|
|
Studium vlivu množství přidaného chelatačního činidla na výsledek konjugace monoklonální protilátky
Janečková, Adriana ; Bárta, Pavel (vedoucí práce) ; Janoušek, Jiří (oponent)
v českém jazyce Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Mgr. Adriana Janečková Školitel: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D. Název rigorózní práce: Studium vlivu množství přidaného chelatačního činidla na výsledek konjugace monoklonální protilátky Monoklonální protilátky jsou v posledních několika desetiletích významným nástrojem nejenom pro terapii ale také pro diagnostiku infekčních, autoimunitních či nádorových onemocnění. Monoklonální protilátky se vedle svého terapeutického účinku staly i biologickými vektory pro látky s terapeutickým a diagnostickým významem. Vedle bakteriálních nebo rostlinných toxinů jsou monoklonální protilátky schopny doručit na místo jejich specifické vazby, tj. antigenu proti kterému byly připraveny, i radionuklidy, které jsou významné z hlediska radiodiagnostiky a radioterapie. Tyto emitory radioaktivního záření se mohou na molekulu vázat buď přímo například v případě halogenace nebo nepřímo. Posledně zmíněný způsob je nejrozšířenější z hlediska větší stability a většího počtu radionuklidů, které se tak mohou pomocí protilátek transportovat. Sloučeninami, které umožňují vazbu radionuklidu na molekulu monoklonální protilátky, jsou bifunkční chelatační činidla (BFC). Míra vazby, tj. konjugace, BFC na molekulu protilátky...
|
|
|
The influence of critical condition of patients on DNA damage
Verešpejová, Natália ; Kuchařová, Monika (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
V decembri 2019 sa začali objavovať prvé prípady pacientov s pneumóniou, ktorá prerástla v syndróm akútnej respiračnej tiesne a spôsobovala problémy s dýchaním. Koronavírusová choroba 2019 (COVID-19) je príčinou globálnej pandémie a spôsobuje ju závažný akútny respiračný syndróm koronavírus 2 (SARS-CoV-2). Za progresiu ochorenia je zodpovedná komplexná súhra faktorov. Niektoré štúdie naznačujú, že podporuje vznik oxidačného stresu a teda môže viesť k oxidačnému poškodeniu buniek a DNA. Cieľom tejto štúdie bolo pozorovanie závislosti medzi oxidačným poškodením DNA a kritickým stavom spôsobeným ochorením COVID-19 s použitím techniky kométovej analýzy. Základný princíp použitej metódy spočíva vo fixácii lymfocytov v agarózovom gély, odstránení membrány a cytoplazmy buniek, inkubácii so špecifickými enzýmami a elektroforéze. V procese elektroforézy dochádza k migrácii negatívne nabitých fragmentov DNA smerom k anóde a bunka tak nadobúda typický tvar kométy. Kométy vizualizujeme pomocou DNA interkalačného farbiva etídia bromidu. Kvantifikovali sme jednoreťazové zlomy a s použitím špecifických enzýmov (modifikácia metódy na detekciu špecifických lézií) aj oxidované pyrimidíny a puríny. Výsledky sú udávané ako % tail DNA, teda množstvo DNA vo chvoste kométy v percentách. Stanovenie DNA poškodenia...
|
|
| |
|
|
Testing of influence of newly synthetized compounds on viability of cells in vitro
Šebová, Dominika ; Smutná, Lucie (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Dominika Šebová Školiteľ: PharmDr. Lucie Smutná, Ph.D. Názov diplomovej práce: Testovanie vplypu novo nasyntetizovaných látok na viabilitu buniek in vitro Výskum a vývoj nových substancií zamýšľaných k terapeutickému použitiu je náročný a dlhotrvajúci proces. Neodmysliteľnou súčasťou tohto procesu za účelom zaistenia bezpečnosti, účinnosti a kvality nového liečiva sú preklinické a neskôr aj klinické hodnotenie liečiv. Táto práca je zameraná na štúdie cytotoxicity, ktoré sú nevyhnutnou súčasťou preklinického hodnotenia liečiv. Vplyv potencionálnych liečiv bol testovaný na bunkovom modeli in vitro. Boli použité bunky bunkovej línie HepG2, odvodenej od dobre diferencovaného hepatocelulárneho karcinómu. Sledovaným parametrom bola viabilita, teda životaschopnosť buniek. Počas experimentu sa testovalo 9 látok o 9 rôznych koncentráciách v koncentračnom rozmedzí 1-1000 µM. Testované boli látky s antimykobakteriálnym pôsobením, ktorých základná chemická štruktúra bola odvodená od antituberkulotika isoniazidu. Sledovaná bola viabilita buniek po 24 a 48-hodinovom pôsobení jednotlivých látok na HepG2 bunky. Viabilita buniek bola stanovená pomocou kolorimetrického MTS testu, pri ktorom dochádza k redukcii...
|
|
|
Farmakologické ovlivnění nukleárních receptorů při terapii diabetes mellitus
Draský, Jakub ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Jakub Draský Školitel: prof. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název diplomové práce: Farmakologické ovlivnění nukleárních receptorů při terapii diabetes mellitus Nukleární receptory přísluší do superrodiny transkripčních faktorů, mezi jejich hlavní funkce patří regulace exprese cílových genů. Ve svojí práci jsem se věnoval hlavně skupině sirotčích receptorů, konkrétně pregnanovému X receptoru (PXR) a konstitutivnímu androstanovému receptoru (CAR). Společným znakem těchto receptorů je jejich aktivace pomocí specifického ligandu. CAR i PXR mají nezbytnou funkci jako biologické senzory hydrofobních xenobiotik, když indukují enzymy I. a II. fáze metabolismu. Zásadní význam mají také při regulaci glukoneogeneze, inzulínové odpovědi, adipogeneze, homeostáze cholesterolu, mastných kyselin, triglyceridů a glykogenu. Cílem této experimentální práce bylo zavést metodu luciferázové reportérové eseje pro dva DNA konstrukty obsahující promotorovou oblast genů PEPCK a CYP7A1. Pro aktivaci PXR jsme použili známého agonistu rifampicin a antagonistu SPA70. Jako agonistu CAR receptoru jsme použili látku CITCO. Funkčnost metody luciferase reporter gene assay jsme si nejdříve ověřili s luciferázovým vektorem pro gen CYP3A4....
|
|
|
Hodnocení jaterní toxicity in vitro
Kafuňková, Kateřina ; Maixnerová, Jana (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Kateřina Kafuňková Vedoucí: RNDr. Jana Maixnerová, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení jaterní toxicity in vitro Předmětem diplomové práce bylo hodnocení toxicity nově syntetizovaných látek na buněčném modelu reprezentujícím jaterní buňky. Testované látky byly dodány z Katedry organické a anorganické chemie, Farmaceutické fakulty v Hradci Králové, Univerzity Karlovy jakožto potencionální antifungální léčiva a léčiva účinná na Meticilin-rezistentní Staphylococcus aureus (MK-NO2-1, MK-NO2-2, DAB-5-K, PABA- Me-5, PABA-Et-5, MK-F-1, PABAN-3, PABAN-5, MK-F-2, MK-CF3-1, MK-CF3- 2). Pro stanovení toxicity byly využity dvě metody. První metoda je založena na měření metabolické aktivity buněk pomocí redukce tetrazolinu na barevný produkt. Druhá metoda detekuje množství uvolněného LDH jako markeru cytotoxicity. Jako buněčný model byla použita buněčná linie lidských buněk hepatomu HepG2. K posouzení míry viability a cytotoxicity byl použit parametr IC50 a EC50. Výsledné hodnoty za využití první metody ukázaly, že všechny testované látky vykazovaly určitou míru toxicity vůči jaterní tkáni. Nejtoxičtější látkou je MK-CF3-2. Použitý standard (amfotericin B) můžeme na základě naměřených hodnot označit za netoxickou...
|
|
|
Stanovení vybraných biomarkerů nefrotoxicity v moči a v plazmě.
Pražáková, Aneta ; Maixnerová, Jana (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Aneta Pražáková Školitel: RNDr. Jana Maixnerová, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení vybraných biomarkerů nefrotoxicity v moči a v plazmě Objev a vývoj nových biomarkerů, které mohou být použity pro diagnostiku poškození ledvin dříve a přesněji, je nezbytný pro účinnou prevenci nefrotoxicity vyvolané léky. Mechanismy nefrotoxicity vyvolané léky, zahrnují změny glomerulární hemodynamiky, toxicity tubulárních buněk, zánětu, krystalické nefropatie atd. Detekce v počátečním stadiu poškození pomocí citlivých a specifických biomarkerů patří mezi jednu z nejdůležitějších strategií v léčbě akutního poškození ledvin a selhání ledvin. Ačkoli některé tyto biomarkery nevykazují specifičnost a senzitivitu, bylo nedávno stanoveno několik slibných kandidátů na biomarkery pro hodnocení nefrotoxicity, např. vybrané KIM-1, cystatin C a NGAL. Výhody těchto biomarkerů ve srovnání s tradičně používanými biomarkery jsou: vyšší citlivost, specificita, již zmíněná včasná diagnóza a neinvazivnost (možnost stanovení hladin biomarkerů z krve nebo moči). Cílem této diplomové práce bylo zjistit hladinu vybraných biomarkerů KIM 1, cystatin C a NGAL v moči a plazmě potkanů. Vyhodnocení bylo provedeno analytickou metodou...
|
|
|
Studium cytotoxicity vývojových bronchodilatancií in vitro
Havelková, Michaela ; Smutná, Lucie (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Michaela Havelková Školitelka: PharmDr. Lucie Hyršová, Ph.D. Název diplomové práce: Studium cytotoxicity vývojových bronchodilatancií in vitro Tato diplomová práce je zaměřena na stanovení vlivu vývojových bronchodilatačně aktivních látek na viabilitu modelových nádorových buněčných linií lidských jaterních buněk HepG2 a lidských plicních buněk HCC827. Tato potencionální léčiva jsou teoreticky vhodná k léčbě astma bronchiale a CHOPN. Předmětem zkoumání byly látky (VN014a, VN015a, VN045b, VN122c) odvozené od struktury chinazolinových alkaloidů vasicinu a vasicinonu, což jsou obsahové látky rostliny Justicia adhatoda. Rostlina, pocházející z Indie, je hojně využívána v tradiční ayurvédské medicíně mimo jiné k léčbě dýchacích obtíží. Kombinace obou alkaloidů vykazuje výraznou bronchodilatační aktivitu. Cytotoxické působení látek bylo testováno kolorimetrickou metodou měřící buněčnou metabolickou aktivitu založenou na redukci tetrazolinové sloučeniny. K posouzení vlivu na viabilitu byl stanovován parametr IC50 pro studované látky na obou testovaných buněčných liniích. Celkově testovaná vývojová bronchodilatancia vykazovala cytotoxické působení na jaterní buněčnou linii HepG2 v řádově 100 μM...
|
|
|
Studium transportu proteinových molekul přes buněčné membrány
Hornová, Aneta ; Smutná, Lucie (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Aneta Hornová Školitelka: PharmDr. Lucie Hyršová, Ph.D. Název diplomové práce: Studium transportu proteinových molekul přes buněčné membrány Transportéry v ledvinách se nachází především v proximálních tubulech a podílejí se na sekreci a reabsorpci endogenních i exogenních látek. Existuje velké množství ledvinných transportérů, nicméně tato diplomová práce je zaměřena především na megalin. Konkrétně jsme se zabývali stanovením transportu peptidů přes tento renální transportér v buněčných liniích HK-2 a JEG-3. Megalin je glykoprotein, jehož hlavní funkcí je tubulární reabsorpce glomerulárně filtrovaného albuminu a dalších vysokomolekulárních látek. Mezi endogenní substráty megalinu dále patří např. transkobalamin - vitamin B12, inzulin nebo lehké řetězce imunoglobulinů. Je také schopen transportovat některá léčiva, jako jsou aminoglykosidová a peptidová antibiotika. V rámci této práce jsme zkoumali vliv snížení exprese megalinu na transport albuminu a anti-VEGFR2 aptameru. Snížení exprese bylo dosaženo transfekcí buněk pomocí siRNA proti LRP2 genu. Nižší exprese LRP2 vede ke snížení transportu albuminu a anti- VEGFR2 aptameru, což bylo následně stanoveno pomocí akumulačních studií. Akumulace...
|
|
|
In vitro saturation study of gallium-67 and zirconium-89 labelled monoclonal antibody ramucirumab on SKOV-3 cell line
Holodňáková, Nikola ; Bárta, Pavel (vedoucí práce) ; Smutná, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra fyziky a fyzikálnej chémie Študentka: Nikola Holodňáková Školiteľ: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D. Názov diplomovej práce: In vitro saturačné štúdie gáliom-67 a zirkóniom-89 značenej monoklonálnej protilátky ramucirumab na SKOV-3 bunkovej línii Vývojom nových liečebných postupov v onkológii má čoraz väčšie postavenie cielená biologická liečba, ktorá stimuluje imunitný systém k boju s nádorovými bunkami. Významným pokrokom v cielení nádorov bolo zavedenie monoklonálnych protilátok, ktoré predstavujú jednu z novších možností využiteľných v diagnostike i terapii nádorov. Využíva sa schopnosť monoklonálnych protilátok rozpoznať a viazať sa špecificky na antigény nádorových buniek, akým je aj receptor pre VEGF typu 2 (VEGFR-2), na ktorý sa viaže monoklonálna protilátka ramucirumab. Blokáciou tohto receptoru sa inhibuje angiogenéza, a tým sa zabráni rastu nádorov. Spojením monoklonálnej protilátky s inou molekulou (rádionuklid, toxín, cytostatikum) za tvorby konjugátov je možné zvýšiť jej protinádorový účinok, čo pre diagnostické i terapeutické účely využíva i odbor nukleárna medicína. Cieľom predloženej práce bolo metódou nepriameho značenia pomocou chelátoru deferoxamínu (DFO) pripraviť rádioaktívnymi nuklidmi (67 Ga a 89 Zr) značený...
|
host ::
RSS.