Original title: Proteiny interagující s kyslíkem a jeho reaktivními formami u Naegleria gruberi
Translated title: Proteins interacting with oxygen and its reactive species in Naegleria gruberi
Authors: Malych, Ronald ; Šuťák, Róbert (advisor) ; Rohlena, Jakub (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2020
Language: eng
Abstract: [eng] [cze]
Naegleria gruberi is a free-living non-pathogenic amoeba. It is a close relative to Naegleria fowleri, a pathogen that causes primary amoebic meningoencephalitis in humans (PAM). As a free-living organism, Naegleria gruberi is adapted to aerobic lifestyle but also possesses remarkable traits of anaerobic organism such as Fe-Fe hydrogenase capable of hydrogen production. This work focuses on three types of iron-containing proteins interacting with oxygen and its reactive species (ROS) that were uncovered in the genome of N. gruberi - hemerythrin, protoglobin and rubrerythrin. Studied proteins have been isolated and purified as recombinant proteins and antibodies have been produced against all three of them. We found a single homolog of rubrerythrin in the genome of N. gruberi and successfully localised it in the mitochondrion in contrast to hemerythrin and protoglobin that exhibit cytosolic localisation. In vitro characterization of these recombinant proteins included mainly size-exclusion chromatography and UV-vis spectrophotometry. Ability to bind oxygen was shown by spectral changes of recombinant hemerythrin purified under anaerobic conditions and recombinant protoglobin isolated aerobically. Western blot analysis revealed changes in expression levels of these proteins in N. gruberi cultivated... Naegleria gruberi je volně žijící nepatogenní améba. Je to blízký příbuzný patogenní Naegleria fowleri, která způsobuje primární amébovou meningoencefalitidu u lidí (PAM). Jako volně žijící organismus je Naegleria gruberi přizpůsobena aerobnímu způsobu života, ale má také některé pozoruhodné rysy anaerobního organismu, jako je např. přítomnost Fe-Fe hydrogenázy, která je schopná produkce vodíku. Tato práce se zaměřuje na tři typy železo obsahujících proteinů, interagujících s kyslíkem a jeho reaktivními formami (ROS), které byly odhaleny v genomu N. gruberi - hemerythrin, protoglobin a rubrerythrin. Studované proteiny byly izolovány a purifikovány jako rekombinantní proteiny, proti kterým byly vytvořeny protilátky. V genomu N. gruberi nalezený jediný homolog rubrerythrinu jsme úspěšně lokalizovali v mitochondrii, na rozdíl od hemerythrinu a protoglobinu, které vykazují cytosolickou lokalizaci. Charakterizace těchto rekombinantních proteinů in vitro zahrnovala hlavně chromatografii na molekulárních sítech a UV-vis spektrofotometrii. Schopnost vázat kyslík byla prokázána spektrálními změnami rekombinantního hemerythrinu, purifikovaného za anaerobních podmínek, a rekombinantního protoglobinu, izolovaného aerobně. Analýza western blot odhalila změny exprese těchto proteinů v N. gruberi kultivovaných se...

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/122700

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-448473


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Master’s theses