|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Interakce přírodních látek s molekulou HSA
Nováková, Anežka ; Dršata, Jaroslav (oponent) ; Boušová, Iva (vedoucí práce)
Vypracovala: Anežka Nováková Místo vypracování: Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název: Interakce přírodních látek s molekulou HSA Předkládaná diplomová práce se zabývá interakcí vybraných přírodních látek (apigenin, naringenin, kaempferol) s molekulou lidského sérového albuminu. V úvodních experimentech jsem pomocí UV-VIS absorpční spektroskopie sledovala stabilitu zadaných antioxidantů za fyziologických podmínek v průběhu času. Následně jsem pomocí stejné metody zjišťovala, jaký vliv má na stabilitu rozdílná teplota uchovávání. Vlastní interakci vybraných antioxidantů s molekulou albuminu jsem sledovala pomocí UV-VIS absorpční spektroskopie a fluorescenční spektroskopie. Fluorimetrická titrace prokázala, že zmíněné antioxidanty zhášejí tryptofanovou fluorescenci v molekule lidského albuminu. Pomocí Stern-Volmerovy analýzy jsem zjistila, že v rozsahu počátečních koncentrací antioxidantů (2,5 - 10 µM), byl mechanismus zhášení fluorescence statický. Vypočítané vazebné parametry antioxidantů poskytly konkrétnější informace o jejich interakci s albuminem a odhalily vztah mezi jejich chemickou strukturou a afinitou k albuminu. Přítomnost 3-OH skupiny společně s 2,3 nenasyceným kruhem C (struktura kaempferolu)...
|
|
|
Modulační účinky apigeninu a luteolinu na aktivitu a expresi cytochromu P4501A ve střevních buňkách
Šalovská, Barbora ; Boušová, Iva (oponent) ; Skálová, Lenka (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Barbora Šalovská Titul, jméno, příjmení školitele: Doc. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Modulační účinky apigeninu a luteolinu na aktivitu a expresi cytochromu P4501A ve střevních buňkách Flavonoidy tvoří velkou skupinu polyfenolických látek, které se běžně vyskytují v rostlinách. Byla u nich prokázána široká škála biologických účinků, mezi něž patří například účinky protizánětlivé, antioxidační a antimutagenní. Hrají také významnou roli v prevenci kancerogeneze. Cílem této práce bylo stanovení vlivu dvou flavonů apigeninu a luteolinu na aktivitu a expresi podrodiny 1A cytochromů P450 ve střevní buněčné linii HCT-8. Enzymatická aktivita CYP1A byla měřena pomocí aktivity EROD/MROD, množství proteinu CYP1A bylo detekováno pomocí metody Western blotting. Zjistili jsme, že v buňkách HCT-8 apigenin i luteolin signifikantně snižovaly aktivitu CYP1A. Při současné kultivaci buněk s modelovým induktorem β-naftoflavonem (β-NF) a apigeninem nebo luteolinem (v koncentraci 5µM a vyšších), došlo k omezení indukčního působení β-NF na CYP1A. Apigenin i luteolin rovněž značně snížily CYP1A aktivitu, která byla předem indukována expozicí buněk β-naftoflavonem. Tyto výsledky...
|
|
|
Imunodetekce enzymů redukujících karbonylovou skupinu (Western blotting)
Černá, Libuše ; Boušová, Iva (oponent) ; Netopilová, Miloslava (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Libuše Černá Školitel: PharmDr. Miloslava Netopilová, Ph.D. Název diplomové práce: Imunodetekce enzymů redukujících karbonylovou skupinu (Western blotting) Enzymy redukující karbonylovou skupinu jsou důležité jak pro metabolizaci eobiotik, tak i xenobiotik. Tyto enzymy se dělí na tři nadrodiny : aldo-keto reduktasy (AKR), dehydrogenasy/reduktasy se středně dlouhým řetězcem (MDR) a dehydrogenasy/reduktasy s krátkým řetězcem (SDR). Součástí SDR nadrodiny je i 11β-hydroxysteroiddehydrogenasa typ 1 (11β-HSD1). Tento enzym je důležitý pro akvitaci steroidního hormonu kortisonu na jeho aktivní formu kostisol, ale podílí se i na přeměně některých xenobiotik, např. protinádorového léčiva oracinu. Redukce karbonylové skupiny oracinu se však kromě 11β-HSD1 účastní i další enzym lokalizovaný v mikrosomální membráně. Při purifikaci tohoto neznámého enzymu byla použita separace na Q Sepharose. Cílem práce bylo pomocí imunodetekce (Western blotting) zjistit, v kterých frakcích po separaci se vyskytuje 11β-HSD1. Pro Western blotting byla použita nitrocelulózová membrána, primární polyklonální králičí protilátky proti 11β-HSD1 v ředění 1:1000, sekundární polyklonální protilátka s navázanou křenovou peroxidasou v...
|
|
|
Vzájemná závislost základních biochemických parametrů u pacientů s diabetes mellitus II. typu
Mazurová, Monika ; Boušová, Iva (oponent) ; Mladěnka, Přemysl (vedoucí práce)
Diabetes mellitus 2. typu je závažné a v naší populaci velmi časté civilizační onemocnění charakterizované zvýšenou glykémií v krvi (hyperglykémií) a přítomností dalších metabolických abnormalit. K diagnostice onemocnění se využívá stanovení glykémie v plazmě (séru). Ukazatelem dlouhodobé kompenzace diabetu je glykovaný hemoglobin. V této práci byly sledovány případné závislosti mezi biochemickými ukazateli běžně stanovovanými u diabetických pacientů. Byla zpětně vyhodnocena data od 54 diabetických pacientů ve věku od 40 - 82 let pravidelně kontrolovaných v diabetické poradně. Vzorky byly analyzovány na Analyzátoru Cobas integra 800 od firmy Roche (Německo). Pro měření glukózy v séru i v moči byla použita enzymatická metoda s hexokinázou a pro stanovení HbA1c imunochemická metoda založená na turbidimetrické inhibici v hemolyzované plné krvi. Pro zhodnocení závislostí mezi veličinami byl použit Pearsonův korelační koeficient. Nejvyšší korelační koeficient byl nalezen mezi glukózou měřenou v ranní moči a jejími ztrátami močí za 24 hodin. Statisticky významné korelace byly zjištěny také mezi glukózou v séru a glukózou v moči, či ztrátami glukózy močí za 24 hodin a mezi glukózou v séru a glykovaným hemoglobinem. Byla stanovena lineární závislost mezi glykémií a glykovaným hemoglobinem. Asi vzhledem k...
|
|
|
Optimalizace elektroforetických metod pro studium glykace a aspartátaminotransferasy methylglyoxalem
Bacílková, Eliška ; Szotáková, Barbora (oponent) ; Boušová, Iva (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Eliška Bacílková Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název práce: Optimalizace elektroforetických metod pro studium glykace aspartátaminotransferasy methylglyoxalem Hlavní náplní této práce byla optimalizace podmínek několika elektroforetických metod pro sledování průběhu glykace aspartátaminotransferasy (AST) methylglyoxalem a vlivu vybraných antioxidantů na tento proces. Za použití denaturující elektroforézy (SDS-PAGE) a Western blottingu jsem sledovala vznik vysokomolekulárních agregátů proteinu a pomocí nativní PAGE změny v náboji molekuly AST během glykace. U obou typů elektroforézy jsem hledala vhodnou koncentraci separačního gelu a množství nanášené bílkoviny. Dále jsem porovnávala tři běžně používané barvící metody (Silver Staining, Coomassie Blue R- 250 a G-250). Zjistila jsem, že se stoupající koncentrací methylglyoxalu dochází k tvorbě vysokomolekulárních agregátů s molekulovou hmotností kolem 130 a 160 kDa, což odpovídá tri- a tetramerům AST. Při imunochemické detekci jsem detekovala glykační produkty především s molekulovou hmotností kolem 70 a 130 kDa, při vyšších koncentracích methylglyoxalu s molekulovou hmotností kolem 160 kDa. Glykace methylglyoxalem způsobila progresivní...
|
|
|
OCT activity and glycation damage in rat liver mitochondria
Merhautová, Lucie ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
AKTIVITA OCT A GLYKAČNÍ POŠKOZENÍ V MITOCHONDRIÍCH JATER KRYSY Lucie Merhutová Diplomová práce. Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové. 2007 Tato práce byla vytvořena na základě pokusů provedených v LBBCV (Laboratoři buněčné biologie a biochemie stárnutí) v rámci Univerzity Paris Diderot - Paris 7. Tým této laboratoře studuje mechanismy posttranslačních neenzymatických modifikací proteinů, zahrnutých v patofyziologii stárnutí. Glykace je jedním z mechanismů odpovědných za modifikaci nitrobuněčných makromolekul, které vedou ke ztrátě jejich struktury a funkce. Ornitin karbamoyltransferáza (OCT), druhý enzym močovinového cyklu, byl v předchozím výzkumu identifikován jako jeden z enzymů, které jsou významně glykovány uvnitř mitochondrií jater stárnoucích krys. Cílem této práce bylo sledovat glykaci OCT in vitro a ex vivo a její vliv na funkci tohoto enzymu. Vzorky purifikované OCT a extraktů mitochondriální matrix byly inkubovány s methylglyoxalem, jedním z nejreaktivnějších fyziologických glykačních činidel. U vzorků byla změřena enzymatická aktivita a byly podrobeny imunochemické analýze. Podařilo se nám prokázat, že methylglyoxal modifikuje OCT jak in vitro, tak ex vivo, a způsobuje velice rychlý a rozsáhlý pokles jeho enzymatické aktivity. Podle výsledků této studie vznikají...
|
|
|
Účinky antioxidantů přírodního původu v modelu glykace proteinů
Švehlová, Klára ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Účinky antioxidantů přírodního původu v modelu glykace proteinů V diplomové práci jsem se zabývala přímým a nepřímým vlivem antioxidantů přírodního původu (hydroxyskořicových kyselin) na aktivitu enzymu aspartátaminotransferázy a vztahy mezi strukturou jednotlivých kyselin a jejich účinkem. Používala jsem nový model glykace aspartátaminotransferázy methylglyoxalem, který na katedře biochemických věd FaF UK HK dosud nebyl zkoušen. Zjistila jsem vztah mezi strukturou vybraných hydroxyskořicových kyselin a jejich účinkem. Se zvyšujícím se počtem hydroxylových skupin se zvyšoval antiglykační účinek. Methylglyoxalový model glykace se osvědčil a lze jej využívat i při dalších experimentech s jinými látkami. Dále jsem pozorovala interakce mezi kyselinami a samotným enzymem pomocí absorpční a fluorescenční spektroskopie. Ze získaných spekter je patrná interakce jednotlivých kyselin s enzymem, pravděpodobně se váží pouze na jeho proteinovou část, nikoli na koenzym. Účinek všech hydroxyskořicových kyselin byl závislý na jejich koncentraci.
|
host ::
RSS.