Original title: Role HIF-2alfa v erytropoéze
Translated title: Role of HIF-2alpha in erythropoiesis
Authors: Vilímková, Veronika ; Láníková, Lucie (advisor) ; Černý, Jan (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2018
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Základní funkcí erytrocytů je transport kyslíku z plic do tkání těla. Kvůli této důležité roli musí být množství erytrocytů přísně regulováno. Počet erytrocytů zvyšuje především glykoproteinový hormon erytropoetin, jehož expresi řídí HIF (hypoxií indukovaný faktor). Transkripční faktor HIF se skládá ze dvou podjednotek, HIFα a HIFβ. Za normoxických podmínek je alfa podjednotka HIF hydroxylována proteinem PHD. Tato hydroxylace zajišťuje rozpoznávací motiv pro VHL protein, který je součástí E3 ubikvitin ligázového komplexu a směřuje hydroxylovaný HIF k proteazomální degradaci. V případě hypoxie je však tato degradace inhibována. Alfa podjednotka se translokuje do jádra, kde váže beta podjednotku a reguluje genovou expresi. HIF signální dráha ovlivňuje široké spektrum buněčných funkcí - metabolismus, angiogenezi, apoptózu a mnoho dalších. Tato diplomová práce se však zaměřuje na HIF2α a jeho roli v erytropoéze. V této práci jsme použili CRISPR/Cas9 technologii a vytvořili HEL (human erythroleukemia) buněčnou linii s knock- outem genu pro HIF2α (EPAS). K objasnění role HIF2α jsme dále využili specifický HIF2α inhibitor k zablokování jeho funkce u HEL buněčné linie. Pro srovnání jsme navíc tento inhibitor otestovali i na myších erytroidních progenitorech. Naše výsledky naznačují významnou roli HIF2α v... The primary function of erythrocytes is transport of oxygen from lungs to various tissues of the body. Red blood cell mass, due to this important role, must be controlled at precise levels. The number of erythrocytes is primarilly increased by the glycoprotein hormon erythropoietin, which expression is controlled by HIF (hypoxia inducible factor). Transcriptional factor HIF consists of the two subunits, HIFα and HIFβ. Under normoxic conditions, alfa subunit of HIF is hydroxylated by PHD protein. This hydroxylation provides a recognition motif for the VHL protein, a part of an E3 ubiquitin ligase complex that targets hydroxylated HIF for proteasomal degradation. Under hypoxic conditions, the degradation is inhibited. The alfa subunit is translocated to the nucleus, where binds the beta subunit and regulates gene expression. HIF pathway regulates a broad spectrum of cellular functions - energy metabolism, angiogenesis, apoptosis and many others. This diploma thesis is focused on HIF2α and its role in erythropoiesis. In this present study, we used CRISPR/Cas9 technology and created HEL (human erythroleukemia) cell line with knock-out of the gene for HIF2α (EPAS1). To reveal the role of HIF2α, we used specific HIF2α inhibitor in order to block its function in HEL cell line. We also tested this...
Keywords: erythroid differentiation; erytropoiesis; HIF-2alpha; hypoxia; erytroidní diferenciace; erytropoéza; HIF-2alfa; hypoxie

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/94774

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-372916


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Master’s theses