Original title:
Stanovení glutathionu v rostlinných vzorcích pomocí kapilární elektroforézy
Translated title:
Determination of glutathion in plant samples using capillary electrophoresis
Authors:
Skála, Michael ; Křížek, Tomáš (advisor) ; Kubíčková, Anna (referee) Document type: Bachelor's theses
Year:
2023
Language:
cze Abstract:
[cze][eng] Tato práce vychází z dříve publikované metody pro stanovení obou forem glutathionu pomocí kapilární zónové elektroforézy opatřené UV spektrometrickým detektorem. Teoretická část popisuje biologické a biochemické funkce glutathionu. Dále teoretická část shrnuje historické metody stanovení glutathionu, jejich přesnost, správnost a spolehlivost se speciálním zaměřením na metody elektroforetické, a zvláště pak na kapilární zónovou elektroforézu. Je popsán princip kapilární zónové elektroforézy. Také řeší problematiku různých typů vzorků, speciálně pak rostlinné vzorky. Na závěr uvádí metodu pro stanovení redukované a oxidované formy glutathionu, ze které tato práce vychází. V praktické části je popsán postup vývoje a optimalizace samotné metody. Nejprve bylo testováno složení základního elektrolytu, jeho iontová síla, byly porovnávány dva elektrolyty - s NaCl a bez NaCl, byly pozorovány minimální rozdíly, proto byl NaCl ze základního elektrolytu vyloučen. Dále byla určována optimální koncentrace hexadimethrin bromidu. Byl sledován vliv koncentrace hexadimethrin bromidu na rychlost elektroosmotického toku. Byla sestavena kalibrační křivka pro různé koncentrace analytů ve vodě, byla zjištěna opakovatelnost, LOD a LOQ. Následně byla určována pozice píků v elektroferogramech reálného vzorku extraktu z...This work is based on a previously published method for determination of both glutathione forms by capillary zone electrophoresis equipped with UV spectrometric detector. Theoretical part described biological and biochemical functions of glutathione as a molecule. It mentioned historically used methods for glutathione determination, their accuracy, precision and reliability and focused on electrophoretic methods, especially capillary zone electrophoresis. Basic principles of capillary zone electrophoresis were described, followed by an overview of approaches to treatment of different types of samples, with special focus on plant samples. At the end, method this work was based on was described. The experimental part describes the development and optimization of this method. Firstly, optimum chemical composition and ionic strength of background electrolyte were determined - two electrolytes were compared, with NaCl and without NaCl - no significant differences were observed, so NaCl was excluded from BGE. Next, optimum concentration of hexadimethrine bromide was determined. The effect of HDB concentration on electroosmotic flow was investigated. Calibration curve for different concentrations of analytes in water was constructed and repeatability, LOD and LOQ of the method were determined....
Keywords:
capillary electrophoresis; glutathion; glutathion; kapilární elektroforéza
Institution: Charles University Faculties (theses)
(web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository. Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/181705