Original title: Studium vlivu N-vázané glykosylace na funkci nanoprotilátky cílící receptor HER2
Translated title: Study of the role of N-glycosylation in function of anti-HER2 nanobody
Authors: Chytrá, Gabriela ; Vaněk, Ondřej (advisor) ; Černá, Věra (referee)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2021
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Nádorová onemocnění jsou v současnosti velmi rozšířená a jejich kompletní léčba vyžaduje eliminaci všech nádorových buněk v organismu. Jedním ze způsobu léčby je imunoterapie, která se snaží vyvolat imunitní odpověď a aktivovat tak protinádorové obranné mechanismy organismu. K tomu se používají terapeutické protilátky, které cílí markery na nádorových buňkách. Jeden z těchto markerů je receptor HER2, jehož exprese je zvýšená například na povrchu nádorových buněk karcinomu prsu. Jako terapeutické protilátky se často používají humanizované monoklonální protilátky, ale používají se i jiné konstrukty, jako jsou bispecifické částice, nanoprotilátky či jejich analogy. Nanoprotilátkami se označují rekombinantní variabilní domény odvozené od protilátek, které ve své struktuře postrádají lehké řetězce. V přírodě se takové protilátky přirozeně vyskytují například u savců z čeledi velbloudovití nebo u některých paryb, jako jsou žraloci. Tato práce popisuje přípravu různých glykoforem nanoprotilátky antiHER2 a ověření vlivu této glykosylace na vazbu nanoprotilátky na povrch buněčné linie exprimující na svém povrchu receptor HER2. Byla připravena nanoprotilátka s komplexní přirozenou glykosylací (produkovaná v buněčné linii HEK293T) a nanoprotilátka s homogenní glykosylací (produkovaná v buněčné linii HEK293S... Cancer is currently widespread disease and its successful treatment requires the elimination of all cancer cells in the body. One method of cancer treatment is immunotherapy, which seeks to elicit an immune response and activate the body's anti-tumor defense mechanisms. Therapeutic antibodies are used to target tumor cells markers. One of such markers is the HER2 receptor which is overexpressed for example on the surface of breast cancer cells. Humanized monoclonal antibodies are often used as therapeutic antibodies, but other constructs such as bispecific particles, nanobodies or their analogs are also used. Nanobodies refer to recombinant antibody-derived variable domains that lack light chains in their structure. Such antibodies occur naturally, for example in camelid mammals or in certain cartilaginous fishes, such as sharks. This work describes the preparation of various glycoforms of the antiHER2 nanobody and verification of the effect of the glycosylation on the ability of nanobody to bind to the cell line that is overexpressing the HER2 receptor on its surface. A nanobody with complex natural glycosylation (produced in the HEK293T cell line) and a nanobody with uniform glycosylation (produced in the HEK293S GnTI- cell line) were prepared. The work also describes the cloning and production...
Keywords: HEK293; HER2; mutation; N-glycosylation; nanobody; recombinant protein expression; HEK293; HER2; mutace; N-glykosylace; nanoprotilátka; rekombinantní exprese proteinů

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/128289

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-448675


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses