|
|
Úprava biologického materiálu před HPLC analýzou - stanovení alfa tokoferolu v erytrocytární membráně
Pospíchalová, Naďa ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
α-Tokoferol je hlavním antioxidantem buněčných membrán savců, jeho účinky však nespočívají pouze v antioxidační aktivitě. Řada studií poukazuje na to, že hladiny α-tokoferolu v membráně erytrocytů vypovídají lépe o jeho saturaci organismu než hladiny plasmatické. Tato diplomová práce se zabývá stanovením α-tokoferolu pomocí HPLC-UV s využitím diferenciální ultracentrifugace a extrakce tuhou fází (SPE) v přípravě vzorku. Vzorky erytrocytů byly ultracentrifugovány (288 000 g, 3 minuty, 4 řC) v přítomnosti butylhydroxytoluenu (BHT), D-mannitolu, HEPES a CaCl2. Poté byl α-tokoferol extrahován z membrán erytrocytů hexanem pomocí extrakce na tuhou fázi za použití kyseliny askorbové a vnitřního standardu tokoferol acetátu. Extrakt, rozpuštěný v methanolu, byl separován na monolitické koloně Chromolith Performance RP-18e (100 4,6 mm) 100% methanolovou mobilní fází. Absorbance byla změřena při 295 nm.
|
|
|
Optimalizace postupu izolace fosforylovaných peptidů ze směsi metodou afinitní chromatografie na oxidech kovů pro analýzu hmotnostní spektrometrií
Popovská, Lenka ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Lenka Popovská Školitel: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Školitel specialista: Mgr. Barbora Šalovská, Ph.D. Název rigorózní práce: Optimalizace postupu izolace fosforylovaných peptidů ze směsi metodou afinitní chromatografie na oxidech kovů pro analýzu hmotnostní spektrometrií. Fosforylace proteinů je klíčovým regulačním mechanismem buněčné signalizace. Je součástí většiny buněčných dějů, jež se odehrávají za komplexní souhry proteinkináz a proteinfosfatáz, a mezi které řadíme především proliferaci, diferenciaci a apoptózu. Defektní či pozměněné signální dráhy mohou vést ke vzniku různých chorob, a proto je velmi důležité proteinovou fosforylaci podrobně studovat a snažit se jí co nejvíce porozumět. Technologický vývoj hmotnostní spektrometrie (MS) posledních let umožnil výrazné zvýšení počtu fosforylačních míst, které mohou být ve vzorku identifikovány. Zvyšující se skenovací rychlost společně s komerční dostupností MS s vysokým rozlišením zvýšily množství a kvalitu dat, které mohou být získány v relativně krátkém čase. Avšak ani špičkové přístroje by neumožnily komplexní identifikaci fosforylačních míst v enzymatických lyzátech (digestech) vzorků, pokud by samotné analýze nepředcházela některá z...
|
|
|
Chemiluminiscenční hodnocení celkové antioxidační kapacity potravin
Vlčková, Jitka ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Solich, Petr (oponent)
Diplomová práce 2009 Abstract_CZE Jitka Vlčková SOUHRN Práce se zabývá měřením a hodnocením celkové antioxidační kapacity (TAC) ve vzorcích červeného vína ošetřených čtyřmi čeřícími činidly (třemi různými typy želatiny a polyvinylpolypyrrolidonem) v koncentracích 10, 20 a 40 g/hL. Hlavním cílem bylo zjistit, jak čeřidla v různých dávkách ovlivňují TAC. Druhá část se zabývá vztahy mezi změnami TAC a obsahy jednotlivých antioxidačních komponent ve vzorcích (celkového množství polyfenolů, antokyanů, kyseliny gallové a nízkomolekulárních fenolů). Celková antioxidační kapacita byla hodnocena metodou TEAC (Trolox equivalent antioxidant capacity assay). Teoretická část diplomové práce stručně shrnuje základy o luminescenci, zaměřené na chemiluminiscenční reakce. Teorie volných radikálů a antioxidanty, zejména ty, které jsou zahrnuty v červeném víně, jsou také popsány. Proces vinařství, především čiření je také obsažen v této části. Experimentální část popisuje metody stanovení celkové antioxidační kapacity, princip metody CL (chemiluminescent) assay založené na systému luminol/křenová peroxidáza. Výsledky ukazují rozdílné chování polyvinylpolypyrolidonu (PVPP) oproti želatině. Zatímco želatina snižuje TAC, PVPP má tendenci působit opačně. Z hlediska koncentrace se ukázalo, že rozdíly v TAC mezi vzorky obsahujícími...
|
|
|
Uplatnění moderních separačních technik v analýze biologického materiálu
Červinková, Barbora ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Mikuš, Peter (oponent) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra analytické chemie Kandidát Mgr Barbora Červinková Školitel prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Název disertační práce Uplatnění moderních separačních technik v analýze biologického materiálu Předložená disertační práce se zabývá vývojem, optimalizací a validací nových chromatografických metod pro stanovení vitamínů A a E, biomarkerů zánětu a oxidačního poškození nukleových kyselin, včetně jejich extrakce z biologickém materiálu. V první teoretické části práce jsou blíže popsány jednotlivé analyty a možnosti jejich stanovení v biologickém materiálu, moderní trendy v kapalinové chromatografii a vybrané validační normy v bioanalýze. Dále je zde diskutována manipulace s biologickým materiálem od jeho odběru po zpracování v laboratoři - zejména problematika transportu a úpravy vzorku. Druhá část práce je rozdělena do dvou tematických okruhů věnovaných komentářům k publikovaným výstupům. V prvním okruhu jsou komentovány vyvinuté a publikované analytické metody. Jako první je komentována metoda zaměřená na stanovení lipofilních vitamínů v lidském séru pomocí miniaturizované LLE s následnou selektivní separací na fluorované stacionární fázi pomocí systému UHPLC s fluorescenční detekcí a časem analýzy 4 minuty. Následně je diskutováno...
|
|
|
HPLC stanovení betamethasonu a chloramfenikolu s využitím alternativních stacionárních fází
Salabová, Markéta ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Solich, Petr (oponent)
Byl vypracován postup separace a následného stanovení betamethasonu a chloramfenikolu ve farmaceutickém přípravku v očních kapkách BETABIOPTAL® . Analýza probíhala za použití mobilní fáze acetonitril/voda (25:70, v/v), s nastavenou rychlostí průtoku 0,75 ml/min, za teploty 30ř C, s nástřikem 5 l v isokratickém režimu a vlnovou délkou detekce 241 nm. Vnitřním standardem s podobnými vlastnostmi jako obě účinné látky byl zvolen propylparaben. Pro separaci byla vybrána kolona SYNERGI RP Fusion MS 2 cm × 2 mm, s velikostí částic 2 μm. Píky měly dostatečné rozlišení i symetrický tvar a jedna analýza trvala do 2 min při zachování kvality měření (přesnosti a spolehlivosti). Optimalizovaná metoda byla před vlastním měřením validována.
|
|
|
Vývoj HPLC metody stanovení vitamínu D v biologickém materiálu
Vlčková, Alena ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
V diplomové práci byla vyvinuta nová HPLC metoda pro stanovení vitamínů D (vitamín D2, D3) a jeho metabolitů (1,25(OH)2D3, 25(OH)D3) v jednom vzorku s využitím vnitřního standardu. Při navrhovaném stanovení byla použita monolitní kolona Chromolith Performance RP- 18e, 100 x 4,6 mm. Detekce byla prováděna pomocí diode array detektoru při vlnové délce 265 nm pro vitamíny D a jeho metabolity, 295 nm pro vnitřní standard tokol. Jako mobilní fáze byla použita směs methanol : acetonitril : voda v procentuelním zastoupení 12,5 : 85 : 2,5. Průtok mobilní fáze byl 1,5 ml/min a nástřik vzorku na kolonu 20 μl. Celková doba analýzy byla 3,5 minuty včetně ekvilibrace kolony. Metoda byla vypracována a částečně optimalizována se standardy vitamínu D a bude dále validována pro biologický materiál.
|
|
|
HPLC analýza makrolidových a tetracyklinových antibiotik v nemocničních odpadních vodách
Vrubl, Jaroslav ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Polášek, Miroslav (oponent)
HPLC analýza makrolidových a tetracyklinových antibiotik v nemocničních odpadních vodách ABSTRAKT Tetracyklinová a makrolidová antibiotika jsou léčiva užívaná k léčbě infečních onemocnění jak v humánní, tak veterinární medicině.Podobně jako jiné látky znečišťující životní prostředí, mohou v prostředí přetrvávat a indukovat negativní účinky v pozemních i vodních organismech a indukovat vznik bakteriální rezistence. Citlivé analytické metody jsou nezbytné k jejich stanovení v odpadních vodách k odhadu rizika plynoucího z jejich výskytu v životním prostředí. Kvůli vysoké citlivosti, je metoda HPLC-MS nejpoužívanější metodou. Metody využívající UV nebo fluorescenční detekci byly studovány jako alternativa k HPLC-MS. Kolony Hichrom Lichrosorb RP 18, 250 x 4.6 mm i. d. a Chromolith Performance RP 18e, 100 x 4.6 mm i.d. byly užívány při analýze s UV detekcí. Použita byla mobilní fáze ACN: 0.05M KH2PO4 (pH 7.5) 30:70 (v/v), UV detekce probíhala při 215 nm. Metoda využívající derivatizaci pomocí FMOC-Cl byla studována. Analýza byla prováděna na koloně Chromolith Performance RP 18e, 100 x 4.6 mm i. d, fluorescenční detektor byl nastaven na excitační vlnovou délku 286 nm, emisní vlnová délka byla 315 nm. Metoda ke stanovení tetracyklinů s UV detekcí používala gradientovou eluci ACN a 0.02M kyseliny šťavelové. Analýza...
|
|
|
Development of New Methods for Monitoring of Occurence of Pharmaceuticals in the Environment
Aufartová, Jana ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Fiala, Zdeněk (oponent) ; Garcia-Campaña, Ana M. (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát Jana Aufartová Školitel Prof. RNDr. Petr Solich, Csc. Název disertační práce VÝVOJ NOVÝCH METOD PRO STANOVENÍ VYBRANÝCH LÉČIV VE VZORCÍCH ŽIVOTNÍHO PROSTŘEDÍ Neustálý nárůst spotřeby léčiv navyšuje také jejich výskyt v životním prostředí. Léčiva jsou do životního prostředí distribuována v podobě vyloučených metabolitů nebo nezměněných aktivních látek, jako nepoužité léčivé přípravky, které byly nesprávně zlikvidovány (např. spláchnutím do odpadu). Dalším zdrojem léčiv je živočišná výroba v zemědělství, chov dobytka a ryb. Současné technologie úpravy vody neumožňují odstranit veškeré zbytky léčiv ve vodách. Současně se zvyšováním množství těchto látek v odpadních a následně povrchových vodách narůstá význam jejich monitorování. Antibiotika a steroidní hormony jsou velmi využívané skupiny léčiv jak v humánní, tak ve veterinární medicíně. Hlavním problémem těchto skupin látek je vznik bakteriální rezistence v případě antibiotik a ovlivnění endokrinního systému, včetně reprodukčního cyklu v případě steroidních hormonů. Teoretická část předkládané dizertační práce je v nejprve zaměřena na problematiku výskytu antibiotik, steroidních hormonů a benzimidazolových fungicidů v životním prostředí. Následně...
|
|
|
Development of new types of biocompatible hemodialysis membranes for separation of biomolecules
Kohlová, Michaela ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent) ; Pena, Angelina (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové / Univerzita Porto, Farmaceutická fakulta Katedra analytické chemie / Katedra chemických věd Kandidát: Mgr. Michaela Kohlová Školitel: prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Konzultanti: prof. Maria de Conceição Branco Montenegro doc. Alice Santos-Silva Název dizertační práce: Vývoj nových typů biokompatibilních hemodialyzačních membrán pro separaci biomolekul Předkládaná disertační práce je zaměřena na vývoj, přípravu a optimalizaci planárních polysulfonových membrán, které by svými vlastnostmi odpovídaly membránám používaným pro hemodialýzu. Pro přípravu těchto tenkých polopropustných membrán byla použita metoda spin coatingu a fázové inverze, ponořením naneseného filmu do roztoku nerozpouštěla. Jak proces přípravy, tak složení membrán bylo optimalizováno tak, aby finální získaná membrána měla mechanickou odolnost vhodnou pro použití v průtokovém systému, separační vlastnosti vhodné pro hemodialýzu a byla biokompatibilní. Membrána s těmito vlastnostmi byla dále modifikovaná bioaktivními látkami za účelem snížení oxidačního stresu a/nebo chronického zánětu, tedy komplikací běžně se vyskytujících u pacientů podstupujících hemodialýzu. K přípravě těchto bioaktivních membrán byly použity tři různé typy modifikace. Membrány s antioxidační aktivitou...
|
|
|
HPLC stanovení neopterinu, tryptofanu, kynureninu a kreatininu v lidském séru
Prokopová, Veronika ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
V rigorózní práci byla vyvinuta nová HPLC metoda pro současné stanovení neopterinu, tryptofanu, kynureninu a kreatininu v krevním séru a následně byla metoda plně validována. Pro separaci byly použity dvě sériově zapojené monolitní kolony Chromolith Speed ROD RP-18e, 50 x 4,6 mm a Chromolith Performance RP-18e, 100 x 3,0 mm. Ke zlepšení separační účinnosti a odstranění rušivých proteinů séra byla před sériové zapojení kolon přidána předkolona Chromolith Guard RP-18e, 10 x 4,6 mm. Neopterin a tryptofan byly detekovány fluorescenčním detektorem. Pro detekci neopterinu byla použita excitační vlnová délka 353 nm a emisní 438 nm, tryptofan byl detekován při excitační vlnové délce 245 nm a emisní 404 nm. Detekce kreatininu a kynureninu byla prováděna pomocí diode array detektoru při vlnových délkách 235 nm pro kreatinin a 230 nm pro kynurenin. Mobilní fází byl 15 mmol/l fosfátový pufr o pH 4,51 s průtokem 1 ml/min v čase 0 - 3 minuty, poté byl průtok skokově zvýšen na 2,3 ml/min. Celková doba analýzy byla 9,5 minuty. Nástřik vzorku na kolonu byl 1 µl. Metoda byla vypracována a validována se standardy stanovovaných analytů a pomocí lidského krevního séra.
|
host ::
RSS.