|
|
Elemental analysis of leaf and soil samples using the ICP-MS
Švecová, Pavla ; Hraníček, Jakub (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
CZ Tato diplomová práce je zaměřena na stanovení vybraných prvků ve vzorcích listů a půdy. Stanovovanými prvky byly arsen, kadmium, měď, nikl, olovo, vápník a zinek. Analyzované vzorky pocházejí jednak z různých lokalit České republiky a dále z řady evropských krajin. V rámci této diplomové práce nebylo provedeno vzorkování. Vzorky listů byly připravené ke stanovení celkového obsahu prvků sušením a mikrovlnným tlakovým rozkladem. Vzorky půdy byly analyzovány na obsah vylouhovatelného obsahu vybraných prvků. Zvolená extrakční technika představovala metodu popsánu normou ISO 11466, která pracuje s lučavkou královskou jako extrakčním činidlem. Metoda byla ověřena využitím certifikovaných materiálů. Obsah vybraných prvků ve vzorcích byl stanoven metodou hmotnostní spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem (ICP-MS). Koncentrace prvků v analyzovaných vzorcích listů vykazují široké rozmezí hodnot.Hodnoty pro vápník dosahují koncentrací v rozmezí 0,98 - 16,6 mg g-1 , pro nikl 0,16 - 10,20 μg g-1 , pro měď 2,60 - 43,80 μg g-1 , pro zinek 13,4 - 489 μg g-1 , pro arsen 0,01 - 11,60 μg g-1 , pro kadmium < LOD - 7,02 μg g- 1 a pro olovo 0,03 - 71,40 μg g-1 . Vyšší koncentrace těžkých prvků jsou pozorovány v případe vzorků pocházejících z oblastí, ve kterých probíhaly těžebné procesy, případně jde o oblasti...
|
|
|
Stanovení účinných látek a případných degradačních produktů v historickém vzorku přípravku Algena z roku 1981
Bauerová, Markéta ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tableta Algena bylo léčivo volně dostupné na trhu v druhé polovině dvacátého století v Československu. Algena byla užívána především protibolestem.Tableta obsahuje čtyřiúčinné látky: aminofenazon,aprobarbital, fenacetin a kofein. Cílem této práce bylo analyzovat účinné látky v historické tabletě Algeny z roku 1981, stanovit jejich koncentrace a případné rozkladné produkty. Aby byly tyto cíle splněny, bylo třeba vyvinout a optimalizovat RP-HPLC metodu s UV detekcí. Dále byla použita HPLC-MS, která měla sloužit k odhalení případných degradačních produktů. Separace probíhala na koloně XBridge® BEH C18 (150×3,0 mm; 2,5 µm), byla použita binární gradientová eluce, kdy první složkou byl 0,1% roztok octové kyseliny ve vodě, druhou složkou byl methanol. Stanovené obsahy účinných látek (vzhledem k deklarovanému obsahu výrobcem) byly: amino- fenazon 97,0 %, aprobarbital 89,2 %, fenacetin 96,0 % a kofein 93,2 %. Hmotnostní detekcí nebyly prokázány žádné degradační produkty stanovovaných látek. Klíčová slova: Algena, aminofenazon, aprobarbital, degradace, fenacetin, kofein, RP-HPLC
|
|
|
Optimalizace stanovení 5-fluorouracilu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Durychová, Eva ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Diplomová práce se věnuje vývoji metody stanovení 5-fluorouracilu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie, která by mohla být použita ke stanovení účinnosti jeho enkapsulace liposomy. Nejprve byla vyzkoušena separace 1 mM standardu 5-fluorouracilu na několika vybraných typech kolon. Mezi testované kolony patřila C18 kolona, C18 kolona s pozitivní úpravou povrchu, fenyl-hexylová kolona a několik fluorových kolon společně se dvěma HILIC kolonami. Jako mobilní fáze byla ze začátku používána směs skládající se z 10 mM CH3COONH4, pH = 4,5 a MeOH v poměru 98/2. Výsledky ukázaly, že 5-fluorouracil eluuje na všech kolonách v přílišné blízkosti mrtvého času, kde často eluují také různé nečistoty. Aby se předešlo možnému zkreslení signálu 5-fluorouracilu ze strany nečistot potencionálně se vyskytujících v reálném vzorku, bylo vyzkoušeno několik různých obměn chromatografických podmínek. Jako definitivně nejúčinnější se ukázalo přidání 5 mM iontově párového činidla (jmenovitě hydrátu chloridu tetrabutylamonného) do mobilní fáze společně se zvýšením pH na 8,0 pro podporu ionizace analytu. V kombinaci s takto upravenou mobilní fází dosahovala nejlepších výsledků fenyl-hexylová kolona s retenčním časem 4,36 minut, která byla vybrána i pro finální stanovení 5-fluorouracilu v reálných vzorcích liposomů....
|
|
|
Stanovení žlučových kyselin v bronchoalveolární laváži pacientů po transplantaci plic
Plášilová, Denisa ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Petr, Tomáš (oponent)
Transplantace plic je život zachraňující metodou léčby pro pacienty trpícím plicním selháním. Medián přežití pacientů po tomto zákroku je ovšem stále nízký (6 let). Hlavním důvodem je především plicní aloštěpová dysfunkce, která může vést až k odmítnutí transplantované štěpu. Mezi hlavní rizikové faktory této dysfunkce byl identifikován gastroezofageální reflux (některé studie uvádí i duodenogastroezofageální reflux), který se prokazatelně zhoršuje právě po transplantaci plic. Mezi markery gastroezofageálního refluxu se může řadit bilirubin, pepsinogen II (některé studie uvádí pepsin), pH a žlučové kyseliny. Všechny tyto markery byly v této práci stanoveny na skupině vzorků bronchoalveolární laváže a porovnávány mezi sebou i s klinickými údaji, které klasifikují postupné zhoršení funkce plic po transplantaci. Po měření vzorků na LC- MS/MS bylo zjištěno, že celková koncentrace žlučových kyselin měřených enzymatickým testem neodpovídá celkové koncentraci žlučových kyselin měřených kapalinovou chromatografií. Vzorky byly podrobeny hydrolýze a solvolýze pro zjištění, zda není disproporce v obou metodách způsobena atypickou konjugovanou či sulfatovanou žlučovou kyselinou. Byly zjištěny významné korelace mezi klinickými údaji a koncentrací žlučových kyselin a také mezi klinickými údaji a pH. Necílenou...
|
|
|
Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography in the Analysis of Intact Glycopeptides
Molnárová, Katarína ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
Analýza glykoproteínov predstavuje obrovskú výzvu v rámci glykoproteomiky, a to hlavne kvôli makro- a mikroheterogenite glykozylácie. Hydrofilná interakčná kvapalinová chromatografia (HILIC) je vhodnou alternatívou k chromatografii na reverznej fáze, ktorá sa najbežnejšie využíva v glykoproteomickej analýze. Táto dizertačná práca sa venuje potenciálu HILIC v glykoproteomickej analýze, zahrňujúca separáciou glykopeptidov na polárnych stacionárnych fázach až po využitiu HILIC v rámci prípravy vzoriek. Na úvod bol preskúmaný vplyv koncentrácie acetonitrilu na precipitáciu glykopeptidov v závislosti na typu pripojeného glykánu. Následne boli testované tri, komerčne dostupné stacionárne fáze - kolóna obsahujúca silikagél modifikovaný piatimi hydroxylovými skupinami, amidová a zwitteriónová stacionárna fáza. Porovnaná bola ich účinnosť v separácii glykopeptidových izomérov, ktoré sa líšili iba vo vetvení a/alebo v type väzby. Ďalší výskum bol venovaný separácii glykopeptidov ľudského imunoglobulínu G na relatívne nových kolónach, ktoré zatiaľ neboli charakterizované v rámci glykoproteomickej analýze. Jednalo sa o kolóny od spoločnosti Advanced Chromatography Technologies s nemodifikovaným silikagélom (HILIC-A), s aminopropylom-modifikovaným sorbentom (HILIC-B) a s polyhydroxylovou stacionárnou fázou...
|
|
|
Vývoj hmotnostně-spektrometrických metod pro strukturní analýzu mastných kyselin a estolidů
Cudlman, Lukáš ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent) ; Lísa, Miroslav (oponent)
(CZ) Tato disertační práce shrnuje použití moderních hmotnostně-spektrometrických metod pro strukturní identifikaci mastných kyselin a estolidů triacylglycerolů (TG-EST) a jejich následnou charakterizaci v lipidomu novorozeneckého mázku, tj. biofilmu pokrývajícího pokožku lidského plodu během posledního trimestru těhotenství. Novorozenecký mázek je především známý svými antimikrobiálními vlastnostmi a schopností hojení ran a popálenin. První část disertační práce se zaměřuje na rozmanitost mastných kyselin v lipidomu novorozeneckého mázku. Tyto kyseliny tvoří strukturní podjednotky komplexních lipidů, např. hojně zastoupených triacylglycerolů a voskových esterů. Studiem mastných kyselin a jejich strukturních rysů bylo možné v této práci získat cenné poznatky o strukturní variabilitě celého lipidomu novorozeneckého mázku. Bez plného pochopení struktury těchto klíčových podjednotek by bylo v budoucnu nemožné dokončit analýzu tohoto lipidomu. Mastné kyseliny byly v této práci charakterizovány pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a pokročilých metod hmotnostní spektrometrie, a to fotodisociace ultrafialovým zářením (UVPD) a disociace vyvolané ozonem (OzID). Spojení HPLC a hmotnostní spektrometrie (HPLC-MS) poskytlo jednoznačné informace o polohách a geometrii dvojných vazeb a...
|
|
|
Separace farmaceuticky aktivních látek v multimodální a chirální chromatografii: interakční studie
Fojtíková, Sofia ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent) ; Fischer, Jan (oponent)
Během procesu vývoje léčiv spoléhá farmaceutický průmysl často na chromatografické techniky. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) patří pro tyto účely mezi nejběžněji používané chromatografické techniky, přičemž reverzní fáze a HILIC jsou nejčastějšími volbami. Nicméně, navzdory jejich popularitě, tyto techniky mají několik nevýhod jako je příspěvek sekundárních interakcí, které vycházejí z povahy materiálu nosiče, a omezení z hlediska analýzy molekul s určitými vlastnostmi. V tomto smyslu se multimodální (také mixed-mode) chromatografie (MMC) jeví jako slibná technika, schopná řešit tyto výzvy. První část disertační práce je zaměřena na porovnání retence strukturně odlišných molekul v různých chromatografických systémech s použitím sedmi různých multimodálních stacionárních fází ve snaze objasnit interakční mechanismy, uplatňující se na jednotlivých studovaných stacionárních fázích. Na základě sledování trendů, pozorovaných za různých podmínek pro molekuly s různými fyzikálně-chemickými vlastnostmi, se to alespoň částečně podařilo. Chirální chromatografie je dalším klíčovým nástrojem v analýze farmak. Jejím hlavním účelem je při vývoji léčivých přípravků rozdělení enantiomerů tak, aby bylo možno studovat potenciálně různé bezpečnostní a účinnostní profily pro každý z enantiomerů zvlášť. Z...
|
|
|
Stanovení vápníku, hořčíku a fosforu v kostech vybraných živočichů
Škardová, Alice ; Hraníček, Jakub (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato bakalářská práce je věnována stanovení vybraných prvků (vápníku, hořčíku a fosforu) v kostech různých druhů živočichů a jejich vzájemného porovnání. Analyzované vzorky kostí byly vybrány za účelem porovnání výživových hodnot v souvislosti se stanovovanými prvky. Získané vzorky kostí byly nejprve mechanicky rozmělněny a naváženy do rozkladných patron. Pomocí vysokotlakého mikrovlnného rozkladu za přítomnosti kyseliny dusičné a chlorovodíkové byly vzorky převedeny do roztoku a následně vhodným způsobem naředěny. Analýza kapalných vzorků byla provedena pomocí hmotnostního spektrometru s indukčně vázaným plazmatem. Výsledný obsah všech třech prvků byl vypočten na základně kalibračních závislostí a se započtením navážky vzorku a příslušného faktoru ředění. Všechny získané výsledky byly nad limitem detekce přístroje za daných podmínek. Tento limit byl pro vápník 0,38 mg/l, pro hořčík 0,037 mg/l a pro fosfor 0,078 mg/l. Základním přínosem této práce je ucelený přehled o obsahu prvků v kostech různých druhů živočichů.
|
|
|
Analýza relevantních fotoproduktů bilirubinu a jejich biologický význam v problematice novorozenecké žloutenky
Křepelka, David ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Zelenka, Jaroslav (oponent)
Novorozenecká žloutenka se objevuje u téměř 60 % donošených a 80 % nedonošených dětí, kde mírně zvýšená koncentrace bilirubinu chrání před oxidačním stresem těsně po narození. Při překročení specifické koncentrace bilirubinu (obvykle nad 340 µmol·l-1 ) může nastat kernicterus. Tomuto se předchází fototerapií modrým světlem (460 nm), jež přeměňuje bilirubin na fotoprodukty, které se snadněji vylučují žlučí a/nebo močí. Publikovaná data ukazují, že se u novorozenců s indikovanou fototerapií mohou v pozdější fázi života objevit klinické obtíže (např. vyšší incidence astmatu, alergií, diabetu 1. typu). Možným důvodem vzniku těchto onemocnění je specifická biologická aktivita fotoproduktů. Tato práce se zabývá separací neznámého fotoproduktu (bend P), který vznikl po 8hodinovém osvícení roztoku bilirubinu modrým světlem. Následně byl tento produkt izolován a separován tenkovrstvou a sloupcovou chromatografií. V další části byla vyvinuta kvantitativní metoda pro analýzu bendu P pomocí LC-MS/MS. Nakonec byly změřeny vzorky moči, plazmy a stolice odebrané 15 novorozencům před a po fototerapii. Výsledky potvrdily vznik bendu P při fototerapii novorozenců. Bend P je nezmapovaný fotoprodukt. Izolace standardu bendu P a následná kvantitativní analýza v biologických vzorcích představují další krok k porozumění...
|
|
|
Vývoj UHPLC-PDA metody vhodné ke stanovení účinných látek v tabletě Ataralginu
Chocová, Natálie ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Hraníček, Jakub (oponent)
Tableta Ataralgin je volně dostupné léčivo napomáhající proti bolestem a zvýšené tělesné teplotě. Tableta obsahuje tři účinné látky - paracetamol, kofein a guaifenesin. Cílem této práce bylo vyvinout rychlou, účinnou, selektivní a jednoduchou UHPLC-PDA metodu vhodnou ke stanovení účinných látek v tabletě Ataralginu, která by následně sloužila ke kontrole kvality při výrobě tohoto léčiva ve farmaceutickém průmyslu. Separace probíhala na koloně Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, 1,7 µm), teplota kolony byla nastavena na 40 řC, teplota na dávkovači byla 10 řC, mobilní fáze byla složena z methanolu (B) a destilované vody s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí (A), objem nástřiku byl 1 µl a průtok byl nastaven na 0,4 ml·min-1 . Pro měření byla nastavena podmínka gradientové eluce (čas: 0-0,5-1,5-2,5-3-5,5 min, A: 85-85-30-30-85-85 % v/v). Analýza probíhala při 275 nm a celková doba analýzy trvala 5,5 minut. Správnost (relativní chyba) byla v rozmezí 0,05 - 2,73 % a přesnost (relativní směrodatná odchylka) byla v rozmezí 2,38 - 5,79 %. Hodnoty LOD byly následující: 9,25·10-4 mg·ml- 1 pro paracetamol, 2,15·10-4 mg·ml-1 pro kofein a 7,93·10- 4 mg·ml-1 pro guaifenesin a hodnoty pro LOQ byly 3,08·10-3 mg·ml-1 pro paracetamol, 7,17·10-4 mg·ml-1 pro kofein a 2,64·10- 3 mg·ml-1 pro guaifenesin. Klíčová slova:...
|
host ::
RSS.