|
|
Expression of apoptosome pathway regulators and activation of apoptosome apparatus in non-small cell lung carcinoma
Moravčíková, Erika ; Křepela, Evžen (vedoucí práce) ; Kovář, Jan (oponent) ; Kotyza, Jaromír (oponent)
SOUHRN Úvod: Apoptosomový aparát má zásadní význam pro generování a amplifikaci apoptotických signálů a tím pro navození apoptosy v nádorových buňkách, přičemž účinnost protinádorové chemoterapie a radioterapie do značné míry závisí na spuštění apoptosy závislé na apoptosomu. Aktivace nebo funkce apoptosomového aparátu však často selhává. Příčinou mohou být změny v expresi a/nebo získané mutace a/nebo posttranslační úpravy komponentů apoptosomu či jeho regulátorů, které hrají významnou roli v proliferaci nádorových buněk a léčebné resistenci. Proto byla tato práce zaměřena zejména na analýzu exprese faktorů, které mohou regulovat spuštění a průběh apoptosomové kaspasové kaskády a na připravenost aktivace apoptosomového aparátu v buněčných liniích a tkáních nemalobuněčného karcinomu plic. Metody: V této práci byly použity následující metody: izolace a kvantifikace celkové RNA, real-time RT-PCR, izolace bezbuněčného cytosolu a extraktů z buněk a tkání, gelová filtrace, Western blot analýza, enzymové analýzy a techniky kultivace buněčných linií. Výsledky a závěry: Vyšší predispozice nemalobuněčného karcinomu plic k apoptosomem zprostředkované apoptose, v porovnání s normální plicní tkání, je způsobena několika faktory. Za prvé, zvýšenou expresí aktivovatelných apoptosomových komponentů v nádorů, včetně Apaf-1...
|
|
|
Regulace aktivity lipoproteinové lipázy v cirkulaci
Zemánková, Kateřina ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Vrablík, Michal (oponent)
Lipoproteinová lipáza (LPL) je klíčový enzym v metabolismu lipoproteinů. Enzym katalyzuje hydrolýzu triacyglycerolů (TG), které jsou součástí chylomikronů a lipoproteinů o velmi nízké hustotě (VLDL). V současné době však není plně objasněn mechanismus regulace tohoto proteinu. Cílem práce proto bylo studium vybraných aspektů regulace aktivity LPL. Nedávno objevený apolipoprotein A-V (apo A-V) významně ovlivňuje triglyceridémii a předpokládá se, že by mohl být aktivátorem LPL. Jeho koncentrace v cirkulaci je ovšem příliš nízká a proto bylo zjišťováno, zda většina apo A-V není vázána na heparansulfátproteoglykanu (HSPG) cévní stěny podobně jako LPL. Intravenózní aplikace heparinu byla u zdravých dobrovolníků spojena s očekávaným vzestupem aktivity LPL, koncentrace apo A-V se však po podání heparinu neměnila. Tyto nálezy tedy nesvědčí pro hypotézu, že podstatná část apo A-V je v cirkulaci vázána na HSPG kapilárního endotelu. Úlohu v regulaci LPL hraje i konzumace alkoholu. Zatímco dlouhodobá umírněná konzumace aktivitu enzymu zvyšuje, předpokládá se, že bezprostředně po konzumaci alkoholu dochází k inhibici aktivity LPL. Pro tuto inhibici však v literatuře chybí přímé důkazy. Dalším cílem studie tedy bylo zjistit, jak je aktivita LPL regulována akutním podáním alkoholu zdravým dobrovolníkům. Aktivita...
|
|
|
Návrh systému pro hlášení úniku plynu pomocí ultrazvukového mikrofonu
Bohuš, Michal ; Kovář, Jan (oponent) ; Šotner, Roman (vedoucí práce)
Práca sa zaoberá detekciou úniku plynu na princípe snímania ultrazvuku. V úvod popisuje ultrazvuk, mechanizmus jeho šírenia prostredím i útlm. Z rôznych typovo mikrofónov, ktoré sú v tejto práci spomenuté bol vybratý piezoelektrický menič. Následne práca pokračuje návrhom zariadenia, ktoré má byť schopné snímať únik plynu v nebezpečnom a výbušnom prostredí podliehajúcom štandardu SIL 2 a direktíve ATEX pre zónu 2. Dizajn zahŕňa návrh nízkošumového predzosilňovača, filtrov a detekčnej časti. Zariadenie je koncipované ako modulárne, čo znamená, že sa jeho časti dajú ľubovoľným spôsobom meniť a nahrádzať. Úlohou týchto modulov je pripraviť analógový signál pre digitálne spracovanie mikrokontrolérom HERCULES TSM57012.01
|
|
|
Gilbertův syndrom.
Šimáková, Eva ; Kuklík, Miloslav (vedoucí práce) ; Kovář, Jan (oponent)
Diplomová práce se zaměřuje na zjištění možné souvislosti mezi genotypem typickým pro Gilbertův syndrom a konkrétní chorobou. Zkoumá možný ochranný vliv alely 7TA. Vysvětluje vznik, symptomy, patologii tohoto syndromu a jeho souvislosti s medicínou. Diskuse zahrnuje možný ochranný účinek této polymorfní mutace, který se může projevit sníženou četností cévních onemocnění (infarkt myokardu, cévní mozková příhoda, ateroskleróza, atd.). Významný by mohl být rovněž podíl hyperbilirubinémie na snížení oxidačního stresu. Práce byla prováděna ve spolupráci s laboratoří GENVIA s.r.o.
|
|
|
Molecular mechanisms of apoptosis induced by photodynamic activation in cancer cells
Moserová, Irena ; Králová, Jarmila (vedoucí práce) ; Kuželová, Kateřina (oponent) ; Kovář, Jan (oponent)
Fotodynamická terapie (PDT) je terapeutický prostředek používaný při léčbě nádorů. Tato metoda je založena na aplikaci fotosenzitivní látky, která se hromadí v nádorových buňkách a po ozáření světlem způsobuje jejich usmrcení. Hlavním cílem této disertační práce bylo studium nových fotosenzitivních látek - porfyrinů s glykolovou substitucí. Porfyriny obsahující jeden až čtyři nízkomolekulární glykolové řetězce vázané éterovou vazbou v pozici meta na meso-tetrafenylporfyrin (mTPP(EG)1-4) byly porovnány s fluorinovanými (pTPPF(EG)4) a nefluorinovanými (pTPP(EG)4) deriváty majícími glykolový řetězec v para pozici. Vstup do buněk a fotodynamická aktivita byly výrazně závislé na koncových skupinách glykolových substituentů. Porfyriny s hydroxyglykolovou substitucí, na rozdíl od porfyrinů s methoxyglykolovou substitucí, byly účinněji transportovány do buněk a způsobovaly hojně apoptózu v nádorových buňkách in vitro. Po počátečním otestování byly vybrány a detailně analyzovány prototypy hydroxy etylenglykolových derivátů. Para deriváty pTPP(EG)4 a pTPPF(EG)4 se akumulují především v lysozomech, zatímco meta deriváty mTPP(EG)1-4 v endoplazmatickém retikulu (ER). Pozice etylenglykolového řetězce na porfyrinovém kruhu má vliv nejen na nitrobuněčnou lokalizaci ale i na účinnost fotodynamické terapie in vivo....
|
|
| |
|
|
Úloha endocytózy a endosomální acidifikace v apoptóze indukované ligandem TRAIL
Hradilová, Naďa ; Anděra, Ladislav (vedoucí práce) ; Kovář, Jan (oponent)
Pro úspěšný přenos apoptotického signálu je nezbytné efektivní formování multimerního komplexu DISC (death-inducing signaling complex) a následná aktivace iniciační kaspázy-8. Avšak počáteční děje vedoucí plné aktivaci kaspáz nejsou zcela objasněny. Jedním z faktorů, které mohou iniciaci vnější receptorové dráhy ovlivnit, je endocytóza komplexu TRAILDR4/ 5-DISC (tzv. receptozom). Recentní studie zabývající se úlohou endocytózy TRAILového receptozomu podávají rozporuplné výsledky. U různých buněčných linií byl pozorován proapoptotický, antiapoptotický nebo dokonce žádný vliv endocytózy receptozomu. V této práci jsme se zaměřili na určení úlohy endocytózy a následné acidifikace TRAIL receptozomů během TRAILem indukované apoptózy u buněčných linií odvozených od kolorektálního karcinomu. Prokázali jsme se, že na klatrinu závislá endocytóza TRAILových receptozomů a zároveň i endozomální a lyzozomální acidifikace je potřebná pro efektivní aktivaci kaspázy-8 a kaspázy-3 během časné fáze apoptózy. Inhibice endocytózy a acidifikace vedly k poklesu apoptotické signalizace během první hodiny od indukce apoptózy. Tento inhibiční efekt byl pouze přechodný a nedošlo k úplnému zastavení apoptotické signalizace. Inhibice acidifikace pomocí inhibitorů V-ATPázy způsobila také celkové zpomalení apoptotických dějů a změny v...
|
|
|
Analýza útočných herních systémů ČR U19 v kvalifikaci na ME 2011 ve fotbale
Kovář, Jan ; Frýbort, Pavel (vedoucí práce) ; Kokštejn, Jakub (oponent)
Název práce: Analýza útočných herních systémů ČR U19 v kvalifikaci na ME 2011 ve fotbale Cíle práce: V této práci se zaměřím na identifikaci útočných herních systémů, které vedli k zakončení na branku soupeře a činnostní participaci hráčů v těchto herních situacích. Metoda práce: Observační analýza metodou nepřímého pozorování. Jedná se o smíšený výzkum. Výsledky práce: Ze záznamů, které jsem získal z nepřímého pozorování zápasů v kvalifikaci na ME 2011, jsem zjistil, že nejčastěji využívaným přechodem z obrany do útoku využívali rychlý protiútok (77,3%). Postupný útok (13,3%) a kombinovaný útok (9,63%) využívali jen zřídka. Nejčastější útočný systém, který vedl k zakončení, byl rychlý protiútok 23,1% a nejčastěji se do zakončených útoku zapojovali střední obrana, krajní záloha a útočníci. Klíčová slova: Fotbal, rychlý protiútok, postupný útok, kombinovaný útok
|
|
|
Úloha mitochondriální dráhy v indukci apoptózy taxany u buněk nádorů prsu
Schmiedlová, Martina ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Anděra, Ladislav (oponent)
Apoptóza je jedním z mechanismů programované buněčné smrti, ke které dochází u nádorových buněk prsu po aplikaci taxanů. K její indukci může principielně docházet buď vnější nebo vnitřní dráhou. Diplomová práce má za cíl přispět k objasnění úlohy a mechanismů vnitřní mitochondriální dráhy indukce apoptózy po aplikaci taxanů (paclitaxel a SB-T-1216) na modelu buněčných linií karcinomu prsu SK-BR-3 (nefunkční protein p53, funkční kaspáza 3) a MCF-7 (funkční protein p53, nefunkční kaspáza 3). Konkrétně jsme sledovali vliv obou testovaných taxanů na mitochondriální membránový potenciál, hladinu ROS, expresi a lokalizaci proteinů regulujících vnitřní mitochondriální dráhu. U buněčné linie SK-BR-3 vedla aplikace obou taxanů k zhroucení mitochondriálního membránového potenciálu, avšak ne u buněčné linie MCF-7. Zjistili jsme, že se po aplikaci obou taxanů nemění exprese proteinu Bax a ani Smac/DIABLO u obou testovaných linií. U linie SK-BR-3 došlo na rozdíl od linie MCF-7 po aplikaci taxanů k poklesu exprese proteinu Bid. Po aplikaci taxanů nedošlo k translokaci proteinů Bax a Bid (tBid) z cytosolu na mitochondrie ani u jedné z testovaných linií. Nezjistili jsme také uvolňování proteinu Smac/DIABLO z mitochondrií do cytosolu. U buněčné linie SK-BR-3 jsme však pozorovali po aplikaci taxanů uvolňování...
|
|
|
Regulace produkce VLDL v játrech
Jirátová, Markéta ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Cahová, Monika (oponent)
Cílem této bakalářské práce je shrnout současné poznatky o syntéze částic VLDL (lipoprotein o velmi nízké hustotě). První část této práce stručně shrnuje základní charakteristiky lipidů a lipoproteinů. Tuky jsou pro organizmy nejvýhodnějším zdrojem energie. Lipoproteiny jsou makromolekulární komplexy určené k přepravě hydrofobních tuků v plazmě. Rozdělují se dle hustoty na chylomikrony, VLDL, IDL, LDL a HDL. Druhá část práce se zaměřuje na strukturní peptidové složky lipoproteinů, apolipoproteiny. Shrnuje charakteristiky a funkce základních tříd apolipoproteinů. Největší pozornost je věnována apolipoproteinům B, které mají zásadní roli pro syntézu VLDL. Vlastní regulace syntézy VLDL a její průběh je rozebrán ve třetí části práce. Syntéza VLDL se odehrává ve dvou krocích. V prvním kroku vznikají nezávisle na sobě dvě částice - pre-VLDL a tuková kapénka. Pro první krok je nezbytný apolipoprotein B-100 a mikrozomální protein přenášející triglyceridy (MTP). Ve druhém kroku pak fúzuje pre-VLDL s tukovou kapénkou. Pro tento krok je nezbytný ADP-ribosylační faktor 1 (ARF1) a fosfolipáza D (PLD). Syntéza VLDL je také regulována množstvím dostupných lipidů a hladinou inzulínu. Svou úlohu mají i apolipoprotein E, apolipoprotein A-V a acyl-koenzym A:cholesterol acyl transferáza 2 (ACAT2). V poslední části...
|
host ::
RSS.