Název:
Možné přístupy k terapii cystické fibrosy
Překlad názvu:
Possible approaches to the treatment of cystic fibrosis
Autoři:
Král, Jan ; Bořek Dohalská, Lucie (vedoucí práce) ; Nosková, Libuše (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2018
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Cystická fibróza je genetické onemocnění způsobené mutací v CFTR genu. To má za následek absenci či špatnou funkčnost CFTR chloridového kanálu, který je i zásadním regulátorem dalších iontových kanálů. Tato práce se zaměřila na studium genové terapie cystické fibrózy pomocí genového přenosu CFTR-mRNA. K určení exprese CFTR proteinu bylo použito metod nepřímé imunofluorescence a Western blot imunodetekce. Zároveň byla stanovena relativní míra genové exprese CFTR genu pomocí kvantitativní PCR. K experimentům byly použity buněčné linie zdravého plicního epitelu (NuLi-1), plicního epitelu s homozygotní mutací F508del (CuFi-1) a zárodečného ledvinného epitelu (HEK293S). CFTR protein byl vizualizován uvedenými metodami pomocí šesti primárních protilátek (432, 450, 570, 596, 769, CF3). Pro detekci CFTR proteinu pomocí metody nepřímé imunofluorescence byly jako nejvhodnější vybrány primární protilátky 570 a CF3. V případě metody Western blot byla pro detekci uvedeného proteinu vhodná pouze protilátka CF3. Stanovením relativní míry genové exprese CFTR genu bylo zjištěno, že tento gen je exprimován u studovaných buněčných linií v malém množství, přičemž míra jeho exprese je v buněčné linii CuFi-1 přibližně šestkrát vyšší než v buněčné linii NuLi-1. Byla zkoumána též účinnost transfekce buněčné linie CuFi-1...Cystic fibrosis is a genetic disease caused by a mutation in the CFTR gene. This leads to an absence or a malfunction of CFTR chloride channel, which is also a crutial regulator of other ion channels. This thesis was aimed at gene therapy of cystic fibrosis using CFTR- mRNA gene transfer. To determine the expression of CFTR protein, methods of indirect immunofluorescence and Western blot immunodetection were utilized. Also relative gene expression levels of CFTR gene were assessed by quantitative PCR. Experiments were carried out on a healthy lung epithelial cell line (NuLi-1), a lung epithelial cell line with F508del mutation (CuFi-1) and an embryonic kidney epithelial cell line (HEK293S). CFTR protein was visualized by previously mentioned methods using six primary antiobodies (432, 450, 570, 596, 769, CF3). Primary antibodies 570 a CF3 were found as optimal for the detection of CFTR protein by the method of indirect immunofluorescence, whereas for the detection of this protein by the method of Western blot only the CF3 antibody was suitable. It was also determined that CFTR gene is expressed in overall small levels. Its relative gene expression in the CuFi-1 cell line was approximately six times higher than in the NuLi-1 cell line. The efficiency of transfection of CuFi-1 cell line by CFTR-mRNA...
host ::
