|
|
Thiopurinmethyltransferéza - klinický význam genotypizace a fenotypizace
Černá, Blanka ; Beránek, Martin (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Blanka Černá Školitel: Doc. PharmDr. Martin Beránek, PhD. Název diplomové práce: Thiopurin S-methyltransferasa - klinický význam genotypizace a fenotypizace Thiopurin S-methyltransferasa (TPMT) katalyzuje S-methylaci thiopurinových léčiv jako jsou 6-merkaptopurin a thioguanin. Polymorfismy v genu pro TPMT představují důležitý fakt v oblasti klinické farmakogenetiky. Velké rozdíly ve stupni aktivity TPMT v lidské tkáni jsou důsledkem přítomnosti mutace v genu pro tento enzym. Tyto polymorfismy jsou tak důležitým faktorem v účinnosti léčby thiopuriny. Nízká hodnota aktivity enzymu se objevuje v přítomnosti mutace v genu pro tento enzym, vyšší hodnota aktivity enzymu naopak bez přítomnosti mutace. Genotypizovali jsme TPMT gen pomocí metody real-time PCR u vybrané skupiny pacientů (n=55) s autoimunitními onemocněními. Pacienti byli v průměrném věku 16,7 roku. Z nesrážlivé krve sbírané do EDTA (n=55) byla izolována DNA pomocí QIAmp Mini Kitu (Qiagen, Německo) a použita pro genotypizaci enzymu TPMT. Genotypizace byla provedena metodou real time PCR metody v Light Cycleru (Roche, Německo). TPMT byla fenotypizována na Lékařské fakultě v Hradci Králové na Ústavu farmakologie. Pro fenotypizaci byl použit...
|
|
|
Ovlivnění buněčné direrenciace u nádorových buněk analýzou exprese proteinu Serca3 jako markeru diferenciace
Šerá, Pavlína ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
V předložené práci jsme studovali proces buněčné diferenciace navozený inhibitory histon deacetyláz v buněčných liniích získaných z různých typů nemalobuněčného karcinomu plic. Cílem práce bylo studovat vzájemné spoluovlivnění procesu buněčné diferenciace a exprese proteinu SERCA (ATPázy Sarko/Endoplazmatického retikula), který zajišťuje transport vápníku z cytozolu do endoplazmatického retikula. Buněčné linie různých plicních nádorů byly kultivovány in vitro za přidání různých inhibitorů histon deacetylázy ze skupiny mastných kyselin s krátkým řetězcem. Exprese SERCA proteinu byla hodnocena pomocí metody Western blot za použití primárních monoklonálních protilátek IID8 a PLIM430, které rozpoznávájí enzymy SERCA2 a SERCA3. Naše experimenty ukazují, že exprese proteinů SERCA a proces buněčné diferenciace jsou vzájemně propojeny ve všech sledovaných buněčných liniích nádoru plic (A549, Calu-3, ChaGoK-1, NCI-H292 and NCI-H460). Po navození buněčné diferenciace inhibitory histon deacetylázy jako jsou butyrát, valerát či fenylbutyrát sodný, byla pozorována především zvýšená exprese proteinu SERCA3. Zvýšení exprese proteinu SERCA3 bylo specifické, neboť úroveň exprese proteinu SERCA2 i po přidání léčiv zůstala nezměněna. Souhrnem lze říci, že naše výsledky potvrzují a rozšiřují původní hypotézu...
|
|
|
Studium transportních mechanismů receptorově specifických radiofarmak v ledvinných buňkách.
Cihlo, Jan ; Lázníček, Milan (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent) ; Komárek, Pavel (oponent)
Souhrn Renální akumulace radioaktivně značených specificky působících látek může být klinickým problémem při diagnostice, ale především při léčbě disponovaných malignit kvůli potencionální radionefrotoxicitě těchto látek. Jedním z cílů této práce bylo navržení vhodného in vitro modelu, který by umožňoval posuzování kumulačních charakteristik jednotlivých látek v ledvinách a hledání možných opatření vedoucích ke snížení míry zpětné reabsorpce buňkami renálního tubulu. Navržený model využívající renální OK buněčnou linii ke studiu transportních mechanismů radioaktivně značených specificky působících látek poskytuje další možnost posuzování radionefrotoxicity těchto látek. Diskutovaná in vitro metoda byla standardizována a využita při studiu transportních závislostí zástupců radioaktivně značených analogů somatostatinu (111In/125I/90Y/177Lu-DOTA-Tyr3-oktreotát, 111In/90Y/177Lu-DOTA-1-Nal3-oktreotid), protilátek (111In/90Y/99mTc-AntiCD66) a značeného albuminu (FITC-albumin, 99mTc-albumin). U všech studovaných radioaktivně značených látek byla zvládnuta technika radioaktivního značení a následné radiochemické analýzy pomocí metod HPLC a/nebo ITLC-SG. U studovaných specificky působící látek (radioaktivně značené peptidy a protilátky) nebyl prokázán podstatný vliv radioaktivního značení na buněčnou internalizaci....
|
|
| |
|
| |
|
|
Vazebné vlastnosti enzymů purinnukleosidfosforylasa a thymidinfosforylasa
Strašilová, Kateřina ; Sochor, Jaroslav (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
7. SUMMARY IN CZECH (SOUHRN PRÁCE) Tato práce se zabývá zkoumáním vazebných vlastností a interakcí u enzymů purinnukleosidfosforylasa a thymidinfosforylasa s jejich přirozenými substráty s využitím metody SPR analýzy v přístroji Biacore X. Cílem práce bylo nejprve zjistit, zda a jak mohou být enzymy, připravené technologií rekombinantní DNA, ukotveny na povrch analytického čipu CM 5 s volnými karboxylovými skupinami. Poté bylo testováno, jakým způsobem a za jakých podmínek se již ukotvené enzymy vážou se svými přirozenými substráty. Měnícími se podmínkami byly druh pufru, jeho pH a molalita, teplota v systému a průtoková rychlost celou. Jako přirozené substráty pro enzym PNP byly použity guanosin ve směru rozkladné reakce a guanin s ribóza-1-fosfát nebo s deoxyribóza-1-fosfát ve směru syntézy. Pro enzym TP, který byl studován pouze ve směru fosforolýzy, byly jako přirozené substráty použity thymidin, uridin, a deoxyuridin. V závěru byla opakována interakční analýza k ověření stability čipu pokrytého TP enzymem, který byl uskladněn v lednici po dobu 10 týdnů. Přístroj Biacore X je založen na metodě SPR analýzy. Surface plasmon resonance neboli povrchová plasmonová rezonance je neinvazivní optická metoda sloužící ke sledování interakcí mezi biomolekulami a jejich ligandy. Odpověď nezávisí na povaze...
|
|
| |
|
| |
|
|
Studium nových ftalocyaninů pro fotodynamickou terapii nádorů zaměřenou na cévy
Brázdová, Petra ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Petra Brázdová Školitel: Mgr. Miloslav Macháček Název diplomové práce: Studium nových ftalocyaninů pro fotodynamickou terapii nádorů zaměřenou na cévy Nádorová onemocnění jsou jednou z vedoucích příčin úmrtí ve vyspělých státech, proto je výzkumu protinádorových léčiv věnováno velké úsilí. Fotodynamická terapie (PDT) je v této oblasti dnes již zavedenou metodou, ovšem o směřování jejího účinku na nádorové cévy se začalo uvažovat až poměrně nedávno. Fotodynamická terapie zaměřená na cévy (VTP) využívá, v porovnání s PDT, mnohem kratšího intervalu mezi podáním fotosenzitizéru (PS) a ozářením, čímž je účinek cytotoxických látek směřován na zamezení cévního zásobení nádoru. To má za cíl přerušit přístupu kyslíku a živin maligním buňkám a způsobit tak jejich poškození a smrt. Cílem této práce je zhodnocení účinnosti nově syntetizovaných PS ze skupiny ftalocyaninů a azaftalocyaninů s využitím protokolu VTP v in vitro podmínkách. Použité PS již byly v nedávné době studovány metodami klasické PDT, při níž prokázaly velice slibnou účinnost vůči nádorovým buňkám a nízkou vlastní toxicitu. Hlavním cílem této práce bylo hodnocení schopnosti cytotoxického působení těchto PS po ozáření aktivačním světlem ihned...
|
|
|
In vitro hodnocení fotodynamické aktivity derivátů tetrapyridoporphyrazinu pro léčbu solidních nádorů
Jedličková, Adéla ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Adéla Jedličková Školitel: Mgr. Miloslav Macháček Název diplomové práce: In vitro hodnocení fotodynamické aktivity derivátů tetrapyridoporphyrazinu pro léčbu solidních nádorů Mezi hlavní příčiny úmrtí v dnešní době bezesporu patří nádorová onemocnění, jejichž výskyt stále stoupá. Proto se výzkum v oblasti léčby významně zaměřuje na vývoj nových potenciálních protinádorových léčiv a terapeutických přístupů. Fotodynamická terapie (PDT) dnes patří mezi klinicky schválené terapeutické metody pro léčbu maligních i nemaligních onemocnění. Jejími hlavními složkami jsou fotosenzitizér (PS), světlo a kyslík, které samy o sobě nejsou toxické, ale společnou interakcí vedou ke vzniku vysoce reaktivních molekul. Metoda je založena na absorpci světla o vhodné vlnové délce molekulou PS a následném přenosu energie fotonů na okolní molekuly, především na kyslík, za vzniku cytotoxických reaktivních forem kyslíku (ROS), kde hlavní roli hraje singletový kyslík. ROS následně poškozují okolní buněčné struktury, jejichž destrukce vede k nevratnému poškození buněčných funkcí a následné buněčné smrti, jejíž typ úzce souvisí s lokalizací PS uvnitř buňky. Výsledný efekt léčby je dán třemi propojenými mechanismy - přímým...
|
host ::
RSS.