Original title: Detekce solubilního endoglinu v Lab-in-Syrige
Translated title: Detection of soluble endogline in Lab-in-Syringe
Authors: Ilićová, Marie ; Svobodová, Zuzana (advisor) ; Chocholouš, Petr (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2023
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Hlavním úkolem diplomové práce bylo vyvinout automatizované metody pro izolaci endoglinu ze vzorku pomocí magnetického imunosorbentu v Lab-In-Syringe s následnou imunodetekcí na affiblotu. Teoretická část se věnuje endoglinu v jeho membránové i solubilní formě, zejména jejich souvislostem s endotelovou dysfunkcí. Je zde také stručně popsán princip anti-endoglinové terapie pomocí monoklonální protilátky carotuximab neboli TRC105. Dále jsou v teoretické části shrnuty informace o technikách Lab-In-Syringe a affiblot. Poslední kapitola pojednává o biofunkcionalizaci magnetických částic pomocí protilátek za účelem přípravy magnetického imunosorbentu a jeho využití pro izolaci proteinu ze vzorku. V experimentální části jsou nejprve popsány postupy pro otestování prototypů affiblotu. Hlavním cílem bylo vyvinout metodu pro přípravu anti-endoglinového magnetického imunosorbentu a zvýšit kapacitu metody jejím převedením z 1ml do 5ml stříkačky (upscaling). Dále byly vyvinuty metody pro izolaci solubilní formy lidského endoglinu z kultivačního média s obsahem léčiva TRC105, které interferuje s jeho imunodetekcí, opět pro 1ml a 5ml stříkačku. Byla provedena řada experimentů za účelem optimalizace metod v Lab-In-Syringe a na závěr byly metody vyzkoušeny se vzorky a výsledky se hodnotily na affiblotu. Klíčová... The main target of the thesis was to develop an automated method for the isolation of endoglin from a sample using a magnetic immunosorbent in Lab-In-Syringe with subsequent immunodetection by affiblot. The theoretical part deals with endoglin, in its membrane and soluble form, especially with their connection to endothelial dysfunction. The principles of anti-endoglin therapy using the monoclonal antibody carotuximab or TRC105 are also briefly described here. Furthermore, the theoretical part summarizes the basics of the automation in Lab-In-Syringe and of the affiblot technique, their principles, and their applications. The last chapter deals with the biofunctionalization of magnetic particles by antibodies in order to prepare a magnetic immunosorbent which is used for the isolation of proteins from a complex sample. The experimental part describes methods for testing the affiblot prototypes. The main goal was to develop a method for the preparation of anti-endoglin magnetic immunosorbent and to increase the capacity of the method by upscaling it from a 1 ml to a 5 ml syringe. Furthermore, methods for the isolation of the soluble form of human endoglin from the culture medium containing the drug TRC105 were developed for 1 ml and 5 ml syringes. Various experiments were carried out to optimize the...
Keywords: Antibodies; Lab-in-Syrige; magnetic particles; Lab-in-Syrige; magnetické částice; Protilátky

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/186995

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-537180


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Master’s theses