Název:
Spektrofluorimetrické stanovení aktivit aldo/ketoreduktas
Překlad názvu:
Spectrofluorimetric assay for activities of aldo/keto reductases
Autoři:
Zavřelová, Iva ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Kubíček, Vladimír (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2008
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Aldo/ketoreduktasy (AKR) jsou jednou ze tří enzymových nadrodin, které se uplatňují při oxidoredukci široké škály přírodních i cizorodých aldehydů, ketonů či alkoholů. Aktivita AKR se nejčastěji stanovuje spektrofotometricky, tato metoda však není dostatečně selektivní a citlivá. Na základě skutečnosti, že všechny AKR vyžadují pro katalýzu přítomnost nikotinamidových kofaktorů, jejichž redukovaná forma fluoreskuje, zatímco oxidovaná fluorescenci nevykazuje, se nabízí možnost využití spektrofluorimetrie - stanovení AKR pomocí kontinuálního sledování přeměny NADPH/NADP+ . Tato studie se zabývala testováním a optimalizací spektrofluorimetrického stanovení acenaftenoldehydrogenasy v subcelulárních frakcích (cytosol a mikrosomy) z homogenátu jater potkana a v cytosolu z buněčné linie MCF-7. Ze získaných výsledků je patrné, že spektrofluorimetrie může být perspektivní metodou pro stanovení aktivit některých AKR. Výhodou je její selektivita, citlivost a poměrně nenáročné provedení. Bude však nutné metodu dále optimalizovat, vyzkoušet další substráty a inhibitory a vyloučit možnost interference mikrosomů v cytosolických enzymových preparátech.The aldo-keto reductases (AKRs) are one of the three enzyme superfamilies that perform oxidoreduction on a wide variety of natural and foreign substrates. It's possible to specify their activity spectrofotometrically, but this method isn't selective and specific enough. On the base of fact, that all AKRs are dependent on nicotinamide cofactors for catalysis, whose reduced form has fluorescence properties, in contrast to oxide form, there is one possibility - application spectrofluorimetry - we can determine AKR with the aid of continuous monitoring of NADPH/NADP+ transformation. This project deals with conditions of optimisation of spectrofluorimetry determination of acenaphthenol dehydrogenase in subcellular fractions (cytosol and microsomes) from rat liver homogenate and in cytosol of MCF-7 cell line. Obtained results proved that spectrofluorimetry can be use as a perspective method for acenaphthenol dehydrogenase activity determination. The selectivity, sensibility and easy implementation represent the advantages of this method. Further optimisation using other substrates and inhibitors will be necessary. The risk of microsomes interference in cytosolic enzyme preparation should be taken into account.