Original title: Optimalizace metody stanovení enzymové aktivity flavinových monooxygenas
Translated title: Optimization of flavin monooxygenase activity assay
Authors: Hovorková, Adéla ; Dračínská, Helena (advisor) ; Heidingsfeld, Olga (referee)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2020
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Flavinové monooxygenasy, jako biotransformační enzymy katalyzující oxidaci širokého spektra cizorodých látek v organismech, byly dlouho v porovnání s cytochromy P450, rozsáhlejší skupinou biotransformačních enzymů, přehlíženy. Ke studiu metabolismu cizorodých látek se často užívají jaterní mikrosomy, které obsahují oba zmíněné biotransformační enzymy. Jejich katalytická aktivita se může z důvodu potřeby stejných kofaktorů překrývat, a proto je potřebné je vhodně rozlišit. Tato bakalářská práce se zabývá optimalizací metody pro stanovení enzymové aktivity flavinových monooxygenas v jaterních potkaních mikrosomech. Modelovou reakcí pro optimalizaci metody byla oxidace methyl-p-tolylsulfidu na methyl-p-tolylsulfoxid. Pro stanovení aktivity byly stanoveny nejvhodnější podmínky: prostředí o pH 9,5, 2mM methyl-p- tolylsulfid a 10minutová doba inkubace. Bylo zjištěno, že na oxidaci methyl-p-tolylsulfidu se podílejí i cytochromy P450, izoforma 1A1 nejvíce. Testovány byly i různé inhibitory obou výše zmíněných biotransformačních enzymů (kyselina lipoová, methimazol, Brij 35 a Triton X-100). Jako vhodný inhibitor katalytického účinku cytochromů P450 byl vybrán Brij 35, který neměl na rychlost oxidace katalyzovanou flavinovými oxygenasami žádný vliv. V závěru práce byla z prozatím neznámého důvodu opakovaně... Flavin monooxygenases, biotransformation enzymes catalyzing the oxidation of broad spectrum of xenobiotics, have long been overlooked compared to cytochromes P450, a larger group of biotransformation enzymes. Liver microsomes containing both flavin monooxygenases and cytochrome P450 are often used to study metabolism of xenobiotics. The catalytic aktivity of both enzymes may overlap due to the need of identical cofactors and it is therefore necessary to differentiate them appropriately. This bachelor thesis deals with the optimization of the method for the determination of enzyme activity of flavin monooxygenases in rat liver microsomes. Model reaction for optimization of the method was the oxidation of methyl p-tolyl sulfide to methyl p-tolyl sulfoxide. To determine the activity, the most suitable conditions were set: sample buffer with pH 9.5, 2 mM methyl p-tolyl sulfide and a 10 minute incubation time. It has been found that in the oxidation of methyl p-tolyl sulfide cytochromes P450 are also involved, mostly isoform 1A1. Various inhibitors of both of the above mentioned biotransformation enzymes (lipoic acid, methimazole, Brij 35 and Triton X-100) have also been tested. Brij 35 was selected as a suitable inhibitor of the catalytic action of cytochromes P450, because it had no effect on the rate...
Keywords: cytochromes P450; enzyme activity; flavin monooxygenases; methyl p-tolyl sulfide; methyl p-tolyl sulfoxide; rat liver microsomes; cytochromy P450; enzymová aktivita; flavinové monooxygenasy; methyl-p-tolylsulfid; methyl-p-tolylsulfoxid; potkaní jaterní mikrosomy

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/120001

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-434185


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses