Original title:
Určení kinetických parametrů pro enzymovou reakci katalyzovanou histidinkinasou s globinovou strukturou senzorové domény
Translated title:
The kinetic analysis of the enzyme reaction catalyzed by the globine coupled histidine kinase
Authors:
Fojtíková, Veronika ; Martínková, Markéta (advisor) ; Vaněk, Ondřej (referee) Document type: Master’s theses
Year:
2014
Language:
cze Abstract:
[cze][eng] Dvousložkové signální systémy, které se vyskytují především u bakterií, na základě signálu z okolí ovlivňují mnohé buněčné procesy. Typický dvousložkový signální systém je tvořen histidinkinasou a proteinem regulujícím odpověď (RR proteinem). Histidinkinasa obsahuje senzorovou doménu, která zachytí signál a katalytické jádro, na němž dochází prostřednictvím γ-fosfátového zbytku z hydrolyzovaného ATP k fosforylaci konzervovaného histidinu. Po takovéto aktivaci je fosfátová skupina z histidinkinasy přenesena na konzervovaný aspartátový zbytek RR proteinu. Tím je RR protein aktivován a je schopen vykonat svou funkci (obvykle se jedná o transkripční nebo enzymovou aktivitu), čímž reguluje mnohé buněčné procesy. Senzorová doména histidinkinasy je uzpůsobená pro vazbu konkrétní molekuly. Předkládaná diplomová práce se zabývá studiem unikátní histidinkinasy, jejíž senzorová doména obsahuje globinovou strukturu s vázanou molekulou hemu a jejím příslušným RR proteinem. Konkrétně se jedná o histidinkinasu s globinovou strukturou senzorové domény, izolovanou z Anaeromyxobacter sp., kmen Fw 109-5 (AfGcHK). Hlavním úkolem této diplomové práce bylo studium fosforylačních mechanismů AfGcHK a RR proteinu, vysvětlení jejich mechanismu působení a následné stanovení kinetických parametrů autofosforylační reakce...Two-component signal systems serve as basic stimulus-response coupling mechanism to allow organisms (predominantly bacteria) to sense and respond to changes in many environmental conditions. The prototypical system consists of two proteins, namely a histidine kinase, containing a sensor domain and catalytic kinase core, and a response regulator protein (RR protein). Extracellular stimuli are sensed by a histidine kinase sensor domain. Then ATP is bound to the catalytic kinase core and the γ-phosphoryl group is transferred to the conserved histidine residue. This phosphoryl group is subsequently transferred to a conserved aspartate residue within the RR protein. Phosphotransfer to the RR protein results in activation of a downstream effector domain that elicits the specific response (usually it is transcription activity, but a few RR proteins function as enzymes). The histidine kinase sensor domain is designed for specific ligand interactions. This master thesis focused on the unique histidine kinase containing a sensor domain with a globine structure, which coordinates a heme molecule, namely globin-coupled histidine kinase from Anaeromyxobacter sp. Fw 109-5 (AfGcHK) and its appropriate RR protein. The aim of this thesis was to study and characterize the phosphorylation activity of AfGcHK and RR...
Keywords:
AfGcHK; histidine kinase; low molecular phosphodonors; Phos-tag; RR protein; two component signal systems; AfGcHK; dvousložkové signální systémy; histidinkinasa; nízkomolekulární donory fosfátu; Phos-tag; RR protein
Institution: Charles University Faculties (theses)
(web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository. Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/63889