|
Vývoj analytické metody pro studium významu hydrazonových metabolitů při intoxikaci izoniazidem II.
Charvátová, Jana ; Vrbatová, Ivana (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Diplomová práce Abstrakt 51 Abstrakt Vývoj analytické metody pro studium významu hydrazonových metabolitů při intoxikaci izoniazidem II. Jana Charvátová Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Heyrovského 1203, 500 05 Hradec Králové Klíčová slova: izoniazid, vitamín B6, hydrazon, hydrofilní interakční chromatografie Byla vyvinuta HPLC/UV metoda umožňující separaci izoniazidu - INH, jeho hlavního metabolitu (acetylizoniazid - AcINH) a potenciálních metabolitů (pyridoxal isonikotinoyl hydrazon - PIH, pyridoxal isonikotinoyl hydrazon-5-fosfát - PIH5P), vitamínů B6 (pyridoxin - PN, pyridoxal - PL a pyridoxal-5-fosfát - PLP) za užití ZIC-pHILIC stacionární fáze. Pro zjištění vlivu na retenci daných látek byly optimalizovány následující parametry: složení mobilní fáze, procentuální zastoupení organické fáze, síla a pH pufru, průtok mobilní fáze a teplota kolony. Nejlepší dostupné separace bylo dosaženo za použití 10mM mravenčanu amonného (pH 3) a ACN (40:60, v/v) při průtoku 0,10 ml/min a teplotě kolony 25 řC. Vyvinuté podmínky byly následně úspěšně použity při HPLC/ESI/MS analýze. Experimentálně bylo zjištěno, že nejintenzivnějším iontem ve spektru u všech analytů jsou protonované molekuly v pozitivním módu [M+H]+ . Analyty byly hodnoceny v...
|
|
Development of LC/MS/MS method for determination of ambrisentan, midazolam and its metabolite in human plasma
Klivický, Michal ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Vývoj LC/MS/MS metody pro stanovení hladin ambrisentanu, midazolamu a jeho metabolitu v lidské plazmě Diplomová práce Michal Klivický Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Heyrovského 1203, Hradec Králové. Ambrisentan (ABT) je nová účinná látka pro léčbu pulmonální arteriální hypertenze, která je metabolizována cytochromem CYP3A4. Farmakokinetický profil midazolamu (MDL) a jeho hlavního metabolitu 1-hydroxymidazolamu (OH-MDL) se používá jako marker aktivity CYPu 3A4. Simultánní stanovení ambrisentanu, midazolamu a 1-hydroxymidazolamu je výhodné pro studium vlivu indukce či inhibice CYPu 3A4 na farmakokinetiku ambrisentanu. HPLC/MS/MS metoda pro jejich analýzu v lidské plazmě byla vyvinuta a validována. Po extrakci na pevné fázi na SPE koloně Strata-X (Phenomenex) byly analyty separovány na analytické koloně Synergi MAX-RP (150×4.6 mm, 4µm) (Phenomenex) s použitím izokratické eluce a acetonitrilu/5mM ammoniumacetátu 41:59 (v/v) jako mobilní fáze. Pro detekci byla využita tandemová hmotnostní spektrometrie na trojitém kvadrupólu. Ambrisentan-d3, midazolam-d5 a 13 C3-1-hydroxymidazolam byly použity jako vnitřní standardy. Kalibrační křivky byly lineární mezi 2,03 a 150 ng/ml pro MDL (r2 = 0,9993) a OH-MDL (r2 = 0,9987) a mezi...
|
|
Využití separačních metod v analýze léčiv IV.
Ondrišíková, Lucie ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Vrbatová, Ivana (oponent)
Využití separačních metod v analýze léčiv IV. Diplomová práce Lucie Ondrišíková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, Hradec Králové Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je v současné době jedna z nejprogresivnějších analytických metod, která nachází stále větší uplatnění ve všech oblastech analýzy léčiv. V současnosti je většina analýz realizována pomocí silikagelových kolon, které navzdory četným pozitivním vlastnostem (např. největší výběr různých velikostí částic, průměrů pórů a ploch povrchů; velký výběr různých reverzních fází) mají také určitá omezení - především jsou stabilní pouze v poměrně úzkém rozmezí pH = 2,0 -8,0 a teplotě cca do 60řC. Z těchto důvodů se neustále vyvíjejí a testují pro výrobu stacionárních fází materiály s výhodnějšími vlastnostmi. Jako velmi perspektivní se nyní ukazuje oxid zirkoničitý - je stabilní v celém rozmezí pH a teplotě až do 200řC. Tato diplomová práce se v teoretické části zabývá fyzikálními a chemickými vlastnostmi oxidu zirkoničitého, vlastnostmi HPLC kolon na bázi oxidu zirkoničitého a jejich srovnáním se silikagelovými kolonami. Experimentální část je zaměřena na studium a porovnání retenčního chování neutrálních, kyselých a bazických látek na Zr-PBD a...
|
|
Studium membránových receptorů pomocí vazby radioligandů
Rejhová, Alexandra ; Hudeček, Jiří (vedoucí práce) ; Hejnová, Lucie (oponent)
Závislost na drogách, resp. opioidech, je celospolečenským problémem, jehož závažnost je v současné době na vzestupu. Se zneužíváním návykových látek je spojen také fenomén tolerance ke zvyšující se dávce a abstinenční syndrom způsobený vysazením drogy a bažení po droze (tzv. craving). Receptory pro opioidy patří do velké skupiny receptorů spřažených s G-proteiny (GPCR), jejichž vlastnosti lze zkoumat metodou agonistou-stimulovanou vazbou [35 S]GTPγS. Mnoho extracelulárních signálů je zprostředkováno do buňky prostřednictvím GPCR. Agonisté opioidních receptorů inhibují aktivitu adenylylcyklasy a jsou spřaženy s G-proteiny skupiny Gi/Go. Tato práce je věnována studiu změn izolovaných plasmatických membrán obsahujících opioidní receptory z předního mozku potkanů zdravých jedinců s plasmatickými membránami získanými z jedinců, kterým bylo dlouhodobě podáváno morfium ve zvyšujících se dávkách tak, aby vznikla závislost. Srovnávání je prováděno jednak pomocí vazby [3 H]ouabainu na Na,K-ATPasu, která se projeví jako negativní standard změn, jednak pomocí vazby [35 S]GTPγS na G-protein, čímž je stanovena funkční aktivita G-proteinu při stimulaci vazby agonistou δ-opioidních receptorů DADLE nebo agonistou µ-opioidních receptorů DAMGO. Dále byl zkoumán vliv prostaglandinu E1 na vazbu [35 S]GTPγS po...
|
|
Analýza trhu s androgenními anabolickými steroidy
Holčapek, František ; Běláčková, Vendula (vedoucí práce) ; Chmelová, Pavla (oponent)
Diplomová práce se zabývá problematikou černého trhu s dopingem, se zvláštním zaměřením na androgenní anabolické steroidy (AAS). Lékařské studie se shodují v tom, že tyto látky ve formě a kvantitě zneužívané sportovci pro zlepšení výkonnosti jsou pro tělo škodlivé a diplomant hledá doporučení pro hospodářskou politiku státu, jak jejich zneužívání snížit. Studium ekonomických pramenů (zvláště "Teorie racionální závislosti" od G. Beckera) ukazuje, že uživatelé AAS jsou racionální, mnohdy racionálnější než uživatelé jiných škodlivých látek, neboť k jejich zneužívání přistupují s dlouhodobým plánem. Důvodem jejich cílevědomého přístupu jest, že výsledná "slast" je až odvozená od vydřeného úspěchu na rozdíl od jiných drog, a proto je jejich užívání spojeno s disciplínou, kalkulací a tedy i (omezenou) racionalitou. Ekonomové navazující na Beckerovu teorii poukazují na případy, kdy je ona omezenost tak výrazná, že ospravedlňuje regulaci. Diplomová práce vychází z předpokladu, podloženým studiemi, že prohibice nabídky či sankcionování samotného zneužívání AAS jsou nástroje neúčinné a hledá alternativní řešení. Diplomant se domnívá, že hlavními determinanty poptávky po AAS jsou klamavá media; benevolentní přístup státu vůči kulturistickým soutěžím; v neposlední řadě sama prohibice, vedoucí k vzniku černého trhu, který znemožňuje optimální informovanost (potenciálních) uživatelů ohledně zdravotních rizik atp. Tato hypotéza je ověřována dotazníkovým průzkumem, distribuovaným zejména přes sociální sítě. Diplomant závěrem stanovuje doporučení pro hospodářskou politiku: aby restriktivní ruka státu zaměřila pozornost opačným směrem než dosud, tj. na poptávkovou stranu a nenásilně tak demotivovala uživatele.
|
|
Methods for Leishmania parasite detection and quantificatio as a tool for study of the pathogen-vector-host interactions
Kobets, Tetyana ; Lipoldová, Marie (vedoucí práce) ; Kodym, Petr (oponent) ; Kopecký, Jan (oponent)
Metody detekce a kvantifikace parazitů rodu Leishmania jako nástroj pro studium vzájemného působení patogenu, vektoru a hostitele Leishmaniáza je u lidí působena 21 druhem vnitrobuněčného jednobuněčného parazita rodu Leishmania, který je přenášen přibližně 30 druhy flebotomů. Kromě člověka jsou leishmánie schopné infikovat celou řadu obratlovců. Hlavní hostitelskou buňkou, v níž se parazit množí, je makrofág; posléze leishmánie buňku ničí a infikují další buňky. Nakažené monocyty a makrofágy cirkulují v periferní krvi a roznášejí parazita do dalších orgánů a tkání. V závislosti na infikované část těla jsou rozlišovány tři typy leishmaniázy: kožní, kožně-slizniční a viscerální. Pro léčbu leishmaniázy stále ještě chybí účinné, dostupné a jednoduše aplikovatelné léky. Zanedbaná je také diagnostika a monitorování onemocnění. Tato disertační práce shrnuje výsledky několika projektů, ve kterých byly použity různé přístupy k určení množství parazitů v myším modelu leishmaniázy, včetně dvou metod, které byly vyvinuty a optimizovány v naší laboratoři. Detekce a kvantifikace patogenů patří k hlavním tématům výzkumu různých infekčních chorob. Tento parametr je nezbytný pro potvrzení diagnózy, charakterizaci imunitní odpovědi hostitele a komplexních patologických změn v nakaženém organismu, a také pro posouzení...
|
|
Studium kinetiky samouspořádávacího procesu kolagenu I
Voldánová, Michaela ; Ondreáš, František (oponent) ; Jančář, Josef (vedoucí práce)
Kolagen, nejhojnější protein pojivových tkání, má v různých formách široké uplatnění díky svým rozmanitým biologickým i chemickým vlastnostem. Jednou z forem jsou kolagenové hydrogely, jež jsou považovány za velice vhodný materiál pro aplikaci v tkáňovém inženýrství, jelikož jsou schopny poskytovat biologicky rozložitelné scaffoldy, které se svými vlastnostmi shodují s živými tkáněmi. Tyto systémy nacházejí uplatnění například jako nosiče pro cílené dodávání léčiv s jejich řízeným uvolňováním, v kombinaci s buňkami je lze využít pro regeneraci a rekonstrukci tkání a orgánů. Zahříváním vodného roztoku kolagenu dochází k spontánnímu procesu samouspořádávání do různě distribuovaných fibrilárních struktur, které jsou v pozdější fázi fibrilogeneze předpokladem pro vytvoření opěrné trojrozměrné sítě, jež je základním stavebním prvkem gelu. Výsledné vlastnosti hydrogelu závisí nejen na jeho struktuře, ale také na podmínkách, při kterých dochází k procesu samouspořádávání. Hydrogely byly připraveny při teplotě 37 °C a fyziologickém pH. Studovaná strukturní proměnná byla koncentrace kolagenu. Doposud byly pro výzkum samouspořádávání využívány metody spektrometrické, které poskytují pouze informace o kinetice morfogeneze. V této práci byly pro výzkum kinetiky samouspořádavacího procesu kolagenu I využity metody reologické, které navíc přinášejí informace o viskoelastických vlastnostech vzniklého materiálu. Získaná experimentální data potvrdila dvoustupňový proces fibrilogeneze kolagenu I sestávajícího z nukleačního a růstového procesu. Reologicky se hydrogely kolagenu chovaly jako nelineární pseudoplastické látky s mezí kluzu. Byl učiněn pokus o molekulární interpretaci získaných výsledků. Za využití 2-parametrické Avramiho rovnice byla stanovena rychlost samouspořádávání pro jednotlivé koncentrace kolagenu a hodnota Avramiho exponentu určujícího tvar vznikajících útvarů. Připravené hydrogely byly rovněž vystaveny zvyšujícímu se smykovému namáhání (amplituda deformace, smyková rychlost). Při větších amplitudách docházelo k rozpadu vzniklé struktury hydrogelu, přičemž byla zachována schopnost částečné regenerace struktury.
|
|
Structural-Functional Correlations of Hydroxymethylbilane synthase
Douděrová, Dana
SOUHRN Akutní intermitentní porfyrie (AIP, OMIM 176000) je autosomálně dominantní vrozená porucha, která se řadí mezi akutní jaterní porfyrie. Je způsobená částečným snížením aktivity hydroxymetylbilan syntázy (HMBS, EC 4.3.1.8), třetího enzymu biosyntetické dráhy hemu. Klinické příznaky zahrnují gastrointestinální, neurologické a kardiovaskulární symptomy, ale nejčastějším projevem je abdominální bolest neuroviscerálního původu. Základním cílem této disertační práce bylo provádění molekulární analýzy DNA u pacientů s AIP. V případě, že je u pacienta nalezena mutace, testování DNA na molekulární úrovni je nabídnuto rovněž ostatním příbuzným. Tento individualizovaný přístup umožňuje zachycení asymptomatických jedinců v postižené rodině. Ti jsou pak informováni o vhodnosti požívání léků a o dalších faktorech, které mohou vyvolat nebezpečné akutní ataky. V ideálním případě je DNA diagnostika složena z robustní a efektivní skenovací metody a potvrzujícího kroku, který využívá DNA sekvenování. Rozhodli jsme se zavést skenovací metodu nové generace, která je vysoce citlivá a relativně časově i finančně nenáročná. Zvolili jsme metodu high-resolution melting (HRM) s využitím přístroje LightScanner. Dalším důležitým aspektem tohoto projektu bylo studium molekulární heterogenity AIP ve vztahu k struktuře proteinu....
|
|
Cell cycle and differentiation in Giardia Intestinalis
Jiráková, Klára ; Nohýnková, Eva (vedoucí práce) ; Doležal, Pavel (oponent) ; Müller, Norbert (oponent)
Giardia je jednobuněčný parazitický organismus, který je zdrojem průjmových onemocnění po celém světě. Má minimální genomovou výbavu a zjednodušené molekulární a metabolické dráhy. V tomto ohledu je to vhodný modelový organismus pro studium regulace buněčného cyklu a pro definici minimální genetické a proteinové výbavy nutné pro reprodukci eukaryotické buňky. V životním cyklu giardie se vyskytují dvě stádia: patogenní trofozoit a infekční cysta, která dokáže přežít ve vnějších podmínkách. Nové znalosti o encystaci mohou být významné z terapeutického hlediska, protože na tento proces je zacílen vývoj vakcíny a léků. Protože studium buněčného cyklu vyžaduje synchronizovanou populaci, studovali jsme vliv synchronizační látky aphidicolinu na jednotlivé buněčné děje během buněčného cyklu trofozoitů giardie. Naše výsledky ukázaly, že aphidicolin zastavil syntézu DNA a trofozoiti byli zablokováni podle obsahu DNA na hranici G1/S fáze. Následná inhibice vstupu do mitózy a cytokineze naznačuje, že Giardia má funkční kontrolní bod při poškozené DNA. Aphidicolin působí při dlouhodobé inkubaci a vyšších koncentracích vedlejší efekty; detekovali jsme pozitivní signál pro fosforylovaný histon H2A, který je u savčích buněk součástí signalizační dráhy spuštěné jako reakce na dvouřetězcové zlomy v DNA....
|
|
VOLTAMETRICKÉ STANOVENÍ PROTINÁDOROVÉHO LÉČIVA FLUTAMIDU A JEHO METABOLITU 4-NITRO-3-TRIFLUORMETHYLANILINU
Radová, Jitka ; Barek, Jiří (vedoucí práce) ; Dejmková, Hana (oponent)
Předmětem diplomové práce bylo studium elektrochemického chování protinádorového léčiva flutamidu (FLD) a jednoho z jeho metabolitů 4-nitro-3- trifluormethylanilinu (NTMA). Cílem bylo nalézt a definovat optimální podmínky stanovení obou látek za použití rtuťovým meniskem modifikované stříbrné tuhé amalgámové elektrody (m-AgSAE) a uhlíkové filmové elektrody (CFE) s využití metod DC voltametrie (DCV) a diferenční pulsní voltametrie (DPV). Tato práce úzce navazuje na bakalářskou práci vypracovanou na katedře analytické chemie PřF UK, v které bylo popsáno voltmetrické stanovení FLD pomocí metod DCV a DPV za použití m-AgSAE, kde bylo dosaženo mezí stanovitelnosti (LQ) 5,0·10-6 mol.dm-3 (pro DCV) a 3,0·10-6 mol.dm-3 (pro DPV). V předkládané diplomové práci bylo sledováno voltametrické chování NTMA v závislosti na změně pH prostředí Brittonova-Robinsonova (BR) pufru-methanolu (9:1). Byly nalezeny optimální podmínky pro stanovení této látky metodami DCV a DPV v katodické oblasti potenciálů za použití m-AgSAE a CFE. Jako optimální prostředí byla zvolena BR pufr-methanol (9:1) o výsledném pHf 8,3 pro DCV i DPV na m-AgSAE a pHf 5,1 pro DCV i DPV na CFE. Dále byly získány LQ při proměření koncentrační závislosti a opakovatelnosti pro jednotlivá stanovení v koncentračních řádech 10-5 , 10-6 či až 10-7 mol.dm- 3...
|
host ::
