Název:
Využití transgenních linií ječmene SCLW-GP-PHYA ve šlechtění
Autoři:
Hanáková, Marie Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2014
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] F1 generace, získaná hybridizací transgenních linií sladovnického ječmene SCLW-GP-PHYA s krmnými odrůdami ječmene Azit, Heris a Tocada, byla vytvořena za účelem přenosu transgenu phyA, exprimujícího mikrobiální fytázu. U 107 hybridů F1 generace, kde byla použita krmná odrůda Azit jako samčí rostlina, byl ověřen hybridní původ pomocí SSR EBmac0603. U 27 jedinců byl potvrzen hybridní původ a ve 23 případech byla pomocí PCR zjištěna přítomnost transgenu phyA. Na základě měření aktivity fytázy v obilkách F1 generace, která byla nižší ve srovnání se samčími transgenními liniemi, ale vyšší než u samčí krmné odrůdy Azit. U F2 generace bylo pozorováno fenotypové štěpení ve velikosti rostlin, délce klasu a velikosti zrna. Pozitivní rostliny, které obsahovaly transgen phyA byly použity pro stabilizaci genu a získání homozygotních jedinců metodou androgeneze. Bylo kultivováno 4834 prašníků, z kterých regenerovalo 54 zelených rostlin a 148 albikátních rostlin. Transgen phyA byl pomocí PCR zjištěn u 33 zelených (61,6 %) a 2 albikátních rostlin (1,4 %). Metodou průtokové cytometrie byl hodnocen stupeň ploidie u 54 regenerantů, z kterých bylo 42 dihaploidních (77,7 %), 6 haploidních (11,1 %), 4 tetraploidní (7,4 %) a 2 triploidní (3,7 %). Dále byla provedena reciproká hybridizace, kdy krmné odrůdy byly použity jako samičí rostliny a transgenní linie ječmene SCLW GP-PHYA jako samčí rostliny. Bylo získáno 10 hybridních rostlin F1 generace, u 8 z nich byla pomocí PCR prokázána přítomnost transgenu phyA.The F1 generation, which was obtained by hybridization transgenic lines of malting barley SCLW-GP-PHYA with feed barley of varieties Azit, Heris and Tocada, was formed for the purpose of transmission of the phyA transgene, which controls the production of the enzyme phytase. 107 hybrids of F1 generation, where it feed variety Azit was used as male plants, has been verified hybrid origin using SSR EBmac0603. In 27 individuals have been confirmed hybrid origin and by 23 individuals has been showed by the method PCR of the phyA transgene. Based on the measurement of phytase activity in the caryopsis F1 generation, which was lower compared with the female transgenic lines, but higher than in male feed variety Azit. F2 generation was observed phenotypic cleavage in size plant, length spike and grain size. Positive plants of the phyA transgene have been used to stabilize transgene and obtained homozygous plants by method androgenesis. From 4834 anthers have been obtained 54 green plants and 148 albinotic plants The phyA transgene were by the method PCR in 33 green plants (61.6 %) and 2 albinotic plants (1.4 %). Flow cytometry has been used to determine to level of ploidy in 54 green plants and have been 42 doubled haploid (77.7 %), 6 haploid (11.1 %), 4 tetrahaploid (7.4 %) and 2 trihaploid (3.7 %). Reciprocal hybridization has been performed, when feed varieties were used as female plants and transgenic barley lines SCLW-GP-PHYA as a male plants. By 10 plants od F1 generation were by the method PCR the transgene phyA in 8 plants.
Klíčová slova:
androgeneze; fytáza; hybridizace; ječmen; mikrosatelitní markery
Instituce: Mendelova univerzita v Brně
(web)
Informace o dostupnosti dokumentu:
Text práce je neveřejný, pro více informací kontaktujte osobu uvedenou v repozitáři Mendelovy univerzity. Původní záznam: http://is.mendelu.cz/zp/index.pl?podrobnosti=62996
host ::
