Název:
Studium vybraných houbových toxinů Amanita muscaria.
Překlad názvu:
Study of selected mushroom toxins of Amanita muscaria.
Autoři:
Adámek, Michal ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Hložek, Tomáš (oponent) Typ dokumentu: Bakalářské práce
Rok:
2023
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Předkládaná bakalářská práce byla zaměřena na vývoj HPLC-MS/MS metody pro separaci a případnou kvantifikaci hlavních toxinů Amanita muscaria (muchomůrky červené). Po optimalizaci podmínek tandemové hmotnostní detekce byly nalezeny MRM přechody pro muskarin (174 → 57), kyselinu ibotenovou (159 → 113), muscimol (115 → 98) a cykloserin (103 → 75), který byl použit jako interní standard. Měření proběhlo na kolonách Luna Omega 1,6 µm polar C18 v módu RP-HPLC s optimalizovaným složením mobilní fáze 2:98 (v/v) acetonitril/deionizovaná voda s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí v obou složkách a Ascentis Express RP-Amide v módu HILIC s optimalizovaným složením mobilní fáze 70:30 (v/v) methanol/deionizovaná voda s přídavkem 0,5% kyseliny mravenčí v obou složkách. Za optimalizovaných podmínek byly proměřeny kalibrační křivky s rozsahem 0,01 až 10 µg/ml pro RP-HPLC a 0,01 až 25 µg/ml pro HILIC. Byly proměřeny roztoky moči a krevního séra pacienta s otravou Amanita muscaria včetně naředěných verzí těchto roztoků. V moči pacienta byla nalezena kyselina ibotenová a muscimol, v krevním séru muskarin, kyselina ibotenová a muscimol. RP-HPLC metoda poskytla užší píky s nižší retencí a nižší úrovní šumu. Byla provedena extrakce studovaných toxinů z lyofilizovaného klobouku a třeně Amanita muscaria a pomocí metody...The presented bachelor's thesis was focused on the development of an HPLC-MS/MS method for the separation and eventual quantification of the main toxins of Amanita muscaria (fly agaric). After optimization of tandem mass detection conditions, MRM transitions were found for muscarine (174 → 57), ibotenic acid (159 → 113), muscimol (115 → 98) and cycloserine (103 → 75), which was used as an internal standard. Measurements were performed on Luna Omega 1.6 µm polar C18 column in RP-HPLC mode with an optimized mobile phase composition of 2:98 (v/v) acetonitrile/deionized water with the addition of 0.1% formic acid in both components and Ascentis Express RP- Amide in HILIC mode with an optimized mobile phase composed of 70:30 (v/v) methanol/deionized water with the addition of 0.5% formic acid in both components. Calibration curves with a range of 0.01 to 10 µg/ml for RP-HPLC and 0.01 to 25 µg/ml for HILIC were measured under optimized conditions. Urine and blood serum solutions of a patient with Amanita muscaria poisoning, including diluted versions of these solutions, were measured. Ibotenic acid and muscimol were found in the patient's urine, muscarine, ibotenic acid and muscimol in the blood serum. The RP-HPLC method gave narrower peaks with lower retentions and lower noise levels. The studied toxins...
Klíčová slova:
Amanita muscaria; HPLC; ibotenová kyselina; klobouk; krevní sérum; moč; MS; muscimol; muskarin; třeň; Amanita muscaria; blood serum; cap; HPLC; ibotenic acid; MS; muscarine; muscimole; stipe; urine