Název:
Analýza imunitní odpovědi na infekci Actinobacillus pleuropneumoniae
Autoři:
Jarošová, Rea Typ dokumentu: Disertační práce
Rok:
2022
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) je specifický respirační patogen a etiologické agens pleuropneumonie prasat, vysoce nakažlivého onemocnění, které způsobuje významné globální ekonomické ztráty, i přes dostupnost komerčních vakcín proti tomuto onemocnění. Experimentální část této práce je koncipována ze dvou dílčích hledisek. První, zabývající se zkoumáním nespecifických imunitních mechanismů a druhé, věnované imunizaci prasat proti infekci APP. Prvotními cíli bylo optimalizovat metodu kryopreservace plicní tkáně a následně pomocí imunohistochemie spolu s inovativní metodou MALDI MSI detekovat zánětlivé mediátory ve tkáních infikovaných prasat. Hlavním cílem bylo zjistit, zda jsou za produkci těchto zánětlivých mediátorů zodpovědné specifické populace CD163 pozitivních monocytů anebo makrofágů. Druhým stěžejním cílem bylo porovnat schopnost různých adjuvancií modulovat imunitní odpověď ve vztahu k cestě aplikace vakcíny a tyto poznatky následně zhodnotit v souvislosti s nežádoucími lokálními reakcemi a s ochranou prasat v provokačním testu. Výsledky ukázaly, že: 1) nejvhodnější metodou kryopreservace plicní tkáně je instilace plicního parenchymu směsí kryoprotektiva O.C.T. s fosfátem pufrovaným fyziologickým roztokem v poměru 1:1 a zmrazení v přechlazeném n-heptanu umístěném na suchém ledu; 2) pomocí MALDI MSI lze detekovat prostorovou distribuci zánětlivých mediátorů ve tkáních infikovaných prasat a tuto metodu lze použít k doplnění současných metod; 3) zánětlivé CD163 pozitivní monocyty pravděpodobně nepřispívají ke zvýšeným hladinám cytokinů, ale jsou zdrojem zánětlivých mediátorů, zejména interleukinu 1beta v místě zánětu; 4) intradermální aplikace vakcíny obsahující adjuvans na bázi minerálního oleje Montanide ISA 201 VG (Seppic, Francie) je více reaktogenní, o trochu méně imunogenní, avšak poskytuje účinnější ochranu v provokačním testu, než intramuskulární podání vakcíny.Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) is a specific respiratory pathogen and etiological agent of swine pleuropneumonia, a highly contagious disease that causes significant global economic losses, despite the availability of commercial vaccines against the disease. The experimental part of this work is conceived from two partial points of view: The first, dealing with the investigation of nonspecific immune mechanisms, and the second, dedicated to the immunization of pigs against APP. The primary goals were to optimize the method of cryopreservation of lung tissue and subsequently, using immunohistochemical analysis together with the innovative MALDI MSI method, to detect inflammatory mediators in the tissues of infected pigs. The main objective was to determine, whether specific populations of CD163 positive inflammatory monocytes and – or macrophages are responsible for the production of these inflammatory mediators. The second main objective was to compare the ability of different adjuvants to modulate the immune response in relation to the route of vaccine administration and to evaluate these findings in relation to adverse local reactions and the protection of pigs in the challenge test. The results showed that: 1) the most suitable method of cryopreservation of lung tissue is the instillation of a mixture of cryoprotectant O.C.T. with phosphate buffered saline 1: 1 into the lung parenchyma and freezing in supercooled nheptane placed on dry ice; 2) spatial distribution of inflammatory mediators in the tissues of infected pigs can be detected by MALDI MSI and this method can be used to supplement the current methods; 3) inflammatory CD163 positive monocytes are unlikely to contribute to elevated plasma cytokine levels. However, they are source of inflammatory mediators, especially interleukin 1beta at the site of inflammation; 4) intradermal administration of vaccine with the mineral oil adjuvant Montanide ISA 201 VG (Seppic, France) is more reactogenic and slightly less immunogenic; however, it provides more effective protection in the challenge test than intramuscular administration of the vaccine.
Klíčová slova:
Actinobacillus pleuropneumoniae; immunity; imunita; pig; prase
host ::
