Název:
Role proteinu Prp45 v expresi a zrání mRNA
Překlad názvu:
The role of Prp45p in mRNA expression and maturation
Autoři:
Abrhámová, Kateřina ; Půta, František (vedoucí práce) ; Pichová, Alena (oponent) ; Janderová, Blanka (oponent) Typ dokumentu: Disertační práce
Rok:
2010
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Souhrn Prp45p ze Saccharomyces cerevisiae a Snw1p ze Schizosaccharomyces pombe jsou pro eukaryotní buňku nepostradatelné proteiny, které vykazují vysoký stupeň homologie se savčím transkripčním regulátorem a nestřihovým faktorem SNW/SKIP. Analyzovali jsme esenciální funkci těchto proteinů v obou kvasinkách a nalezli mutaci (prp45(1-169)), která u mutantního kmen s odpovídající chromozomální delecí způsobuje citlivost vůči vyšší kultivační teplotě a hypersenzitivitu vůči cykloheximidu, hydroxymočovině, látce calcofluor white a inhibitorům polymerizace mikrotubulů. Při kultivaci ve 30řC jsou tyto kvasinky často prodloužené, deformované a větší než wt. Po synchronizaci ve 37řC zastavují kvasinky prp45(1-169) svůj růst s dvojnásobným obsahem DNA. Zjistili jsme, že teplotní senzitivita kmene prp45(1-169) není překonána a hypersenzitivita vůči mitotickým jedům je jen částečně potlačena odstraněním intronu z genu TUB1. To odlišuje prp45(1-169) od těch mutant v sestřihových faktorech, jež vykazují na tubulinu závislý blok v G2/M fázi, který může být překonán pomocí verze tub1 bez intronu . Pomocí analýzysestřihu in vitro jsme zjistili, že sestřih optimálních substrátů není narušen. Porovnávali jsme stabilitu a obsah RNA mezi prp45(1-169) a wt kvasinkami při různých teplotách pomocí microarray analýzy. Expresi a...Prp45p of Saccharomyces cerevisiae and Snw1p of Schizosaccharomyces pombe are essential proteins, which share extensive homology with the mammalian transcription regulator and splicing factor SNW/SKIP. We have analyzed the essential function of these proteins in both yeasts and found a mutation (prp45(1-169)) that exhibited temperature sensitivity. The mutant strain harboring the corresponding chromosomal deletion shows temperature sensitive phenotype and hypersensitivity to cycloheximide, hydroxyurea, calcofluor white, and to microtubule inhibitors. At 30řC, the cells are often elongated, deformed, and larger than wt. After synchronization prp45(1-169) cells stop their growth with 2N DNA content at 37řC. We found that the temperature sensitivity is not overcome and the hypersensitivity to microtubule destabilizing drugs is only partially suppressed by the excision of intron from TUB1 gene. This distinguishes prp45(1-169) from those splicing factor's mutants that cause tubulin-dependent G2/M arrest, which can be relieved by the expression of intronless tub1. We performed analysis of splicing in vitro and found that splicing of optimal substrates is not impaired. We also compared the content and stability of RNA in wt-cells and in prp45(1-169) cells at variol temperatures using microarrays. The...
host ::
