Název: Rekombinantní exprese a purifikace nitrilasy z Neurospora crassa
Překlad názvu: Recombinant expresion and purification of nitrilase from Neurospora crassa
Autoři: Zawadová, Dorota ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Kavan, Daniel (oponent)
Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok: 2014
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
Nitrilasy jsou enzymy schopné transformovat toxické nitrilové sloučeniny na příslušné karboxylové kyseliny nebo amidy. Jsou proto jsou potencionálně využitelné při detoxikaci barviv, herbicidů nebo látek používaných při přípravě léčiv. Jejich dalším uplatněním může být enzymatická výroba karboxylových kyselin, u kterých je postup přípravy neenzymatickou cestou drahý nebo příliš náročný. Náplní této diplomové práce je rekombinantní exprese a optimalizace purifikace nitrilas pocházejících z vláknité houby Neurospora crassa. Jako expresní systém, do kterého byla vnesena sekvence genu kódující tento enzym, byly použity buňky E. coli BL 21 Gold. Purifikace byla provedena v redukujícím prostředí za pomoci chromatografie na iontoměniči, chelatační chromatografie a gelové filtrace. Připravené enzymy byly charakterizovány pomocí sedimentační analýzy v analytické ultracentrifuze, dále pak byly použity pro hledání podmínek krystalizace. Klíčová slova: nitrilasa, Neurospora crassa, rekombinantní exprese Nitrilases are enzymes able to convert toxic nitriles to corresponding carboxylic acids or amides. Thus they might be used in the detoxification of dyes, herbicides and pharmaceutical intermediates and byproducts. They can be used also for enzymatic syntheses of carboxylic acids not available by standard procedures. The aim of this diploma thesis is a recombinant expression of nitrilases from Neurospora crassa and the optimization of their purification. Cells of E. coli (BL 21 Gold) were utilized as an expression system. The purification was performed by ion-exchange chromatography, chelation chromatography and gel filtration - all under reducing conditions. Purified enzymes were studied by sedimentation analysis in an analytical ultracentrifuge. They were also used for searching of optimal conditions for their crystallization. Keywords: nitrilase, Neurospora crassa, recombinant expression
Klíčová slova: Neurospora crassa; nitrilasa; rekombinantní exprese; Neurospora crassa; nitrilase; recombinant expression

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/68196

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-337332


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Diplomové práce