Original title: Využití magnetických částic při izolaci DNA z výrobků z obilovin
Translated title: The application of magnetic particles for DNA isolation from cereal products
Authors: Starenkova, Anastasiia ; Španová, Alena (referee) ; Rittich, Bohuslav (advisor)
Document type: Master’s theses
Year: 2018
Language: cze
Publisher: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract: [cze] [eng]
Diplomová práce byla zaměřena na testování mikroizolace DNA za pomocí magnetických částic z ereálních výrobků v kvalitě vhodné pro polymerázovou řetězovou reakci (PCR). Pro analýzu byly vybrány cereální sušenky a výrobky pro děti. Vzorky byly homogenizovány s použitím plastového kopistu v lyzačním roztoku s cetyltrimetylammonium bromidem (CTAB). Homogenáty byly purifikovány směsí chloroform-oktanol. Při přípravě homogenátu byl také testován vliv isopropanolu. Homogenáty byly použity pro izolaci DNA magnetickými částicemi. Byly testovány dva spůsoby separace magnetických částic s navázanou DNA (magnetický separátor a magnetická jehla). Izolovaná DNA byla analyzována spektrofotometricky - byla zjišťována její koncentrace a čistota. Poté byla ověřována amplifikovatelnost DNA v PCR. Pro amplifikaci byly použity dvě sady primerů specifických pro rostlinnou ribosomální DNA. Produkty PCR s očekávanou délkou 700 a 220 bp byly detegovány agarózovou gelovou elektroforézou. Bylo zjištěno, že DNA izolovaná ze zrn cereálií, nakličených zrn a cereálních výrobků pomocí testovaných magnetických nosičů byla v kvalitě vhodné pro PCR. The thesis has been focused on micro method for isolation of PCR- ready DNA iusing magnetic particles from cereal products. Cereal biscuits and cereal products for babies were selected for the analysis. These were homogenized using plastic copist in lysis buffer with cetyltrimethylammonium bromide (CTAB). The homogenates were purified using chloroform- octanol mixture. The effect of isopropanol in the preparation of homogenates was tested, too. Homogenates were used for DNA isolation by magnetic particles. Two ways to isolate magnetic particles with bounded DNA (magnetic separator and magnetic needle have been tested. Isolated DNA was analyzed spectrophotometrically its concentration and purity were assessed. . After that, amplification of the DNA was tested in PCR. Two sets of primers specific for plant ribosomal DNA were used for their amplification. PCR products of expected length 700 bp and 220 bp were detected by agarose gel electrophoresis. It was shown that DNA isolated from seeds and cereal products using magnetic particles was in PCR-ready quality.
Keywords: Cereal products; isolation of DNA; magnetic needle; magnetic particles; magnetic separator; polymerase chain reaction; real-time polymerase chain reaction; ereální výrobky; izolace DNA; magnetická jehla; magnetické částice; magnetický separátor; polymerázová řetězová reakce; polymerázová řetězová reakce v reálném čase

Institution: Brno University of Technology (web)
Document availability information: Fulltext is available in the Brno University of Technology Digital Library.
Original record: http://hdl.handle.net/11012/80647

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-376817


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Brno University of Technology
Academic theses (ETDs) > Master’s theses