Název: Studium buněčných proteinových interakcí pomocí pokročilých metod fluorescenční mikroskopie
Překlad názvu: Cellular protein interactions studied by advanced fluorescence imaging methods
Autoři: Belejová, Sára ; Heřman, Petr (vedoucí práce) ; Krůšek, Jan (oponent)
Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok: 2023
Jazyk: eng
Abstrakt: [eng] [cze]
This thesis studies an important tumor suppressor, p53, and its interac�on partner, nucleophosmin (NPM), in living cells. Proteins are studied using fluorescence confocal microscopy techniques such as fluorescence life�me imaging and fluorescence anisotropy measurements. The primary focus of the research is on a specific variant of the p53 protein called p53-L344P, which is generated by a point muta�on from its original form (p53wt). We inves�gate the oligomeriza�on state of p53-L344P in vivo, which appears to be monomeric, confirming the results of in vitro experiments from other studies. Further, we show that p53wt and p53-L344P can form complexes with each other. We compare the interac�on of the NPMmutA protein with p53wt and p53-L344P proteins. Our findings reveal that the L344P mutant is not transferred from the nucleus to the cytoplasm in the presence of NPMmut, as is p53wt. Furthermore, we inves�gate the oligomeriza�on state of p53wt when it is in the cytoplasm and propose avenues for further research into this interac�on. Táto diplomová práca sa venuje štúdiu dôležitého nádorového supresoru, p53, a jeho interakčného partnera, nukleofosminu (NPM) v živých bunkách. Proteíny sú skúmané pomocou fluorescenčných konfokálnych techník ako sú: mikroskopia zobrazovania doby života a zobrazovanie fluorescenčnej anizotropie. Práca je primárne zameraná na L344P mutant proteínu p53wt a jeho interakciu s NPM. V práci skúmame oligomerizačný stav proteínu p53-L344P in vivo, ktorý sa javí byť za fyziologických podmienok monomerický potvrdzujúc výsledky in vitro meraní iných štúdií. Ďalej ukazujeme, že proteíny p53wt a p53-L344P spolu tvoria v bunečnom jadre komplexy. Neskôr porovnávame interakciu proteínu NPMmutA s p53wt a p53-L344P. V našich zisteniach ukazujeme, že mutant L344P nie je pomocou NPMmut vyťahovaný z bunečného jadra do cytoplazmy ako je tomu v prípade p53wt. V práci tak�ež skúmame oligomerizačný stav proteínu p53wt, potom, čo bol vy�ahnutý do cytoplazmy. V diskusii navrhujeme ďalšie cesty skúmania interakcie týchto dvoch proteínov.
Klíčová slova: Konfokální mikroskopie|časově rozlišená fluorescence|fluorescenční anizotropie|FLIM|FRET|homoFRET|fluorescenční proteiny|proteinové interakce; Confocal microscopy|time-resolved fluorescence|fluorescence anisotropy|FLIM|FRET|homoFRET|fluorescence proteins|protein interactions

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/183886

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-534271


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Diplomové práce