Original title: Optimalizace elektroforetických metod pro studium glykace a aspartátaminotransferasy methylglyoxalem
Translated title: Optimization of Electrophoretic Methods for Study of Glycation of Aspartate Aminotransferase by Methylglyoxal
Authors: Bacílková, Eliška ; Szotáková, Barbora (referee) ; Boušová, Iva (advisor)
Document type: Rigorous theses
Year: 2010
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Eliška Bacílková Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název práce: Optimalizace elektroforetických metod pro studium glykace aspartátaminotransferasy methylglyoxalem Hlavní náplní této práce byla optimalizace podmínek několika elektroforetických metod pro sledování průběhu glykace aspartátaminotransferasy (AST) methylglyoxalem a vlivu vybraných antioxidantů na tento proces. Za použití denaturující elektroforézy (SDS-PAGE) a Western blottingu jsem sledovala vznik vysokomolekulárních agregátů proteinu a pomocí nativní PAGE změny v náboji molekuly AST během glykace. U obou typů elektroforézy jsem hledala vhodnou koncentraci separačního gelu a množství nanášené bílkoviny. Dále jsem porovnávala tři běžně používané barvící metody (Silver Staining, Coomassie Blue R- 250 a G-250). Zjistila jsem, že se stoupající koncentrací methylglyoxalu dochází k tvorbě vysokomolekulárních agregátů s molekulovou hmotností kolem 130 a 160 kDa, což odpovídá tri- a tetramerům AST. Při imunochemické detekci jsem detekovala glykační produkty především s molekulovou hmotností kolem 70 a 130 kDa, při vyšších koncentracích methylglyoxalu s molekulovou hmotností kolem 160 kDa. Glykace methylglyoxalem způsobila progresivní... Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Mgr. Eliška Bacílková Supervisor: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Title of thesis: Optimization of electrophoretic methods for study of glycation of aspartate aminotransferase by methylglyoxal Main scope of this thesis was the optimization of several electrophoretic methods for monitoring of the course of glycation of aspartate aminotransferase (AST) by methylglyoxal as well as of the effect of selected antioxidants at this process. I observed formation of high-molecular protein aggregates using denaturing electrophoresis (SDS- PAGE) and Western blotting and changes in the molecular charge of AST during glycation using native PAGE. In both types of electrophoresis, I searched for suitable concentration of the separation gel and the amount of loaded protein. Further, I compared three routinely used staining methods (Silver Staining, Coomassie Blue R-250 and G-250). I found out that the high-molecular aggregates with molecular weight about 130 and 160 kDa, which corresponds to tri- and tetramers of AST, are formed with increasing concentration of methylglyoxal. Using immunochemical detection, I detected glycation products with molecular weight mainly about 70 and 130 kDa and with molecular...

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/25233

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-280213


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Rigorous theses