|
|
Analysis of bumblebee lipids using chromatographic methods
Kudzejová, Michaela ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent)
Lipidy z tukového tělesa matek čmeláka zemního (Bombus terrestris) v různých stádiích života byly studovány pomocí chromatografických metod. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie s hmotnostním spektrometrem (LC-MS) s elektrosprejovou ionizací byla použita k analýze všech lipidů z tkáně. Semipreparativní tenkovrstvá chromatografie byla použita k izolaci triglyceridů (TG) z tkáně tukového tělesa. TG byly následně analyzovány pomocí LC-MS s chemickou ionizací za atmosférického tlaku. Byly nalezeny výrazné kvantitativní rozdíly ve složení lipidů matek v různých fázích života. Kvalitativní složení se výrazně neměnilo. Pouze malé rozdíly byly nalezeny u látek, které byly ve vzorcích přítomny v zastoupení menším než 1 %.
|
|
|
Liquid Chromatography Methods for Analysis of Actinomycete Secondary Metabolites - Potential Antibiotics
Kameník, Zdeněk ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
(CZ) Tato disertační práce obsahuje vědecké výsledky dosažené v oboru analytické chemie, konkrétně kapalinové chromatografie. Většina těchto výsledků byla uveřejněna v prestižních zahraničních časopisech v pěti publikacích. Navíc obsahuje práce některé významné, dosud nepublikované výsledky. Z obecného pohledu přispěla tato práce k současným snahám vynakládaným za účelem objevu nových antibiotik. Konkrétně byly v rámci této práce využity techniky vysokoúčinné kapalinové (HPLC) a ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC) pro analýzu antibiotik a sekundárních metabolitů aktinomycet. První tematický okruh popisuje vývoj metod kapalinové chromatografie pro analýzu prekurzorů linkomycinu a jejich analogů a derivátů linkomycinu. Metody byly využity pro studium biosyntézy antibiotika linkomycinu a pro získání účinnějších derivátů linkomycinu pomocí mutasyntézy. Druhý tematický okruh je věnován alternativním přístupům pro analýzu antibiotik. Chromatografické kolony s povrchově porézními částicemi byly porovnány s kolonami obsahujícími částice menší než 2 μm. Kolony s povrchově porézními částicemi, které jsou kompatibilní s HPLC, se ukázaly být vhodnou alternativou k druhému uvedenému typu kolon, který lze využít pouze pro UHPLC. Toto zjištění však platí pouze pro analýzu tetracyklinů v kyselých...
|
|
|
Vývoj miniaturizovaného iontového zdroje pro chemickou ionizaci za atmosférického tlaku (HPLC/MS)
Rumlová, Barbora ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Tato práce se zabývá miniaturizovaným iontovým zdrojem pro chemickou ionizaci za atmosférického tlaku (APCI), jehož klíčovou součástí je skleněný vyhřívaný mikrofluidní čip. Iontový zdroj byl sestaven z mikrofluidního čipu umístěného na mikromanipulátoru a jehlové elektrody pro koronový výboj. Geometrické uspořádání těchto prvků vůči vstupní vyhřívané kapiláře hmotnostního spektrometru LCQ Fleet (Thermo) bylo optimalizováno na základě velikosti signálu reserpinu. Roztok reserpinu o koncentraci 10 µg/ml byl kontinuálně přiváděn do vyhřívaného čipu pomocí stříkačkového čerpadla. Dále byl optimalizován průtok nebulizačního plynu. Při stejném hmotnostním toku reserpinu byla velikost signálu protonované molekuly reserpinu o dva řády vyšší než u komerčního iontového zdroje pro APCI (Thermo). Přetrvávajícím problémem testovaného miniaturizovaného zdroje je vysoká nestabilita signálu detekovaných iontů. Klíčová slova: hmotností spektrometrie, mikro APCI, mikrofluidní čip,
|
|
|
Určování poloh dvojných vazeb u triacylglycerolů pomoci HPLC/APCI-MS2
Háková, Eva ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent)
Triacylglyceroly se řadí k jedné z nejhojněji zastoupené lipidové třídě. Jejich chemické, fyzikální i biologické vlastnosti se liší v závislosti na stupni nenasycenosti a polohách dvojných vazeb v acylech. Tato diplomová práce byla zaměřena na lokalizaci dvojných vazeb s využitím tandemové hmotnostní spektrometrie s chemickou ionizací za atmosférického tlaku. Bylo studováno 14 standardů a 44 směsí standardů triacylglycerolů s lišícím se počtem dvojných vazeb i délkou uhlovodíkového řetězce v acylech. Standardy byly získány z komerčních zdrojů a připraveny randomizačními reakcemi v mikroměřítku. Umístění dvojných vazeb se podařilo určit fragmentací molekulárního aduktu s C3H5N+· ([M+55]+·) vznikajícího za přítomnosti acetonitrilu v mobilní fázi. Tato metoda byla posléze aplikována při HPLC/MS analýzách přírodních směsí. Klíčová slova: triacylglyceroly, randomizace, určení polohy dvojné vazby, chemická ionizace za atmosférického tlaku, hmotnostní spektrometrie, vysokoúčinná kapalinová chromatografie s hmotnostní detekcí
|
|
|
Využití ambientních ionizačních technik v hmotnostní spektrometrii
Rejšek, Jan ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Klíčová slova: ambientní ionizační techniky; hmotnostní spektrometrie; desorpční ionizace elektrosprejem; desorpční fotoionizace za atmosférického tlaku; tenkovrstvá chromatografie, lipidy, zobrazovací hmotnostní spektrometrie Ambientní ionizací v hmotnostní spektrometrii se rozumí ionizace, která probíhá v otevřeném prostoru vně hmotnostního spektrometru a která nevyžaduje žádnou, nebo minimální předúpravu vzorku. V této práci byly používány techniky DESI (desorpční ionizace elektrosprejem) a DAPPI (desorpční fotoionizace za atmosférického tlaku) se softwarově ovládanou polohou sprejeru pro analýzu nízkomolekulárních organických sloučenin. Tyto metody využívají sprejování rozpouštědel k desorpci a ionizaci analytu z pevného substrátu. Byly nalezeny podmínky pro analýzu fosfolipidů, voskových esterů a několika dalších sloučenin. Byly kvantitativně porovnávány jednotlivé ambientní ionizační techniky při měření různých analytů z různých povrchů. Aplikací bylo HPTLC/DESI-MS směsi lipidů a HPTLC/DAPPI-MS novorozeneckého mázku. DAPPI-MS bylo aplikováno pro analýzu termitů rodu Prorhinotermes (Isoptera, Rhinotermitidae). Bylo provedeno pilotní testování plošného vzorku metodou zobrazovací hmotnostní spektrometrie.
|
|
|
Studium nových syntetických drog metodou LC/MS/MS
Obluková, Michaela ; Žabka, Ján (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent)
V současné době se na drogovém trhu objevují nové látky, které jsou zneužívány pro svůj psychoaktivní efekt. Slouží jako alternativa klasických drog (heroin, kokain, extáze atd.), neboť nejsou uvedeny na seznamu zakázaných látek a jejich užívání je legální. Problém těchto látek spočívá v neúčinnosti současných metod toxikologického screeningu biologického materiálu z důvodu velkého množství jednotlivých derivátů. Cílem mé diplomové práce bylo získat nebo rozšířit poznatky o chemických vlastnostech 10-ti standardů nových syntetických drog a jejich metabolitů metodami hmotnostní spektrometrie. Byly optimalizovány podmínky vzniku prekurzorových iontů v iontovém zdroji a podmínky tvorby jejich fragmentů v iontové pasti. Následně byla provedena systematická studie fragmentace těchto iontů. Pro jednotlivé skupiny látek byly určeny charakteristické ztráty neutrálních molekul, jejichž znalost může zvýšit citlivost metody. K podrobnější studii byl vybrán mefedron včetně jeho metabolitů metodou LC-MS/MS. Byl studován standard, negativní moč s přídavkem mefedronu a reálný vzorek moči potkana, kterému byl podán mefedron. Ve vzorku moči byl detekován mefedron a některé jeho metabolity. Získané informace o zkoumaných látkách mohou být následně využity při analýze reálných vzorků pacientů ve spolupráci s Ústavem...
|
|
|
Studium látek ovlivňujících propustnost kožní bariéry
Nováčková, Anna ; Zbytovská, Jarmila (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent) ; Doležal, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické technologie Kandidát Mgr. Anna Nováčková Školitel doc. Mgr. Jarmila Zbytovská, Dr. rer. nat. Název disertační práce Studium látek ovlivňujících propustnost kožní bariéry Kožní bariéra hraje zásadní roli v ochraně lidského organismu a umožňuje tak savcům suchozemský život. Hlavní bariérovou funkci má epidermis díky několika vrstvám buněk, které se postupně diferencují do svého konečného stádia, rohové vrstvy (stratum corneum, SC). SC je tvořeno zrohovatělými keratinocyty (tzv. korneocyty) obklopenými lipidovou matrix. Tato mezibuněčná hmota se skládá z přibližně ekvimolárního množství ceramidů, volných mastných kyselin a cholesterolu. Jsou to látky velmi specifické, tvořené v epidermis z prekurzorů během diferenciace keratinocytů a jejich správné uspořádání do multivrstevných lamel je zásadní pro nepropustnost kožní bariéry. Některé látky nebo faktory však mohou kožní bariéru narušit. Většinou se jedná o narušení nežádoucí, kdy dochází k nerovnováze lipidů, což zapříčiní poruchy a onemocnění kožní bariéry. Avšak existují i látky, které byly cíleně vyvinuty pro reverzibilní narušení kožní bariéry (tzv. enhancery), aby umožnily průnik léčiv při (trans)dermálním podávávání. Cílem této práce bylo studovat obě tyto...
|
|
|
Studium látek ovlivňujících propustnost kožní bariéry
Nováčková, Anna ; Zbytovská, Jarmila (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent) ; Doležal, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické technologie Kandidát Mgr. Anna Nováčková Školitel doc. Mgr. Jarmila Zbytovská, Dr. rer. nat. Název disertační práce Studium látek ovlivňujících propustnost kožní bariéry Kožní bariéra hraje zásadní roli v ochraně lidského organismu a umožňuje tak savcům suchozemský život. Hlavní bariérovou funkci má epidermis díky několika vrstvám buněk, které se postupně diferencují do svého konečného stádia, rohové vrstvy (stratum corneum, SC). SC je tvořeno zrohovatělými keratinocyty (tzv. korneocyty) obklopenými lipidovou matrix. Tato mezibuněčná hmota se skládá z přibližně ekvimolárního množství ceramidů, volných mastných kyselin a cholesterolu. Jsou to látky velmi specifické, tvořené v epidermis z prekurzorů během diferenciace keratinocytů a jejich správné uspořádání do multivrstevných lamel je zásadní pro nepropustnost kožní bariéry. Některé látky nebo faktory však mohou kožní bariéru narušit. Většinou se jedná o narušení nežádoucí, kdy dochází k nerovnováze lipidů, což zapříčiní poruchy a onemocnění kožní bariéry. Avšak existují i látky, které byly cíleně vyvinuty pro reverzibilní narušení kožní bariéry (tzv. enhancery), aby umožnily průnik léčiv při (trans)dermálním podávávání. Cílem této práce bylo studovat obě tyto...
|
|
|
Chromatographic and mass-spectrometric analysis of lipids of vernix caseosa
Vavrušová, Aneta ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kuda, Ondřej (oponent) ; Lísa, Miroslav (oponent)
Lipidomika je rychle se rozšiřující vědní obor, který zaznamenal v posledních letech vzrůstající pozornost a to zejména díky zvyšujícímu se vědomí o stěžejních rolích lipidů v biologických systémech. Hlavním cílem lipidomiky je systematické studium všech lipidů, zahrnuje popis jejich struktury, biologických funkcí v buňce a rovněž popis interakcí lipidů s dalšími molekulami. Spojení pokročilých analytických metod, jako je extrakce, chromatografie a hmotnostní spektrometrie, umožňuje efektivním způsobem studovat všechny aspekty lipidomiky. Předkládaná dizertační práce je komentovaným souborem ke dvěma publikovaným pracím a zabývá se využitím separačních technik a hmotnostní spektrometrie pro detekci a strukturní charakterizaci nových lipidových tříd v novorozeneckém mázku. V prvním případě bude popsáno použití techniky bezvodé kapalinové chromatografie na reverzní fázi ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií s chemickou ionizací za atmosférického tlaku (LC-APCI-MS2 ) pro strukturní charakterizaci cholesterol esterů ω-(O-acyl)-hydroxy mastných kyselin (Chl-ωOAHFAs) v novorozeneckém mázku. Pro účel izolace neutrálních Chl-ωOAHFAs byla vyvinuta metoda adsorpční tenkovrstvé chromatografie. Obecná struktura Chl-ωOAHFAs byla odvozena na základě analýzy jejich produktů transesterifikace a...
|
|
|
Hmotnostní spektrometrie s chemickou ionizací za atmosférického tlaku při nízkých průtocích: konstrukční řešení a využití
Strmeň, Timotej ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Sýkora, David (oponent) ; Polášek, Miroslav (oponent)
(CZ) V první části disertační práce se porovnávají ionizační reakce v APCI zdroji v přítomnosti, respektive nepřítomnosti krytu iontového zdroje (angl. "housing"). Pro účel studie těchto rozdílů se modifikoval komerční APCI zdroj tak, aby ho bylo možné použít jako otevřený i jako uzavřený zdroj. V pozitivním módu byla pozorovaná rozdílná ionizace u nepolárních sloučenin rozpuštěných v aprotických rozpouštědlech (toluenu, chloroformu a sírouhlíku). Zatímco v otevřeném zdroji převažovaly protonované molekuly nepolárních sloučenin, v uzavřeném zdroji byly většinou přítomny jejich radikálkationty. Zvýšená protonace v otevřeném zdroji byla způsobena pronikáním molekul vody do ionizačního prostoru. Voda kromě toho reagovala v otevřeném zdroji s alkyny za vzniku iontu [M + 19]+ . Fragmentační studie potvrdila, že se jednalo o 2-methylketony, které vznikaly adicí vody na alkyny dle Markovnikovho pravidla. Tím se potvrdil výskyt artefaktu v otevřeném zdroji, který může představovat komplikaci při kvalitativních analýzách. Dále bylo v otevřeném zdroji pozorováno potlačení tvorby iontu [M + 55]+ atmosférickým kyslíkem. V uzavřeném zdroji vznikal ion [M + 55]+ reakcí nenasycených sloučenin s acetonitrilem, přičemž jeho fragmentací bylo možné zjistit polohu dvojné vazby nenasycené sloučeniny. Z toho vyplývá,...
|
host ::
RSS.