|
|
Interakce membránových transportérů s léčivy v placentě a duktálním adenokarcinomu pankreatu
Jirásková, Lucie ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent) ; Pejchal, Jaroslav (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidátka: Mgr. Lucie Jirásková Školitel: doc. PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název disertační práce: Interakce membránových transportérů s léčivy v placentě a duktálním adenokarcinomu pankreatu Membránové transportéry jsou přítomny napříč celým organismem a zastávají řadu vitálně důležitých funkcí. Významnými zástupci membránových transportérů jsou p-glykoprotein (ABCB1), breast cancer resistance protein (ABCG2) a multidrug resistance-associated protein 2 (ABCC2) patřící do rodiny ATP-biding cassette (ABC) transportérů. Dalšími důležitými zástupci jsou nukleosidové transportéry, které patří do rodiny Solute Carriers (SLC) transportérů. V poslední době je sledována jejich důležitost ve farmakokinetice léčiv a vzniku rezistence k protinádorové terapii. V rámci této disertační práce jsme se uvedeným transportérům (zejména nukleosidovým) věnovali komplexně. Podařilo se nám popsat expresní profil nukleosidových transportérů v placentě v různých fázích gestace. Dále jsme sledovali, zda se exprese nukleosidových transportérů mění v závislosti na míře diferenciace trofoblastu či může být ovlivněna epigeneticky a popsali důležitost cAMP/proteinkináza A signalizační dráhy v jejich regulaci. Z pohledu...
|
|
|
Homeostáza vnitrobuněčného pH v patogenních kvasinkách Candida albicans a Candida glabrata
Winterová, Lucie ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Lucie Winterová Školitel: Prof. PharmDr. František Štaud, Ph.D. Konzultantky: RNDr. Marie Kodedová, Ph.D., RNDr. Hana Sychrová, DrSc. Název diplomové práce: Homeostáza vnitrobuněčného pH v patogenních kvasinkách Candida albicans a Candida glabrata Diplomová práce se věnuje studiu vlivu kultivačních podmínek na homeostázu vnitrobuněčného pH u kmenů kvasinek Candida albicans a Candida glabrata s delecemi membránových transportérů kationtů alkalických kovů Cacnh1Δ a Cgtrk1Δ. Hodnoty vnitrobuněčného pH byly měřeny pomocí pHluorinu, varianty zeleného fluorescenčního proteinu, exprimovaného v cytosolu buněk obou druhů kvasinek. Fluorescence exprimovaného pHluorinu byla ověřena pomocí fluorescenčního mikroskopu a byla stanovena závislost intenzity fluorescence pHluorinu na hodnotě vnitrobuněčného pH vytvořením kalibrační křivky. V rámci této diplomové práce byl zjištěn vliv složení kultivačního média (zejména různého zdroje dusíku) a vliv působení antimykotik (flukonazolu, klotrimazolu, amfotericinu B a terbinafinu) na hodnoty vnitrobuněčného pH obou kandid. Porovnáním s kontrolními kmeny byly zjištěny vlivy delecí Cacnh1Δ a Cgtrk1Δ na změny některých fyziologických parametrů, jako je schopnost a...
|
|
|
Characterization of ligand binding to M1 muscarinic acetylcholine receptor using fluorescence anisotropy method
Danková, Hana ; Vokřál, Ivan (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Hana Danková Školitelé: Prof. Ago Rinken, PhD. MSc. Tõnis Laasfeld PharmDr. Ivan Vokřál, PhD. Téma diplomové práce: Charakterizace vázání ligandů na M1 muskarinový receptor s použitím metody fluorescenční anisotropie Muskarinové acetylcholinové receptory (mAChR), které jsou členy superrodiny receptorů spřažených s G-proteiny, regulují životně důležité fyziologické procesy a jsou významnými cílovými receptory ve výzkumu léčiv. Identifikováno bylo pět subtypů těchto receptorů (M1 - M5). M1 mAChR jsou lokalizovány převážně v centrální nervové soustavě a jsou spojovány s patofyziologií neurodegenerativních onemocnění. V posledních letech byly metody s použitím fluorescence často využívané ve studiích ligandů vážících se na receptory. Fluorescenční anisotropie (FA) je homogenní metoda, která je používána na charakterizaci vázání ligandů na receptory. V této práci jsme vyhodnocovali FA metodu s použitím fluorescenčního ligandu MK342 vázajícího se na M1 mAChR exprimovaný na bakulovirusových částicích. Fluorescenční ligand se vázal s vysokou afinitou (4,4 nM) na M1 receptory exprimované v bakulovirusovém vzorku. Screenovány byly afinity (pKi) jedenácti ortosterických a tří bitopických ligandů, které byly...
|
|
|
Flow-cytometrická analýza inhibičního vlivu nových cílených léčiv na aktivitu ABC lékových efluxních transportérů
Burianová, Gabriela ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Gabriela Burianová Školitel: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Flow-cytometrická analýza inhibičního vlivu nových cílených léčiv na aktivitu ABC lékových efluxních transportérů Nádorová onemocnění patří k druhým nejčastějším příčinám úmrtí. Léčba je často kombinací klasické chemoterapie, radioterapie a chirurgické léčby. Novější možností je použití tzv. cílené protinádorové léčby, která se zaměřuje s větší specifitou na nádorové buňky. Komplikací úspěšné protinádorové léčby je vznik mnohočetné lékové rezistence (MDR), která může být mimo jiné způsobena zvýšenou expresí efluxních transportérů. ATP binding cassette (ABC) transportéry představují širokou rodinu transmembránových proteinů, které využívají energii ve formě ATP k transportu látek přes membránu. S MDR jsou spojeny především tři hlavní transportéry: P-glykoprotein (ABCB1), multidrug resistance-associated protein 1 (ABCC1) a breast cancer resistance protein (ABCG2). Inhibicí transportérů se zvýší akumulace chemoterapeutických substrátů uvnitř buněk. V této práci jsme zkoumali interakci šesti syntetických nízkomolekulárních látek (alisertib, ensartinib, entrectinib, talazoparib, tepotinib, vistusertib) s ABC transportéry...
|
|
|
Study on impact of selected tyrosine kinase inhibitors on multidrug resistance mediated by ABC drug efflux transporters
Sýkorová, Martina ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Martina Sýkorová Školiteľ: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Názov diplomovej práce: Štúdium vplyvu vybraných inhibítorov tyrozínkináz na mnohopočetnú liekovú rezistenciu sprostredkovanú ABC liekovými efluxnými transportérmi Tyrozínkinázy sú enzýmy dôležité pri bunkovej proliferácii, karcinogenéze, apoptóze a diferenciácii buniek. Deregulácia týchto enzýmov môže mať za následok premenu normálnej bunky na nádorovú. Blokovanie ich funkcie inhibítormi tyrozínkináz (TKi) sa považuje za sľubnú liečbu rôznych typov nádorov. ABC transportéry tvoria rodinu transmembránových proteínov schopných transportovať širokú škálu substrátov cez biologické membrány pomocou na ATP závislých liekových efluxných púmp. Ovplyvňujú farmakokinetiku liekov, na druhej strane ale zapríčiňujú zlyhanie terapie kvôli ich nadmernej expresii v nádorových bunkách. V našom predchádzajúcom výskume sme hodnotili inhibičné schopnosti dvoch vybraných TKi (alektinib, brivanib) v bunkových líniách MDCKII (parentných a transdukovaných ľudskými ABCB1, ABCC1 a ABCG2 transportérmi). Alektinib výrazne inhiboval transportéry ABCB1 a ABCG2, ale nie ABCC1. Brivanib preukázal inhibíciu všetkých troch študovaných transportérov. Na základe týchto výsledkov...
|
|
|
Studium regulace genové exprese nukleosidových transportérů v buněčné linii BeWo
Strachoňová, Šárka ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Šárka Strachoňová Školitel: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název diplomové práce: Studium regulace genové exprese nukleosidových transportérů v buněčné linii BeWo Nukleosidové transportéry (NTs) lokalizované v syncytiotrofoblastu zprostředkovávají vychytávání nukleosidů a podílí se na placentárním přestupu od nukleosidů odvozených léčiv. Dysregulace NTs může vést k ovlivnění nukleosidové homeostázy s negativním dopadem na vývin placenty a plodu a může vést ke změně placentární farmakokinetiky léčiv. Proto je porozumění exprese a funkce NTs nutná pro účinnou a bezpečnou farmakoterapii v období těhotenství. Cílem bylo studovat regulační dráhy genové exprese koncentračního nukleosidového transportéru 2 (CNT2) aktivované adenylátcyklázou (AC). K tomu byly použity dvě metody, qRT-PCR a in vitro akumulační zkoušky využívající modelový substrát [3 H]-adenosin. Buněčná linie BeWo, odvozená od lidského placentárního choriokarcinomu, byla vystavena působení aktivátoru AC, forskolinu (50 μM) a/nebo inhibitorů signálních drah AC/cAMP/PKA a AC/cAMP/MAPK (MEK1/2 a p38 MAPK), tedy inhibitoru PKA, KT 5720 (5 μM), inhibitoru MEK1/2, U0126 (10 μM) a inhibitoru p38 MAPK, SB202190 (10 μM). Indukce genové...
|
|
|
Studium inhibičního účinku antagonisty SPA70 na hPXR
Dohnalová, Klára ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Klára Dohnalová Školitel: prof. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název diplomové práce: Studium inhibičního účinku antagonisty SPA70 na hPXR Práce se zabývá pregnanovým X receptorem (PXR) a jeho antagonisty. PXR je ligandy aktivovaný jaderný receptor, jenž hraje dominantní roli v řízení detoxikace xenobiotik a chrání organismus před akumulací těchto mnohdy toxických sloučenin. Novější poznatky ukazují rovněž endogenní působení PXR v metabolismu lipidů, glukózy a žlučových kyselin. Aktivace PXR nepůsobí vždy protektivně, jelikož indukce biotransformačních enzymů působením agonistů PXR může vést k snížení účinnosti léčby, ke zvýšené toxicitě metabolitů léčiv nebo k rezistenci na chemoterapeutika. V poslední době se výzkum intenzivně zaměřuje na antagonisty PXR schopné vyrušit tyto nepříznivé jevy. Jednou z nových nadějných molekul z hlediska budoucího uplatnění v cílené antagonizaci lidského PXR je SPA70. V práci jsme zkoumali inhibiční účinek této sloučeniny na aktivovaný lidský PXR. Využili jsme agonistů působících přímou vazbou na PXR (rifampicin, hyperforin, SR12813) i nepřímo přes buněčné signalizační cesty (U0126, PD184352, PD0325901). Antagonistu jsme testovali metodou luciferase reporter gene...
|
|
|
Studium interakcí léčiv s transportéry z rodiny OATP za využití střevních tkáňových řezů
Čečková, Patrícia ; Vokřál, Ivan (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Patrícia Čečková Školitel: PharmDr. Ivan Vokřál, Ph.D. Název diplomové práce: Studium interakcí léčiv s transportéry z rodiny OATP za využití střevních tkáňových řezů Kľúčovú úlohu v pôsobení perorálne podávaných liečiv predstavuje ich absorpcia črevnou bariérou. Exprimuje celú radu transportérov, mimo iné OATP2B1 a OATP1A2 influxné transportéry, patriace do rodiny SLC. Sú lokalizované na apikálnej membráne enterocytov a umožňujú prúdenie endogénnych a exogénnych látok z lúmen čriev do enterocytu. Ovplyvňujú nielen farmakokinetiku liečiv, ale aj ich bezpečnosť a účinnosť. Predstavujú miesta pôsobenia interakcií liečiv s inými liečivami/zložkami potravy, ktoré môžu viesť ku zmene účinnosti liečiv alebo toxicite. Keďže FDA (Úrad pro kontrolu potravín a liečiv) a EMA (Európska lieková agentúra) nemajú intestinálne OATP transportéry zahrnuté vo svojich smerniciach preklinických štúdií, nie je vypracovaný jednotný model skúmania interakcií. Limitácie bunkových modelov a geneticky modifikovaných organizmov vedú k rozvoju nových metód, akým je napríklad ex vivo metóda ultratenkých intestinálnych rezov (PCIS), ktorá predstavuje tkanivový model reflektujúci skutočnú 3D štruktúru črevnej bariéry. Cieľom...
|
|
|
Study of the effect of novel antiretroviral drugs on carnitine transport in the placenta
Marková, Eliška ; Čečková, Martina (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student/ka: Eliška Marková Školitel: doc. PharmDr. Martina Čečková, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení vlivu vybraných nových antiretrovirálních léčiv na transport karnitinu v placentě Antiretrovirální léčba HIV-pozitivních těhotných žen představuje v současnosti standardní přístup pro omezení přenosu HIV z matky na plod. Přes nezbytnost této terapie je nicméně důležité, znát její bezpečnost a rizika. Pro správný vývoj plodu a funkci placenty je mj. nezbytný optimální přísun L-karnitinu, klíčového faktoru pro oxidaci mastných kyselin, z krve matky do placenty a krevního oběhu plodu. Publikované studie naznačují častější výskyt onemocnění kardiovaskulárního systému a kardiomyopatií u dětí narozených matkám, jímž byla v průběhu těhotenství podávána antiretrovirální terapie. Optimální transport karnitinu do buněk placenty je zajištěn díky přítomnosti funkčního transportního proteinu OCTN2 v apikální mikrovilózní membráně trofoblastu. Cílem této práce bylo vyhodnotit, zda antiretrovirální léčiva ze skupin nenuklesidových inhibitorů reverzní transkriptázy (rilpivirin a efavirenz), inhibitorů proteáz (ritonavir, sachinavir, tipranavir, lopinavir a atazanavir) a inhibitorů integrázy (dolutegravir a...
|
|
|
Role lékových transportérů v placentárním přestupu entekaviru
Křečková, Veronika ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Veronika Křečková Školitel: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název diplomové práce: Role lékových transportérů v placentárním přestupu entekaviru Entekavir (ETV), analog guanosinu, je antivirové léčivo s vysokou účinností proti hepatitidě B. Patří mezi léčiva první volby pro léčbu dospělých i dětí. Jeho využití v těhotenství limituje řada faktorů včetně nedostatku údajů o placentární farmakokinetice. Na placentárním transferu léčiv se podílí řada lékových transportérů. Mezi nejvýznamější patří efluxní ATP-vázající (ABC) transportéry, P-glykoprotein (P-gp), breast cancer resistance protein (BCRP) či multidrug resistance-associated protein 2 (MRP2), lokalizované v apikální membráně syncytiotrofoblastu a pumpující své substráty vefeto-maternálním směru. U léčiv odvozených od nukleosidů může být placentární transport ovlivněn i aktivitou nukleosidových transportérů (NTs). Ekvilibrační nukleosidové transportéry (ENTs) regulují intracelulární koncentraci substrátů facilitovanou difuzí, zatímco koncentrační (CNTs) zprostředkovávají pouze aktivní influx. Cílem této práce bylo popsat roli lidských P-gp, BCRP, MRP2 a NTs (ENTs a CNTs) v placentárním přestupu ETV. K tomu účelu byla použita in vitro transportní metoda...
|
host ::
RSS.