Název:
Příprava a charakterizace nádorových buněčných linií značených fluorescenčními proteiny
Překlad názvu:
Derivation and characterization of tumor cell lines labeled with fluorescent proteins
Autoři:
Majerová, Miriam ; Šmahel, Michal (vedoucí práce) ; Drbal, Karel (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2022
Jazyk:
slo
Abstrakt: [eng][cze] The effective treatment of cancer is hindered by the mechanisms of tumor cells allowing them to escape from immunosurveillance. One such mechanism is the downregulation of MHC I expression by tumor cells. As a result, CD8+ T lymphocytes are not able to eliminate tumor cells. These cells are often characterized by different expression of MHC I, which leads to the heterogeneity of the tumor environment. This thesis describes a production of a model of MHC I heterogeneity in tumors. Expression plasmids carrying genes for FP were created. Tumor cell lines TC-1, TC-1/A9 and TC-1/dB2m with different expression of MHC I molecules were successfully labeled with these plasmids. When monitoring stability of FP expression by these cell lines, a decrease was observed both in vitro and in vivo. The assumption that the cytokine environment of the tumor induces FP expression could not be confirmed because of unstable FP expression. In a tumor from a mixture of TC-1+TC-1/dB2m cell lines, it was possible to distinguish between these two lines based on the expression of β2m. In a mixture of TC- 1/A9+TC-1/dB2m lines, that could not be done due to the heterogeneity of TC-1/A9 MHC I expression. The use of combined immunotherapy showed the greatest impact on immune cell infiltration in tumors from a mixture of TC-1+...Efektívnej liečbe nádorových ochorení bránia mechanizmy nádorových buniek, ktorými nádorové bunky unikajú pred imunitným systémom. Jedným z takých mechanizmov je zníženie expresie MHC I nádorovými bunkami. Výsledkom je znemožnenie eliminácie nádorových buniek CD8+ T lymfocytmi. Bunky sa pritom často vyznačujú rôznou expresiou MHC I, čo vedie k heterogenite nádorového prostredia. Táto práca sa zaoberá vytvorením modelu heterogenity expresie MHC I v nádoroch. Boli vytvorené expresné plazmidy nesúce gény pre FP a týmito plazmidmi sa označili nádorové bunkové línie TC-1, TC-1/A9 a TC- 1/dB2m s rôznou expresiou molekúl MHC I. Pri sledovaní stability expresie FP týmito líniami bolo pozorované jej klesanie v prostredí in vitro aj in vivo. V nádore zo zmesi bunkových línií TC-1+TC-1/dB2m bolo na základe expresie β2m možné rozlíšiť bunky pochádzajúce z týchto dvoch línií, ale v zmesi línií TC-1/A9+TC-1/dB2m to možné nebolo kvôli heterogenite expresie MHC I bunkami z línie TC-1/A9. Použitie kombinovanej imunoterapie malo najväčší vplyv na infiltráciu imunitných buniek v nádoroch z buniek vzniknutých z mixu línií TC-1+ TC-1/dB2m, a najviac ovplyvnenými subpopuláciami imunitných buniek boli γδ a CD8+ T lymfocyty. Imunohistochemická analýza rezov nádorov z mixu línií TC-1+TC-1/dB2m ukázala tvorbu ostrovčekov z...
Klíčová slova:
DNA vakcinácia; heterogenita expresie MHC I; MHC I; nádor; DNA vaccination; MHC I; MHC I expression heterogeneity; tumor