Original title: Srovnání biotechnologických postupů přípravy čistých proteinů
Translated title: Comparison of biotechnological procedures for pure proteins preparation
Authors: Bušanski, Patrik ; Langová, Denisa (referee) ; Brázda, Václav (advisor)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2019
Language: slo
Publisher: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract: [slo] [eng]
Produkcia rekombinantných proteínov je biotechnologický proces, počas ktorého vznikajú proteíny v cudzorodom organizme manipuláciou genetickej informácie. Gén, ktorý kóduje žiadanú bielkovinu sa vyizoluje, vloží sa do expresného vektoru za vzniku rekombinantného plazmidu. Pomocou fyzikálnych alebo chemických metód sa následne plazmid transformuje do vhodného hostiteľa, kde sa realizuje genetická informácia za vzniku rekombinantného proteínu. Teoretická časť práce zahrňuje charakteristiku proteínov a ich vlastnosti, popis prípravy rekombinantného proteínu a porovnáva jednotlivé expresné systémy. Pre spracovanie experimentálnej časti boli vybraté tri izoformy proteínu p53, ktoré boli počas práce syntetizované v mikroorganizme E.coli. Transformovaný rekombinantný plazmid obsahoval dve značky na purifikáciu, HIS-tag a GST-tag, vďaka čomu bolo možné porovnať účinnosť izolácie týchto dvoch metód. Bolo zistené, že u všetkých troch izoforiem boli získané vyššie koncentrácie pri purifikácií s HIS-tagom ako u GST-tag. Proteíny p53 majú veľkosť okolo 50 kDa, čo bolo potvrdené gélovou elektroforézou v polyakrylamidovom géle s dodecylsulfátom sodným. The production of recombinant proteins is a biotechnological process during which proteins are produced in foreign organisms by gen manipulation. To form a recombinant plasmid the gene encoding the desired protein is isolated and inserted into an expression vector. The plasmid is then transformed using physical or chemical method into a suitable host, where the recombinant gene is translated into amino acid sequence in the newly synthetized protein. The theoretical part of this bachelor thesis includes characteristics of proteins, methods of recombinant protein preparation and compares individual expression systems. Three isoforms of the p53 protein, which were synthesized in the E. coli microorganism, were selected for processing the experimental part. The transformed recombinant plasmid contained two tags for purification, HIS-tag and GST-tag, making it possible to compare the efficacy of the two purification methods. HIS-tag purification was found to work for all three isoforms better, with concentrations of recombinant proteins were several times higher than those of the GST-tag. The p53 proteins are about 50 kDa long, what was confirmed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis.
Keywords: expression systems; isolation and purification of proteins; recombinant proteins

Institution: Brno University of Technology (web)
Document availability information: Fulltext is available in the Brno University of Technology Digital Library.
Original record: http://hdl.handle.net/11012/178425

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-402192


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Brno University of Technology
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses