|
|
Studie o účinku ivermektinu na purinergní P2X4 receptor
Jelínková, Irena ; Teisinger, Jan (vedoucí práce) ; Šťastný, František (oponent) ; Krůšek, Jan (oponent)
P2~ receptor je iontový kanál, jehož ligandem je ATP. Je to jediný savčí purinergní receptor, který může být modulován působenim extracelulárně aplikovaného ivennektinu (IVM). IVM je alosterický modulátor, který zvyšuje citlivost P2~ receptoru k agonistům, potencuje maximálni proudové odpovědi a prodlužuje dobu deaktivace kanálu po od mytí agonisty. V této studii jsme se pokusili lokalizovat vazebné místo pro IVM a pomocí jeho pozitivního alosterického účinku získat nové infonnace o vztahu struktury a funkce P2~ receptoru. Nejdříve jsme se zaměřili na identifikaci oblastí P2X4 receptoru a jednotlivých aminokyselinových zbytků, které se podílejí na úč incích IVM na otevírání kanálu. K tomuto účelu jsme využili různé chimémí receptory P2X2 a P2~ receptorů a dále také řadu bodových mutantních receptorů. Experimenty s chimérními receptory ukázaly, že extracelulární sekvence V 49-V61, ale ne sekvence V64-Y315, je důležitá pro účinek IVM na deaktivaci kanálu. Receptor-specifické mutace v oblasti trans membránových domén G29-V61 a N338-L358 ukázaly, že také zbytky W50, V61 a V357 hrají roli v účinku IVM na deaktivaci kanálu. Následně jsme také testovali význam všech z bytků v oblasti transmembránových domén. Výsledky cysteinové skenovací mutageneze po dpořily naši domněnku o významu zbytku W50 a dále také odhalily...
|
|
|
Význam ischemického poškození mozku v neurovývojovém animálním modelu schizofrenie
Kaiser, Miroslav ; Šťastný, František (vedoucí práce) ; Marešová, Dana (oponent) ; Kršiak, Miloslav (oponent)
Výsledky charakterizují vypracovaný animální model psychózy založený na krátkodobé neonatální ischémii mozku a dokládají jistou míru jak konstrukční, fenomenologické tak i predikční validity. Vzniklé ischemicko-hypoxické poškození, které jsme navodili dočasným uzávěrem obou společných krkavic potkana 12. PND, lze s přihlédnutím k rozdílnému stupni zralosti funkcí přirovnat k situaci způsobené perinatální hypoxií lidského plodu a novorozence. Přes dílčí rozdíly ve vybraných biochemických ukazatelích (napětí krevních plynů, aktivita GGT, hladiny druhých poslů), jsme pozorovali změny v chování potkana v období jeho pohlavního dospívání, které podporují původní předpoklad, že perinatální hypoxie lidského plodu a novorozence je etiopatogenetickým faktorem pro vznik schizofrenie, a to především u jedinců s genetickým rizikem jaké představují jednonukleotidové polymorfizmy kandidátních genů
|
|
| |
|
| |
|
|
Studie o účinku ivermektinu na purinergní P2X4 receptor
Jelínková, Irena ; Teisinger, Jan (vedoucí práce) ; Šťastný, František (oponent) ; Krůšek, Jan (oponent)
P2~ receptor je iontový kanál, jehož ligandem je ATP. Je to jediný savčí purinergní receptor, který může být modulován působenim extracelulárně aplikovaného ivennektinu (IVM). IVM je alosterický modulátor, který zvyšuje citlivost P2~ receptoru k agonistům, potencuje maximálni proudové odpovědi a prodlužuje dobu deaktivace kanálu po od mytí agonisty. V této studii jsme se pokusili lokalizovat vazebné místo pro IVM a pomocí jeho pozitivního alosterického účinku získat nové infonnace o vztahu struktury a funkce P2~ receptoru. Nejdříve jsme se zaměřili na identifikaci oblastí P2X4 receptoru a jednotlivých aminokyselinových zbytků, které se podílejí na úč incích IVM na otevírání kanálu. K tomuto účelu jsme využili různé chimémí receptory P2X2 a P2~ receptorů a dále také řadu bodových mutantních receptorů. Experimenty s chimérními receptory ukázaly, že extracelulární sekvence V 49-V61, ale ne sekvence V64-Y315, je důležitá pro účinek IVM na deaktivaci kanálu. Receptor-specifické mutace v oblasti trans membránových domén G29-V61 a N338-L358 ukázaly, že také zbytky W50, V61 a V357 hrají roli v účinku IVM na deaktivaci kanálu. Následně jsme také testovali význam všech z bytků v oblasti transmembránových domén. Výsledky cysteinové skenovací mutageneze po dpořily naši domněnku o významu zbytku W50 a dále také odhalily...
|
|
|
Význam ischemického poškození mozku v neurovývojovém animálním modelu schizofrenie
Kaiser, Miroslav ; Šťastný, František (vedoucí práce) ; Marešová, Dana (oponent) ; Kršiak, Miloslav (oponent)
Výsledky charakterizují vypracovaný animální model psychózy založený na krátkodobé neonatální ischémii mozku a dokládají jistou míru jak konstrukční, fenomenologické tak i predikční validity. Vzniklé ischemicko-hypoxické poškození, které jsme navodili dočasným uzávěrem obou společných krkavic potkana 12. PND, lze s přihlédnutím k rozdílnému stupni zralosti funkcí přirovnat k situaci způsobené perinatální hypoxií lidského plodu a novorozence. Přes dílčí rozdíly ve vybraných biochemických ukazatelích (napětí krevních plynů, aktivita GGT, hladiny druhých poslů), jsme pozorovali změny v chování potkana v období jeho pohlavního dospívání, které podporují původní předpoklad, že perinatální hypoxie lidského plodu a novorozence je etiopatogenetickým faktorem pro vznik schizofrenie, a to především u jedinců s genetickým rizikem jaké představují jednonukleotidové polymorfizmy kandidátních genů
|
|
|
Studium modulace rekombinativních a nativních NMDA receptorů fyzikálními a chemickými faktory
Cais, Ondřej ; Vyklický, Ladislav (vedoucí práce) ; Blahoš, Jaroslav (oponent) ; Chvátal, Alexandr (oponent) ; Šťastný, František (oponent)
Většina excitačního synaptického přenosu v savčí centrální soustavě je zprostředkována ionotropními glutamátovými receptory. NMDA receptory, tvořící jednu ze tří tříd této skupiny chemicky aktivovaných iontových kanálů, se mimo to podílejí též na tvorbě paměti a procesu učení a hrají roli i v etiologii nejrůznějších neurodegenerativních onemocnění. Dosavadní znalosti o mechanismu funkce NMDA receptorů jsou vesměs založené na výsledcích in vitro experimentů prováděných při pokojové teplotě, tedy daleko od fyziologického stavu. Cílem této disertační práce bylo charakterizovat teplotní závislost NMDA receptorů. Stanovili jsme rychlostní konstanty popisující jednotlivé kroky v mechanismu aktivace rekombinantních NR1/NR2B receptorů v teplotním rozmezí 25-45řC. Nejvíce teplotně citlivými se ukázaly být procesy desenzitizace, resenzitizace a odvazování glutamátu. Dále jsme popsali teplotní závislost deaktivace v různých experimentálních modelech NMDA receptorů (rekombinantních i nativních). Druhá část disertační práce se zaměřila na modulaci funkce NMDA receptorů steroidními látkami odvozenými od endogenního neurosteroidu pregnanolonsulfátu. Otestovali jsme celkem 21 steroidů vyznačujících se různou mírou inhibice (a v jednom případě potenciace) proudových odpovědí NMDA receptorů. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Úloha glutamáterngného systému v patofyziologii schizofrenie
Bubeníková, Věra ; Šťastný, František (vedoucí práce) ; Mareš, Pavel (oponent) ; Rokyta, Richard (oponent)
Předmětem práce bylo vypracovat neurovývojový model schizofrenie. Neurovývojový model schizofrenie je založen na předpokladu, že experimentální poškození vyvíjejícího se mozku změní celkové chováni jedince v dospělosti, které je charakterizováno jako schizofrenii-podobné. Poškození v časném postnatálním období potkana (12. postnatální den) bylo navozeno intracerebroventrikulámí (icv) infuzí Nacetyl- L-aspartyl-L-glutamátu (NAAG). Histomorfologické rozložení poškození, včetně kvantitativní analýzy, jsme zhodnotili 24 a 96 hodin po podáni NAAG. Chování potkanů jsme pozorovali v časné adolescenci a dospělosti potkana. NAAG je neuropetid, který je přítomen v mozku savců ve velkém množství. Tento dipeptid aktivuje metabotropní glutamátové receptory (mGluR II), ale také NMDA receptory. Neonatálni icv infuze NAAG poškodila především neurony gyrus dentatus 24 hodin po infuzi. Poškozené neurony jsme prokázali barvením dle Nissla, barvením Fluoro Jade В v kombinaci s Hoechst 33342 a technikou TUNEL. Neonatálni léze změnila některé projevy chování potkana v časné dospělosti v testu otevřeného pole (zvýšení čištění). Potkani po podáni NAAG vykazovali zvýšenou reakci po podání GBR 12909 (inhibitor dopaminového transportéru) v testu otevřeného pole (snížení imobility a čištění). Naopak tito potkani byli méně citliví na...
|
|
| |
|
| |
host ::
RSS.