Original title:
miRNA analýza malých extracelulárních vezikul izolovaných z plasmy po dietní intervenci
Translated title:
miRNA analysis of small extracellular vesicles isolated from plasma after diet intervention
Authors:
Kratochvílová, Michala ; Koc, Michal (advisor) ; Šrámek, Jan (referee) Document type: Master’s theses
Year:
2022
Language:
cze Abstract:
[cze][eng] Cílem této diplomové práce bylo zavedení protokolu izolace malých extracelulárních vezikul (sEV) z lidské plasmy. Vzorky plasmy byly odebírány od 44 zdravých žen, které v rámci klinické studie podstoupily dietní intervenci 60 h hladovění. Tyto ženy byly na základě BMI rozděleny do skupin hubené a obézní. Z plasmy odebrané před a po dietní intervenci byly metodou precipitace pomocí polyethylenglykolu vyizolovány sEV, které byly následně charakterizovány z hlediska jejich velikosti a koncentrace ve vzorku. U hubených i obézních žen byl počet sEV v plasmě stejný a nezměnil se ani v závislosti na dietní intervenci. V důsledku 60 h hladovění došlo ke změně velikosti sEV u skupiny hubených. Dalším cílem byla analýza miRNA exprese v sEV. Obsah sEV se v expresi některých analyzovaných miRNA lišil mezi skupinou hubených a obézních žen. Rozdíly byly pozorovány konkrétně v expresi hsa-miR-17-5p, hsa-miR-20a-5p a hsa-let-7b-5p. 60 h hladovění vedlo ke zvýšené expresi hsa- miR-5100 u skupiny hubených a hsa-miR-27a-3p a hsa-miR-27b-3p u skupiny obézních. Tyto změny navozené dietní intervencí ale nebyly vyhodnoceny jako statisticky významné. Hladovění tedy ani u jedné skupiny nevedlo k výrazným změnám miRNA obsahu v sEV. Odlišné miRNA exprese byly patrné pouze mezi skupinami na základě rozdílného BMI. Klíčová...The aim of this thesis was to establish a protocol for the isolation of small extracellular vesicles (sEVs) from human plasma. Plasma samples were collected from 44 healthy women who underwent a 60-hour dietary intervention in the form of fasting as part of a clinical trial. These women were divided into two groups based on their BMI - lean and obese. Plasma was collected from each participant before and after the dietary intervention and sEVs were isolated using the polyethylene glycol precipitation method. Each sample was then characterized by the size of sEVs and their concentration. The amount of sEVs in plasma before the dietary intervention was the same for both groups and did not change with dietary intervention. However, the 60-hour fasting resulted in a change in sEVs size in the lean group. Another goal of this thesis was to analyze miRNA expression in sEVs. There were differences found in the expression of certain miRNA between the two groups. More specifically, differences were observed in the expression of hsa-miR-17-5p, hsa-miR-20a-5p and hsa-let-7b-5p. The 60-hour fasting period resulted in an increased expression of hsa-miR-5100 in the lean group and hsa- miR-27a-3p and hsa-miR-27b-3p in the obese group. However, these changes induced by the dietary intervention were not evaluated...
Keywords:
exosomes; fasting; isolation of exosomes; miRNA; small extracellular vesicles; exosomy; hladovění; izolace exosomů; malé extracelulární vezikuly; miRNA
Institution: Charles University Faculties (theses)
(web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository. Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/176633