Original title: Studium vlastností minoritních strukturních proteinů myšího polyomaviru
Translated title: Studies of properties of the minor structural proteins of the Murine polyomavirus
Authors: Bílková, Eva ; Forstová, Jitka (advisor) ; Němečková, Šárka (referee)
Document type: Master’s theses
Year: 2014
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Myší polyomavirus (MPyV) je jedním z modelových zástupců čeledi Polyomaviridae. Kapsida MPyV se skládá z hlavního kapsidového proteinu VP1 a minoritních proteinů VP2 a VP3. Minoritní kapsidové proteiny pravděpodobně napomáhají přesunu virového genomu přes membránu endoplasmatického retikula na cestě do jádra v časné fázi infekce. Přesný mechanismus však není znám. Pro studium interakce proteinů VP2 a VP3 MPyV s membránou byly v minulosti vytvořeny expresní plasmidy, kódující mutované VP2 nebo VP3 fúzované s EGFP. Tyto proteiny mají delece v předpokládaných hydrofobních doménách. V této práci byla sledována lokalizace mutovaných proteinů v buňkách. Ukázalo se, že pro asociaci VP2 a VP3 s membránou je nejdůležitější hydrofobní doména 2, zatímco domény 1 a 3 jsou spíše postradatelné. Studium VP2 a VP3 pokračovalo dále analýzou charakteru jejich isoforem. Byly separovány isoformy obou proteinů o různé elektroforetické mobilitě pomocí SDS-PAGE. Následná analýza hmotnostní spektrometrií ukázala, že tyto isoformy se liší v důsledku deamidace na asparaginu společném oběma proteinům (pozice 253 pro VP2 a 137 pro VP3). V minulosti byla také identifikována acetylace N-koncového alaninu VP3. Pro studium funkce nalezených modifikací byly vytvořeny mutované viry se substitucemi těchto aminokyselin. Pilotní... Murine polyomavirus (MPyV) is a member of the Polyomaviridae family. Its capsid is composed of the major capsid protein, VP1, and the minor proteins, VP2 and VP3. The minor capsid proteins probably assure delivery of the viral genome through the endoplasmic reticulum membrane to the nucleus during early phase of infection. However, precise mechanism is not known. Expression plasmids encoding mutated VP2 or VP3 fused with EGFP have been constructed to study the interaction of VP2 and VP3 with membranes. The mutated proteins have deletions in the predicted hydrophobic domains. In this thesis, cell localisation of mutated proteins was followed. The study revealed that the hydrophobic domain 2 is the most important for association of VP2 and VP3 with membranes, while domains 1 and 3 are rather expendable. Further, nature of VP2 and VP3 isoforms has been studied. Isoforms with different electrophoretic mobility were separated on SDS-PAGE. Consequent mass spectrometry analysis showed that they differ in deamidation of asparagine, present at both minor proteins (position 253 of VP2 and 137 of VP3). Previously, acetylation of VP3 N-terminal alanine has been identified. To elucidate the function of these modifications, mutated viruses were constructed with substitution of these amino acids. Pilot...
Keywords: minor capsid proteins; murine polyomavirus; protein modification; protein-membrane interaction; VP2; VP3; interakce proteinů a membrán; minoritní proteiny; modifikace proteinů; myší polyomavirus; VP2; VP3

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/63250

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-332400


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Master’s theses