Original title:
Využití Hsp90 jako cíle biologické terapie nádorů
Translated title:
Use of Hsp90 as a target of biological therapy of tumors
Authors:
Bednárová, Kristína ; Bouchalová,, Pavla (referee) ; Müller, Petr (advisor) Document type: Master’s theses
Year:
2022
Language:
slo Publisher:
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická Abstract:
[slo][eng]
Konjugáty protilátka-liečivo (ADC) reprezentujú relatívne novú triedu vysoko účinných protinádorových liečiv. Vďaka vysoko špecifickým monoklonálnym protilátkam sú schopné doručiť cytotoxický náklad priamo do nádorových buniek a tým minimalizovať poškodenie zdravých buniek. Jedným z hlavných faktorov, na ktorých závisí terapeutická účinnosť je výber vhodného antigénu, ktorý po väzbe konjugátu podlieha internalizácii. Ako potenciálne ciele boli vybrané proteíny Hsp90 a c-Met. Hsp90 predstavuje molekulárny chaperón, ktorý je nadmerne exprimovaný v nádorových bunkách a navyše môže byť translokovaný na membránu. Hsp90 prispieva k angiogenéze, motilite nádorových buniek alebo tvorbe metastáz. Druhý spomenutý, C-Met, predstavuje tyrozínkinázový receptor, ktorý hrá ústrednú úlohu v epiteliálnej morfogenéze a malígnej transformácii. Jeho zvýšená aktivita indukuje dráhy zodpovedné za proliferáciu, inváziu a migráciu malígnych buniek. V diplomovej práci bol študovaný potenciál využitia protilátok s anti-Hsp90 a anti-c-Met aktivitou v protinádorovej terapii. Experimentálna časť práce zahŕňala purifikáciu protilátky EEV1-2.1 s anti-Hsp90 aktivitou a jej následnú charakterizáciu. Ďalej zahŕňala charakterizáciu a selekciu dostupných klonov anti-c-Met protilátky. Zaoberala sa tiež výberom a optimalizáciou správnej stratégie konjugácie. Aktivita protilátok a od nich odvodených konjugátov bola skúmaná prostredníctvom fluorescenčnej mikroskopie či prietokovej cytometrie. In vivo experimenty boli ďalej zamerané na overenie účinnosti ADC sledovaním miery inhibície proliferácie vybraných nádorových línií. Výsledky diplomovej práce odhalili, že protilátka EEV1 neprechádza do buniek antigénom sprostredkovanou cestou, a nie je tak vhodná pre použite v konjugácii s cytostatickým liečivom. Na druhej strane, ADC konjugáty anti-c-Met protilátky vykazovali vysokú afinitu voči natívnemu antigénu, dochádzalo k ich internalizácii cez väzbu na antigén a navyše inhibovali proliferáciu c-Met exprimujúcich buniek OE33.
Antibody-drug conjugates (ADCs) represent a relatively new class of highly potent anti-tumor drugs. Thanks to highly specific monoclonal antibodies, ADCs are able to deliver a cytotoxic payload directly to tumor cells and thus minimize damage to healthy cells. Therapeutic efficacy depends on the selection of an appropriate antigen that undergoes internalization upon conjugate binding. For this project, pro-oncogenic Hsp90 and c-Met were selected as potential targets. Hsp90 is a molecular chaperone that is overexpressed in tumor cells and, in addition, can be translocated to the membrane of these cells. Overexpressed Hsp90 contributes to angiogenesis, tumor cell motility or metastasis. C-Met is a receptor tyrosine kinase that plays a central role in epithelial morphogenesis and malignant transformation. Its increased activity induces pathways responsible for the proliferation, invasion and migration of malignant cells. The aim of the diploma thesis was to study the potential use of antibodies with anti-Hsp90 and anti-c-Met activities in anti-tumor therapy. The experimental part involved the purification of the EEV1-2.1 antibody with anti-Hsp90 activity and its subsequent characterization. Furthermore, it included the characterization and selection of anti-c-Met antibody clones. It was also focused on selection and optimization of the right conjugation strategy. The activity of the antibodies and their conjugates was examined by fluorescence microscopy and flow cytometry. In vivo experiments were further aimed at verifying the efficacy of ADC by monitoring the rate of inhibition of proliferation of selected tumor cell lines. The results revealed that the EEV1 antibody does not enter the cells specifically by antigen-mediated way, and is therefore not suitable for use in conjugation with a cytostatic drug. On the other hand, anti-c-Met antibody ADC conjugates exhibit high affinity for native antigen, internalization through antigen binding, and additionally inhibited proliferation of c-Met overexpressing OE33 cells.
Keywords:
Antibody-drug conjugates; c-Met; conjugation; eHsp90; linker; MMAE; monoclonal antibodies; targeted cancer therapy
Institution: Brno University of Technology
(web)
Document availability information: Fulltext is available in the Brno University of Technology Digital Library. Original record: http://hdl.handle.net/11012/204655
guest ::
