Název: Optimalizace izolace mutantního proteinu p53 a jeho DNA vazebné vlastnosti
Překlad názvu: Optimization of p53 mutant protein isolation and its DNA binding properties
Autoři: Osadchuk, Olha ; Zemanová, Jana (oponent) ; Brázda, Václav (vedoucí práce)
Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok: 2020
Jazyk: eng
Nakladatel: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstrakt: [eng] [cze]
Protein p53 je jednou z nejdůležitějších molekul v lidském těle. P53 reguluje celou řadu procesů v buňce, jako je například oprava DNA, buněčný cyklus nebo indukce apoptózy. Protein p53 je známý i jako „strážce genomu“. DNA vazebné schopnosti proteinu p53 jsou důležité pro normální vývoj a růst buňky. Mutace genu pro p53 mohou vést ke ztrátě jeho DNA vazebných vlastností a funkce nádorového supresoru, což muže způsobit rozvoj rakoviny. Teoretická část této diplomové práce je zaměřena na popis vlastností, funkce a mechanismus aktivace proteinu p53 a popis lokálních sekundárních struktur DNA. Hlavním cílem experimentální části byla produkce čtyř mutantních forem proteinů p53 a wild-type p53 proteinu a studium jejich vazebných vlastnosti s různými lokálními sekundárními strukturami DNA. Pomoci Gateway klonovacího systému byly připraveny čtyři expresní vektory, které byly použity pro produkci proteinů v bakteriálním expresním systému. Celkem byly úspěšně připraveny čtyři mutantní formy a wild-type p53 protein. Jejich vazebné vlastnosti byly studovány gelovou retardační analýzu. Výsledky naznačují různé DNA-vazebné vlastnosti wild-type p53 a studovaných mutantních forem tohoto proteinu. Všechny mutantní proteiny ztratily schopnost sekvenčně specificky vázat DNA, zatímco nespecifická interakce s DNA byla pozorována u tří ze čtyř mutantních forem. Jeden ze studovaných mutantních proteinů se vázal jenom na superhelikální formu DNA. P53 protein is one of the most important molecules in the human body. It is responsible for several cellular processes such as DNA repair, cell cycle or induction of apoptosis. P53 is also known as “guardian of the genome”. DNA binding ability of p53 is important for the normal cell development and growth. Different mutation of TP53 gene, may cause lost of p53 binding ability andits tumor suppressor function that may lead to the cancer development. The theoretical part of this diploma thesis, is focused on the characterization of main properties, function and mechanism of p53 protein activation and description oflocal secondary DNA structures. The main goal of the experimental part was production of four mutant forms of p53 protein and wild-type p53 protein and studying its binding properties with different local secondary DNA structures. Using Gateway cloning system, four expression vectors were prepared and used for protein production in the bacterial expression system. In total, four mutant and one wild-type p53 protein were prepared and their DNA binding properties were evaluated by Electrophoretic Mobility-Shift Assay The results suggest different DNA-binding properties of wild-type p53 and mutant forms of this protein. All studied mutant proteins lost ability to bind DNA sequence specifically, whereas non- specific interaction with DNA were sustained for three out of four mutant forms. One of the studied mutant proteins showed preference for superhelical form of DNA.
Klíčová slova: gateway cloning; mutant p53; protein p53; gatway klonování; mutantní p53; proteín p53

Instituce: Vysoké učení technické v Brně (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Plný text je dostupný v Digitální knihovně VUT.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/11012/190402

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-561222


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Vysoké učení technické v Brně
Vysokoškolské kvalifikační práce > Diplomové práce