Original title: Příprava reportérové buněčné linie pro ověření biologické aktivity rekombinantních proteinů
Translated title: Preparation of reporter cell line for validation of recombinant protein biological activity
Authors: Kozojedová, Petra ; Vaněk, Ondřej (advisor) ; Moserová, Michaela (referee)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2021
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
NK buňky patří mezi imunitní buňky zprostředkovávající nespecifickou imunitní odpověď organismu. Exprimují na svém povrchu řadu ligand-specifických aktivačních či inhibičních receptorů, mezi které patří přirozeně cytotoxický aktivační receptor NKp30, indukující po interakci s ligandem cytotoxickou odpověď. Receptor NKp30 má jednu ligand vazebnou imunoglobulinu podobnou extracelulární doménu s krátkou "stalk" doménou, která umožňuje oligomerizaci extracelulární domény receptoru NKp30, což vede k posílení interakce ligand- receptor a ovlivnění signalizace vedoucí k aktivaci buňky. Tato práce se zabývá přípravou konstruktů inspirovaných technologií chimerních antigenních receptorů nesoucích extracelulární doménu receptoru NKp30 se "stalk" doménou či pouze ligand vaznou doménu pro ověření biologické aktivity konstruktů po expresi na buněčné membráně. Byly připraveny dva vektory pro expresi konstruktů inspirovaných chimerními antigenními receptory s geny pro extracelulární doménu receptoru NKp30. Pro ověření biologické aktivity různých konstruktů byla plasmidová DNA kódující připravené konstrukty transientně transfekována do buněk Jurkat. Klíčová slova: NK buňky, NKp30, reportérová buněčná linie, rekombinantní protein, chimerní antigenní receptor Natural killer cells belong to immune cells mediating non-specific immune response. On their surface, natural killer cells express many ligand-specific activation or inhibition receptors, among which belongs natural cytotoxicity activation receptor NKp30, which is able to trigger cytotoxic immune response upon interaction with its ligands. Natural cytotoxicity receptor NKp30 comprises of one immunoglobulin-like ligand-binding extracellular domain with short stalk domain, allowing the extracellular domain of NKp30 receptor to form oligomers, which leads to strengthening of ligand-receptor interaction. Furthermore, signalization leading to cell activation is affected by oligomerization of the extracellular domain of NKp30 receptor. This thesis focuses on preparation of constructs inspired by chimeric antigen receptor theory that carry extracellular domain of NKp30 receptor with stalk domain or only with ligand- binding domain and on validation of biological activity of prepared constructs after expression on the cell membrane. Two vectors for expression of the constructs inspired by chimeric antigen receptors carrying genes for extracellular domain of NKp30 receptor were prepared and to validate their biological activity, they were transfected into Jurkat cells. Key words: NK cells, NKp30, reporter...
Keywords: flow cytometry; immunotherapy; nanobodies; NK cells; reporter cell line; imunoterapie; nanoprotilátky; NK buňky; průtoková cytometrie; reportérová buněčná linie

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/150890

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-452560


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses