rozmezí vyšších koncentrací bylo způsobeno nedostatečným množstvím činidla. Z kalibrační křivky...
|
|
| |
|
| |
host ::
RSS.