Název: Kultivace klíšťaty přenášených babesií a charakterizace jejich proteasomu jako nového terapeutického cíle
Autoři: REICHENSDÖRFEROVÁ, Dominika
Typ dokumentu: Bakalářské práce
Rok: 2019
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
Klíšťaty přenášená babesie je důležitou hrozbou pro lidi i zvířata. V porovnání s její příbuznou malárií jsou tito parazité infikující Apikomplexa široce rozšíření a v současné době pro léčbu babesiósy neexistuje specifický lék. Proto se v této práci zaměřujeme na optimalizaci kultivace B. divergens v kultuře bovinních erytrocytů (in vitro) a B. microti v BALB/c myších (in vivo). 26S proteasom babesií byl ověřen naší laboratoří jako terapeutický cíl. Pro optimalizaci izolace proteasomu babesií bylo aplikováno několik strategií, použivaných pro izolaci 26S proteasomu P. falciparum, mezi které patří ultrasonikace, mechanická homogenizace a ultracentrifugace. Poté byla pro purifikaci 26S proteasomu z lyzátů B. microti použita metoda ionexové chromatografie. Mezi budoucí cíle patří optimalizace protokolů pro purifikaci proteasomu B. microti ionexovou chromatografií, imunoprecipitací a pomocí afinity k ubiquitinu. Poté bude purifikovaný proteasom analyzován zjištěním substrátové specifity katalytických podjednotek, metodou CryoEM, popřípadě proteinovou krystalografií. Hlavním cílem dlouhodobého projektu laboratoře je navrhnout a ověřit selektivní inhibitor proteasomu, který by mohl být využit pro chybějící specifickou léčbu babesiosy. Tick-transmitted parasites of the genus Babesia represent an important worldwide veterinary threat and an emerging risk to humans. In comparison to their malaria-causative relatives, these erythrocyte infecting Apicomplexa have been widely neglected and no specific treatment has been developed. Thus, this thesis is focused on the optimised cultivation of the two species: B. divergens in bovine erythrocyte cultures (in vitro) and B. microti in BALB/c mice (in vivo). Since the Babesia 26S proteasome has been recently validated by our laboratory for drug development we applied different strategies used to isolate the P. falciparum 26S proteasome to optimize its isolation from the two babesia species - ultrasonication, mechanical homogenization and ultracentrifugation. In addition, we used ion exchange chromatography to purify the 26S proteasome from B. microti lysates. Future steps will involve optimised protocols using either ion exchange, immunoprecipitation and/or ubiquitin affinity to purify volumes of B. microti proteasome suitable for substrate specifity profiling of the proteolytic subunits as well as for 3D protein studies involving Cryo-EM or conventional protein crystalography. The overal goal of the long term laboratory project is to produce and validate novel Babesia selective proteasome inhibitors that could be developed into yet missing specific treatment for babesiosis.
Klíčová slova: 26S proteasom; babesia; kultivace; terapeutický cíl; 26S proteasome; babesia; cultivation; drug target
Citace: REICHENSDÖRFEROVÁ, Dominika. Kultivace klíšťaty přenášených babesií a charakterizace jejich proteasomu jako nového terapeutického cíle. České Budějovice, 2019. bakalářská práce (Bc.). JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH. Přírodovědecká fakulta

Instituce: Jihočeská univerzita v Českých Budějovicích (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Plný text je dostupný v digitálním repozitáři JČU.
Původní záznam: http://www.jcu.cz/vskp/55980

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-394825


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Jihočeská univerzita v Českých Budějovicích
Vysokoškolské kvalifikační práce > Bakalářské práce