|
|
Comprehensive investigation of penetration enhancers with complementary analytical techniques.
Vidlářová, Lucie ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Musilová, Marie (oponent)
Transdermální aplikace léčiv je v posledních letech stále centrem zájmu. Pro účinnou transdermální aplikaci léčivo musí překonat vrchní bariéru kůže, stratum corneum. Pro usnadnění trasdermální aplikace mohou být vlastnosti stratum corneum pozměněny například aplikací akcelerantů transdermální penetrace. Cílem této práce bylo charakterizovat vybrané akceleranty transdermální penetrace a zjistit jejich mechanismus účinku. Pro tyto účely byly využity různé techniky jako diferenciální skenovací kalorimetrie (DSC), infračervená spektroskopie (IR) a konfokální Ramanova spektroskopie (CRS) jako nová metoda ve výzkumu trasdermální aplikace. Pro experimenty s akceleranty transdermální penetrace byly použity vzorky lidské kůže. Novým přístupem bylo využití metody lyofilizačního procesu poté, co bylo stratum corneum inkubováno akceleranty. Tímto postupem bylo zamezeno vzniku rozdílů, které mohou nastat při různém stupni hydratace vzorků stratum corneum. V této studii byly vzorky kůže inkubovány dimethylsulfoxidem, propylenglykolem, ethylenglykolem, ethylenglykolem-d4 a olejovými kyselinami. Bylo zpozorováno, že některé akceleranty např. olejová kyselina, působí na lipidovou část stratum corneum, kdežto například dimethylsulfoxid způsobil změny také v konformaci bílkovin. Na závěr byl také prozkoumán možný...
|
|
|
Validace čištění plničky tvrdých želatinových tobolek
Hynková, Aneta ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Dittrich, Milan (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické technologie Kandidát Mgr. Bc. Aneta Hynková Konzultant Doc. RNDr. Pavel Doležal, CSc. Název rigorózní práce VALIDACE ČIŠTĚNÍ PLNIČKY TVRDÝCH ŽELATINOVÝCH TOBOLEK Validací se označuje zadokumentované ověření toho, že výrobní a kontrolní procesy spojené s výrobou nějakého produktu splňují předem stanovené parametry. Cílem validace čištění ve farmaceutické výrobě je získání podkladů potvrzujících, že postup čištění hodnoceného výrobního zařízení zajišťuje bezpečné zpracování léčivých přípravků z hlediska nepřítomnosti nečistot, resp. kontaminant. V teoretické části práce je podán přehled legislativních podkladů závazných pokynů pro validaci čištění založených na hodnocení rizika pro prevenci křížové kontaminace pro výrobní zařízení, která vyrábějí více produktů a přehled všech podstatných pojmů vypracovaných a zavedených pro činnost v této oblasti. Praktická část je zaměřena na validaci procesu čištění plničky tvrdých želatinových tobolek Bosch, model GKF 2500 ASB 100% jako nového zařízení, které má být uvedeno do provozu v režimu Správné výrobní praxe. Zařízení disponuje stoprocentní váhovou kontrolou a maximální rychlostí plnění 2500 kapslí/min. K dispozici byl postup jeho manuálního čištění. Z aktivních...
|
|
|
Biofarmaceutické aspekty makromolekulárních nosičů pro systémovou sublingvální aplikaci léčiv
Berka, Pavel ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Kubová, Kateřina (oponent) ; Kvítek, Libor (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Farmaceutické technologie Kandidát Mgr. Pavel Berka Školitel Doc. RNDr. Pavel Doležal, CSc. Název disertační práce Biofarmaceutické aspekty makromolekulárních nosičů pro systémovou sublingvální aplikaci léčiv Hlavním cílem práce bylo experimentálně ověřit hypotézu o možnosti sublingvální permeace makromolekul jako nosiče léčiv. K tomuto účelu byly vyhledány a vyhodnoceny informace o sublingvální cestě podání léčiv a vytvořen náhled na metodiky zpracování sublingválních i bukálních membrán pro potřeby in vitro pokusů. Z nalezených literárních dat vyplynul úkol navrhnout a ověřit novou metodiku zpracování a uchování sublingválních membrán vhodných pro permeační pokusy. Nová metodika spočívá v šokovém zmrazení ("flash freezing") vypreparovaných membrán kompletního epiteliálního složení, se zachovanou lamina propria i částí vazivového podloží. Zmrazení membrán pomocí kapalného dusíku (-180 řC) bylo provedeno bez kryoprotektiv, aby nedošlo k ovlivnění permeabilních vlastností membrány, pouze s předchozí fixací proteinových struktur azidem sodným. Pro srovnání byly membrány zmrazeny ("frozen") také pomalým konvenčním zmrazením na -20řC. Při mikroskopickém vyšetření nejevily čerstvá ("fresh") ani šokovým zmrazením zpracovaná membrána...
|
|
|
HPMC-based liposomal mucoadhesive films with model peptide as target API
Belcáková, Hedviga ; Nobilis, Milan (vedoucí práce) ; Doležal, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Hedviga Belcáková Školiteľ: Prof. Milan Nobilis, CSc; Vernika Fidelj (Heidelberg Universität, Institut für Pharmazie und Molekulare Biotechnologie) Názov diplomovej práce: Lipozomální mukoadhezivní filmy na bázi HPMC s modelovým peptidem jako cílovým API Predmetom diplomovej práce je preliminárna formulačná fáza mukoadhezívnych bukálnych filmov určených k transmukozálnemu podaniu peptidových liečiv. Skúšobné metódy zahŕňajú hodnotenie hrúbky, pevnosti v ťahu, elongácie, reziduálnej vlhkosti, in vitro 'swelling' parametru a podisolučnej integrity lipozómov. Zvolený polymér (hydroxypropyl methylcelulóza) preukázala optimálne vlastnosti v koncentrácii 10 % v kombinácii s polyethylenglykolom (5 %) ako plasticizérom. Použitá koncentrácia lipozómov bola 2 %. Vyvinutá metóda prípravy vykazovala uspokojivú reprodukovateľnosť s priestorom pre optimalizáciu v oblasti homogenizácie. Výber solventu (H2O vs. PBS) preukázal silný vplyv na mechanické vlastnosti formulácie vedúce k značnej strate elasticity a mukoadhezívnej sily. Prídavok lipozómov v tretej fáze bol úspešný. Následná disolúcia mala len mierny vplyv na ich integritu.
|
|
|
Evoluce importu proteinů do mitochondrií
Dohnálek, Vít ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Novotný, Marian (oponent)
1 Abstrakt Přestože mitochondrie obsahují vlastní genom a ribozomy, většina mitochondriálních proteinů je kódována v jádře a translatována na cytosolických ribozomech. Musely tak vzniknout transportní komplexy umožňující import proteinů z cytosolu. Tyto komplexy a jejich fungování jsou nejlépe popsány u kvasinek. Stále častěji se však setkáváme s organismy, které řadu proteinů popsaných u kvasinek pravděpodobně postrádají. Tato práce se proto snaží přinést přehled o distribuci podjednotek jednotlivých komplexů napříč eukaryoty. Blíže se zaměřujeme na extrémní redukci těchto komplexů u parazitického prvoka Giardia intestinalis, u nějž se zatím podařilo identifikovat podjednotek pouze několik. Přestože se i přes vysokou míru divergence podařilo identifikovat homolog porinu Tom40, kterým prochází všechny proteiny směřující do mitochondrie, homolog proteinu Sam50, jenž je zodpovědný za vkládání Tom40 do membrány, se identifikovat nepodařilo. Značná část práce se tak věnuje tomuto mezi eukaryoty ojedinělému fenoménu.
|
|
|
Víceprvkové systémy biomateriálů na bázi hořčíku a zinku
Hasoňová, Michaela ; Nový, František (oponent) ; Vojtěch, Dalibor (oponent) ; Doležal, Pavel (vedoucí práce)
Disertační práce se zabývá základním výzkumem v oblasti materiálů z čistých Zn prášků a binárních směsí na bázi Mg, Zn a Ca připravených práškovou metalurgií. V teoretické části jsou shrnuty obecné principy a metody práškové metalurgie, stručný popis struktury a vlastností Mg, Zn a Ca a nejnovější výzkum v oblasti jejich zpracování se zaměřením na práškovou metalurgii. Experimentální část se zaměřuje na přípravu materiálů z jemnějších a hrubších částic Zn lisováním za tepla při teplotě 300 a 400 °C za tlaku 100, 200, 300, 400 a 500 MPa. Binární směsi na bázi Mg s přídavkem Zn nebo Ca byly připraveny lisováním za tepla v pevné fázi (300 °C) a lisováním za tepla částečně v tavenině (400 °C, 450 °C v případě Mg- Ca systém) při tlaku 500 MPa. Binární směsi na bázi Zn s přídavkem Mg nebo Ca byly připraveny lisováním za tepla částečně v tavenině (400 °C) za tlaku 500 MPa. Připravené materiály byly hodnoceny z hlediska mikrostruktury, prvkového a fázového složení, mikrotvrdosti, pevnosti v ohybu a fraktografie. Výsledky ukázaly, že v případě materiálů z čistých prášků Zn bylo dosaženo lepší kombinace pevnosti v ohybu a průhybu v případě jemnějšího Zn prášku, a to u materiálu připraveného při teplotě 400 °C a tlaku 500 MPa. V případě směsí bylo nejlepšího spojení mezi částicemi prášku dosaženo v případě materiálu na bázi jemnějšího Zn prášku s 0,5 hm. % Mg, což mělo významný vliv na dosažené hodnoty pevnosti v ohybu a průhyb. Obsah přísadového prášku měl zásadní vliv na strukturu a fázové složení připravených materiálů, zatímco podmínky přípravy ovlivňovali dosažené pevnostní charakteristiky a charakter lomu.
|
|
|
Nanovlákenné nosiče léčiv 1
Vodičková, Jana ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Šnejdrová, Eva (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické technologie Jméno a příjmení: Jana Vodičková Název diplomové práce: Nanovlákenné nosiče léčiv 1 Školitel: doc. RNDr. Pavel Doležal, CSc V teoretické části práce je zmíněno strukturálně hierarchické dělení nanomateriálů, podána charakteristika netkaných nanotextílií a technologie Nanospideru® pro výrobu netkaných textílií metodou elektrospiningu. Je popsána stručná charakteristika vlastností a použití polyurethanu (PUR) včetně nanovláken a charakterizováno měření kontaktního úhlu. Experiment se zabývá měřením smáčivostí kompozitní chitosanpolyurethanové nanomembrány. Dokládá obtížnou smáčitelnost a nízkou kapilaritu testovaných nanovlákenných produktů. Další část je věnována proměření liberačních vlastností nanovlákenné kompozitní membrány z hlediska uvolňování kofeinu a kyseliny listové jako modelových léčiv. Poslední část se zabývá disolucí kyseliny listové z nezesíťovaných a síťovaných nanomembrán z polyvinylalkoholu (PVA). Všechny nanomembrány byly poskytnuty firmou Elmarco s.r.o. Liberec za účelem proměření liberačních profilů léčiv při screeningu poloprovozních parametrů elektrospiningu pro nanozvlákňování kombinací různých polymerů a léčiv. Klíčová slova: Nanospider®, elektrospining, polyurethan,polyvinylalkohol,...
|
|
|
Průnik nanočástic sublingvální membránou 3
Dvořáková, Pavlína ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Kováčik, Andrej (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické technologie Kandidát: Mgr. Dvořáková Pavlína Konzultant: doc. RNDr. Pavel Doležal, CSc. Název práce: Průnik nanočástic sublingvální membránou 3. V teoretické části byla věnována pozornost vstupu léčiv do organismu sublingvální cestou, popisu dutiny ústní (sliznice, epitel, sliz, sliny, MCGs), OCCAT modelu, a základním pojmům bioimpedance. V experimentální části byla metodou DLS ověřena hydrodynamická velikost nanočástic PD-Chromeon 470. V prostředí vody, i dvou pufrů pH 6,8 a 7,4 dle Sörensena byly získány prakticky shodné výsledky na úrovni hodnot 40 nm. Pufry byly použity jako donorové, resp. akceptorové prostředí v navazujících in vitro permeačních pokusech. Jejich součástí bylo proměřování impedancí rozdílně zpracovaných a uchovávaných sublingválních membrán z jazyků prasete domácího. Pro testování průniku nanočástic přes tyto modelové mukosální bariéry byly nanočástice nanášeny v koncentrované (500 µg/ml), zředěné (1:4) disperzi. Nejnižší impedance měly membrány konzervované azidem sodným, které byly dlouhodobě zmrazeny při -18řC. Tyto také vykázaly nejvyšší hodnoty in vitro permeace nanočástic. Rychlé zmrazení kapalným dusíkem membrány z hlediska hodnot impedance zřejmě neovlivňuje. Nanočástice...
|
|
|
Syntéza a studium akcelerantů transdermální permeace léčiv
Kopečná, Monika ; Vávrová, Kateřina (vedoucí práce) ; Doležal, Pavel (oponent) ; Hampl, František (oponent)
Akceleranty transdermální permeace jsou látky používané k usnadnění transdermálního podání léčiv, metody s řadou výhod oproti klasickým cestám podání léčiv. Kůže ale funguje jako těžko prostupná bariéra umožňující suchozemský život, neboť chrání organismus před vlivy okolního prostředí či vstupem cizorodých látek a mikroorganismů. Pokud tedy chceme touto cestou podat léčivo, musíme použít nějakou metodu, která dočasně zvýší propustnost kůže (například akcelerant). Přestože existuje řada akcelerantů, je stále třeba hledat nové struktury s nižší toxicitou a méně specifickým, ale reverzibilním mechanismem účinku. Jako slibné se jeví využití přírodních sloučenin či jejich derivátů s nízkou toxicitou a dráždivostí. Ve své práci jsem nejprve studovala několik typů derivátů glukózy a galaktózy, které ve své struktuře obsahují fragmenty důležité pro urychlovací aktivitu dříve popsaných akcelerantů z různých skupin (například deriváty aminokyselin, mastné kyseliny a alkoholy, analogy ceramidů). Detailní studium těchto látek odhalilo akceleranty odvozené od glukózy a galaktózy (12Glc6N a A15) se srovnatelným či lepším účinkem na lidské kůži in vitro než má známý akcelerant Span 20, reverzibilním působením a přijatelnou toxicitou na buněčných liniích keratinocytů a fibroblastů. Další úsek předkládané práce...
|
|
|
Bacterial proteins in the biogenesis of mitochondria of unicellular eukaryotes.
Petrů, Markéta ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Embley, Martin (oponent) ; Hashimi, Hassan (oponent)
v češtině Vznik mitochondrie z bakteriálního endosymbionta se řadí mezi zásadní momenty v evoluci eukaryot. Nedílnou součástí organelogeneze byl přesun genů endosymbionta do jádra hostitele a zároveň probíhající tvorba translokačních drah pro proteiny nově syntetizované v cytoplasmě hostitele. Výsledné komplexy translokáz jsou kombinací původních bakteriálních komponent a proteinů specifických pro eukaryota. Kromě translokáz určených pro import proteinů z cytoplazmy najdeme v současných mitochondriích i některé komponenty původních bakteriálních sekrečních drah. Zatímco funkce široce rozšířeného mitochondriálního homologu YidC, Oxa1, je dobře známá, role ojedinělých mitochondriálních Sec a Tat translokáz nebyla zatím objasněna. Více pozornosti bylo zatím věnováno jejich homologům v plastidech, kde se tyto translokázy podílejí na sestavování fotosyntetických komplexů. V této práci jsou shrnuty dosavadní poznatky o struktuře a funkci prokaryotických YidC, Sec a Tat translokáz a jejich eukaryotických homologů. Na základě porovnání obou organel endosymbiotického původu je navržena hypotéza o příčinách větší "evoluční úspěšnosti" v integraci bakteriálních translokáz do transportních drah plastidu.
|
host ::
RSS.