Original title: Analýza změn sekretomu hepatocytárních buněk při zvýšené koncentraci homocysteinu pomocí dvojrozměrné elektroforézy
Translated title: 2-DE analysis of hepatocyte secretome under hyperhomocysteinemia
Authors: Chrudinová, Martina ; Ryšlavá, Helena (advisor) ; Novák, Petr (referee)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2012
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Homocystein je aminokyselina, která obsahuje ve své struktuře síru, a je odvozená od methioninu. Jedná se o nekódovanou aminokyselinu, která je součástí několika metabolických drah a vyskytuje se v krevní plazmě. Zvýšená koncentrace homocysteinu v krvi doprovází řadu onemocnění, jako jsou kardiovaskulární a neurodegenerativní choroby, cukrovka nebo osteoporóza. Proto v posledních dvou desetiletích dochází k velmi intenzivnímu zkoumání mechanizmů souvisejících s metabolizmem homocysteinu. V rámci této bakalářské práce byla provedena proteomická analýza sekretomu jaterních buněk, konkrétně byly porovnávány proteiny sekretované primárními lidskými hepatocyty vystavenými 2mM koncentraci homocysteinu s proteiny sekretovanými stejnými buňkami v prostředí bez přidaného homocysteinu. Analýza byla provedena pomocí dvojrozměrné elektroforézy. Buňky byly 48 hodin kultivovány v bezsérovém médiu (kontrolní skupina a skupina s 2mM homocysteinem) a proteiny sekretované do média byly vysráženy acetonitrilem. Byla provedena dvojrozměrná elektroforéza. Výsledné proteinové mapy byly vyhodnocovány pomocí počítačového programu PDQuest Advanced 8.0.1 2D Gel Analysis Software (Bio-Rad, USA). Jako rozdílně sekretované proteiny byly určeny ty, jejichž skvrny měly intenzitu větší než 500 ppm a u nichž byl rozdíl v intenzitě mezi... Homocysteine is a plasmatic, sulphur-containing amino acid derived from methionin. It is an amino acid not used in protein synthesis and it's role is to serve as an intermediate in numerous metabolic pathaways. Elevated concentrations of homocysteine in blood are associated with many pathologies, as cardiovascular and neurodegenerative diseases, diabetes or osteoporosis, thus homocysteine has been a common subject of many biochemical experiments in last two decades. For this bachelor thesis, the proteomic comparison of proteins secreted by primary human hepatocytes under 2mM homocysteine and primary human hepatocytes with no homocysteine added to the incubation medium was made, using large-gel two-dimensional electrophoresis. Hepatocytes were incubated in serum free medium for 48 hours. Proteins secreted to medium were precipitated by acetonitrile. Two dimensional electrophoresis was made. Protein maps were analysed by PDQuest Advanced 8.0.1 2D Gel Analysis Software (Bio-Rad, USA). Search criteria for differentially secreted proteins were three-fold change at the signicance level 95 %, Student's t-test. These proteins were cut off the preparative gels and identified by tandem mass spectrometry. In total, there were 17 spots equal to 15 proteins found as differentially exprimed proteins. Among these...
Keywords: Homocysteine; hyperhomocysteinemia; primary hepatocytes; proteomics; secretome; tandem mass spectrometry; two-dimensional gel electrophoresis; dvojrozměrná elektroforéza; Homocystein; hyperhomocysteinemie; primární hepatocyty; proteomika; sekretom; tandemová hmotnostní spektrometrie

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/46303

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-480360


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses