Název:
Exprese a funkce nukleofosminu (B23) během preimplantačního vývoje skotu
Překlad názvu:
The expression and function of nucleophosmin (B23) during bovine preimplantation development
Autoři:
Benešová, Veronika ; Kaňka, Jiří (vedoucí práce) ; Krylov, Vladimír (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2011
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Abychom mohli porozumět časné embryogenesi savců je potřeba identifikovat geny, které zahajují svou expresi v různou dobu embryonálního vývoje. Právě tyto geny hrají důležitou roli v normálním preimplantačním vývoji. Jedním z těchto genů je i nukleofosmin, gen pro multifunkční protein, který zastává mimo jiné úlohu transportního proteinu mezi cytoplasmou a jadérkem. Podílí se na duplikaci centrosomů, vytváření ribosomů a také zastává funkci chaperonového proteinu. Jeho lokalizace závisí na fázi buněčného cyklu a vlastně odpovídá průběhu tvorby jadérka. Ke studování vlivu nukleofosminu na preimplantační vývoj skotu byla použita metoda RNA interference, kdy po injikaci dlouhé dvouřetězcové RNA (dsRNA) dojde k degradaci cílové mRNA. Průměrný pokles množství mRNA u embryí injikovaných nukleofosminovou dsRNA je 86,3 % v porovnání s kontrolními neinjikovanými embryi. Pomocí imunofluorescence však nebyl zjištěn žádný rozdíl v expresi ani lokalizaci nukleofosminu mezi jednotlivými skupinami. Embrya ze všech skupin byla schopna se vyvíjet až do stádia blastocysty, i když v tomto stádiu byl signifikantní rozdíl ve vývoji do blastocysty mezi neinjikovanou kontrolní skupinou a embryi s umlčenou mRNA pro nukleofosmin. Nenalezli jsme ani defekty polymerace tubulinu, které byly pozorovány u somatických buněk.Identification of genes that start their expression in different time of embryonal development is crucial for proper understanding of early mammalian embryogenesis. Genes that are differently expressed during this period are supposed to be important for normal preimplantation development. One of these genes is nucleophosmin, the multifunctional protein, which functions among others as a transporting protein between cytoplasm and nucleoli. It is involved in duplication of centrosomes, formation of ribosomes and functions as a chaperoning protein. Nucleophosmin shuttles rapidly between the nucleolus and cytoplasm. Its localization is cell cycle dependent and reflects the development of the nucleoli. For studying the effect of nucleophosmin on the bovine preimplantation development we used RNA interference that causes degradation of the target mRNA after injection of nucleophosmin double-stranded RNA. The average decrease of nucleophosmin mRNA abundance is 86.3 % between nucleophosmin dsRNA injected embryos and control group. We detected no differences in protein expression and localization of nucleophosmin between the groups by immunofluorescence method. Embryos in all groups were able to develop until the blastocyst stage, although there were significant difference between uninjected control group and...