|
|
Imunodetekce enzymů redukujících karbonylovou skupinu (Western blotting)
Černá, Libuše ; Boušová, Iva (oponent) ; Netopilová, Miloslava (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Libuše Černá Školitel: PharmDr. Miloslava Netopilová, Ph.D. Název diplomové práce: Imunodetekce enzymů redukujících karbonylovou skupinu (Western blotting) Enzymy redukující karbonylovou skupinu jsou důležité jak pro metabolizaci eobiotik, tak i xenobiotik. Tyto enzymy se dělí na tři nadrodiny : aldo-keto reduktasy (AKR), dehydrogenasy/reduktasy se středně dlouhým řetězcem (MDR) a dehydrogenasy/reduktasy s krátkým řetězcem (SDR). Součástí SDR nadrodiny je i 11β-hydroxysteroiddehydrogenasa typ 1 (11β-HSD1). Tento enzym je důležitý pro akvitaci steroidního hormonu kortisonu na jeho aktivní formu kostisol, ale podílí se i na přeměně některých xenobiotik, např. protinádorového léčiva oracinu. Redukce karbonylové skupiny oracinu se však kromě 11β-HSD1 účastní i další enzym lokalizovaný v mikrosomální membráně. Při purifikaci tohoto neznámého enzymu byla použita separace na Q Sepharose. Cílem práce bylo pomocí imunodetekce (Western blotting) zjistit, v kterých frakcích po separaci se vyskytuje 11β-HSD1. Pro Western blotting byla použita nitrocelulózová membrána, primární polyklonální králičí protilátky proti 11β-HSD1 v ředění 1:1000, sekundární polyklonální protilátka s navázanou křenovou peroxidasou v...
|
host ::
RSS.