|
|
Microbial lipases and their application
Pavlačková, Jana ; Flodrová, Dana (referee) ; Omelková, Jiřina (advisor)
This diploma thesis is focused on the study of the preparation for fat separators and wastewater pipes that contains the microorganisms with lipolytic activity. Theoretical part of this thesis describes lipases, microorganisms producing this enzymes and usage of lipases. In this part possibilities of identification of microorganisms are presented too. The practical part is concerned with the study of commercial preparation Sany Duo Spezial with proven presence of microorganisms with lipolytic activity. These microorganisms were identified by means of the PCR method. This method identified mictoorganisms like genus Bacillus sp. Next characterization of the preparation was focused on the determination of COD and the investigation of the influence of various conditions of culture medium on the lipases production and their activity. The effect of temperature, ions and pH was studied. Lipolytic activity was determine spectrophotometricaly with usage of p-nitrophenyllaurate whitch dissociates to yellow product p-nitrophenol.
|
|
|
The application of microorganisms to the degradation of lipids
Vaňásek, Jakub ; Voběrková, Stanislava (referee) ; Omelková, Jiřina (advisor)
This bachelor thesis is focused on the study of commercial products for degradation of lipids in waste water. This commercial products contain microorganisms with lipolytic activity. Theoretical part of this thesis describes lipids, lipases, mikroorganisms which produce lipolytic enzymes and basical principles of cleaning of waste water. In this part analytical methods of lipids isolation are presented too. The practical part of this thesis is concerned with the study of three commercial products. These products were tested for the content of microflora. Subsequently the restriction analysis was performed. Using this method the microorganisms were identified as Bacillus sp. Furthermore the growth curves were determined. This curves show growth of biomass. Then the pH during cultivation and lipolytic activity of microorganisms were determined. Lipolytic activity was determined by spectrofotometric method with using of p-nitrophenyllaurate.
|
|
|
Screening of extremozyme production of selected extremophilic PHA producers
Dyagilev, Dmitry ; Obruča, Stanislav (referee) ; Pernicová, Iva (advisor)
This bachelor thesis deals with the screening of the production of extracellular hydrolytic enzymes in thermophilic microorganisms of the genera Aneurinibacillus, Brevibacillus, Chelatococcus, Pseudomonas, Schlegelella, Tepidimonas and Caldimonas. The ability of selected enzymes, namely proteases, lipases, amylases, xylanases, cellulases and pectinases, was tested in the investigated microorganisms. Such testing made it possible to assess in which microorganisms the production of specific enzymes can be observed. Based on the results of the screening, it was found that Schlegelella aquatica LMG 23380, Tepidimonas fonticaldi LMG 26746 and the investigated microorganisms of the genus Chelatococcus did not show the ability to produce any of the tested enzymes extracellularly. In natural isolates of Brevibacillus borstelensis LK 99 and Aneurinibacillus thermoaerophilus LK 102, only the ability to produce lipolytic enzymes was detected. The isolate Brevibacillus borstelensis Bz acts as a universal producer of all selected extremozymes. Enzyme activity was determined for selected producers. The bacterium Brevibacillus borstelensis Bz proved the ability to produce all six selected hydrolytic enzymes and has the highest activity of lipases, xylanases, cellulases and pectinases from the tested microorganisms. The highest proteolytic activity was measured in Thermomonas hydrothermalis DSM 14834 when cultured on skimmed milk powder.
|
|
|
Microbial Degradation of Polycaprolactone-based Materials
Damborský, Pavel ; Stratilová, Eva (referee) ; Hermanová, Soňa (advisor)
Diplomová práce se zabývá vlivem nutričních a aeračních faktorů na produkci lipáz bakterií Bacillus subtilis (CCM 1999). Produkce lipáz byla studována zejména z hlediska katalytického působení lipáz při degradaci polyesterových řetězců. Mezi studované parametry patřily: růst bakterií, lipolytická aktivita, pH optimum, teplotní optimum, tepelná stabilita, proteolytická aktivita, množství bílkovin, atd. a to v různých typech živných medií zaočkovaných Bacillus subtilis. Jedna série vzorků kultivačních médií pro BS na bázi: pepton a kvasničný extrakt (NB), pepton, kvasničný extrakt s 2% přídavkem (w/v) glukózy (NBG) a minerální médium s kvasničným extraktem (MS-YE) obsahovala jeden PCL vzorek o definovaných rozměrech (Mn = 10 kDa, = 1.4). Experimenty probíhaly po dobu 21 dnů pří rychlosti třepání 160 a 200 rpm. Přítomnost PCL způsobila v obou typech médií (NB, NBG) inokulovaných BS zvýšení lipolytické aktivity, což naznačuje, uvolnění a následné uplatnění se nízko-molekulekulárních řetězců PCL jako substrátů pro BS. BS kultivovaný v MS-YE medium vykazoval ve srovnání s NB a NBG médii nízké hodnoty lipolytické aktivity a to i v přítomnost PCL. Během experimentů se hodnota pH posunula z neutrální (pH 7.0) do alkalické (pH 8.5-9.3) oblasti a to ve všech typech médií s i bez přítomnosti PCL vzorku v důsledku metabolických pochodů BS využívajících různé substráty. Lipolytické enzymy stanovené v supernatanech bez bakteriálních buněk vykazují dvě pH optima v přítomnosti PCL, pH 7 a 9. V nepřítomnosti polymeru vykazují pouze jedno pH optimum při pH 7. Na základě měření tepelné stability bylo prokázáno, že extracelulární lipázy jsou relativně termostabilní enzymy, zejména v nepřítomnosti polymeru. Dále byla provedena základní proteomická analýza lipáz produkovaných bakterií Bacillus subtilis v NBG médiu pomocí metody peptidového mapování (PMF). Byla ověřena přítomnost proteinů s molární hmotnosti (19.3 kDa) pomocí FPLC. SDS-PAGE a IEF-PAGE prokázaly přítomnost těchto proteinů v obou studovaných mediích inokulovaných BS (NBG vs. NBG/PCL). Zásadní rozdíly proteinového složení v přítomnosti PCL nebyly potvrzeny a identifikace pomoci MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie nestanovila žádnou lipázu. Proces degradace v PCL vzorcích byl vyhodnocen také na základě hmotnostních úbytků, které byly zjištěny ve všech typech médií inokulovaných BS pravděpodobně v důsledku synergického účinku enzymaticky-katalyzované a biotické hydrolýzy v alkalickém prostředí. . Modelová degradační studie PCL a jeho kompozitu s oxidem grafenu (2.7 hm.%, GO) byla provedena v přítomnosti bakterie Bacillus subtilis v NBG při 30 °C a počátečním pH 7 po dobu tří týdnů. Hmotností úbytky PCL filmů se postupně zvyšovaly během celého degradačního testu až ke 12 hm%. Degradace PLC/GO kompozitu probíhala pomaleji, což je prokázáno maximální hmotnostním úbytkem 5 hm%. Podobný charakter elučních křivek PCL a jeho kompozitu stanovený pomocí SEC potvrzoval snížení molární hmotnosti po degradaci.
|
|
|
Screening of extremozyme production of selected extremophilic PHA producers
Dyagilev, Dmitry ; Obruča, Stanislav (referee) ; Pernicová, Iva (advisor)
This bachelor thesis deals with the screening of the production of extracellular hydrolytic enzymes in thermophilic microorganisms of the genera Aneurinibacillus, Brevibacillus, Chelatococcus, Pseudomonas, Schlegelella, Tepidimonas and Caldimonas. The ability of selected enzymes, namely proteases, lipases, amylases, xylanases, cellulases and pectinases, was tested in the investigated microorganisms. Such testing made it possible to assess in which microorganisms the production of specific enzymes can be observed. Based on the results of the screening, it was found that Schlegelella aquatica LMG 23380, Tepidimonas fonticaldi LMG 26746 and the investigated microorganisms of the genus Chelatococcus did not show the ability to produce any of the tested enzymes extracellularly. In natural isolates of Brevibacillus borstelensis LK 99 and Aneurinibacillus thermoaerophilus LK 102, only the ability to produce lipolytic enzymes was detected. The isolate Brevibacillus borstelensis Bz acts as a universal producer of all selected extremozymes. Enzyme activity was determined for selected producers. The bacterium Brevibacillus borstelensis Bz proved the ability to produce all six selected hydrolytic enzymes and has the highest activity of lipases, xylanases, cellulases and pectinases from the tested microorganisms. The highest proteolytic activity was measured in Thermomonas hydrothermalis DSM 14834 when cultured on skimmed milk powder.
|
|
| |
|
|
Microbial Degradation of Polycaprolactone-based Materials
Damborský, Pavel ; Stratilová, Eva (referee) ; Hermanová, Soňa (advisor)
Diplomová práce se zabývá vlivem nutričních a aeračních faktorů na produkci lipáz bakterií Bacillus subtilis (CCM 1999). Produkce lipáz byla studována zejména z hlediska katalytického působení lipáz při degradaci polyesterových řetězců. Mezi studované parametry patřily: růst bakterií, lipolytická aktivita, pH optimum, teplotní optimum, tepelná stabilita, proteolytická aktivita, množství bílkovin, atd. a to v různých typech živných medií zaočkovaných Bacillus subtilis. Jedna série vzorků kultivačních médií pro BS na bázi: pepton a kvasničný extrakt (NB), pepton, kvasničný extrakt s 2% přídavkem (w/v) glukózy (NBG) a minerální médium s kvasničným extraktem (MS-YE) obsahovala jeden PCL vzorek o definovaných rozměrech (Mn = 10 kDa, = 1.4). Experimenty probíhaly po dobu 21 dnů pří rychlosti třepání 160 a 200 rpm. Přítomnost PCL způsobila v obou typech médií (NB, NBG) inokulovaných BS zvýšení lipolytické aktivity, což naznačuje, uvolnění a následné uplatnění se nízko-molekulekulárních řetězců PCL jako substrátů pro BS. BS kultivovaný v MS-YE medium vykazoval ve srovnání s NB a NBG médii nízké hodnoty lipolytické aktivity a to i v přítomnost PCL. Během experimentů se hodnota pH posunula z neutrální (pH 7.0) do alkalické (pH 8.5-9.3) oblasti a to ve všech typech médií s i bez přítomnosti PCL vzorku v důsledku metabolických pochodů BS využívajících různé substráty. Lipolytické enzymy stanovené v supernatanech bez bakteriálních buněk vykazují dvě pH optima v přítomnosti PCL, pH 7 a 9. V nepřítomnosti polymeru vykazují pouze jedno pH optimum při pH 7. Na základě měření tepelné stability bylo prokázáno, že extracelulární lipázy jsou relativně termostabilní enzymy, zejména v nepřítomnosti polymeru. Dále byla provedena základní proteomická analýza lipáz produkovaných bakterií Bacillus subtilis v NBG médiu pomocí metody peptidového mapování (PMF). Byla ověřena přítomnost proteinů s molární hmotnosti (19.3 kDa) pomocí FPLC. SDS-PAGE a IEF-PAGE prokázaly přítomnost těchto proteinů v obou studovaných mediích inokulovaných BS (NBG vs. NBG/PCL). Zásadní rozdíly proteinového složení v přítomnosti PCL nebyly potvrzeny a identifikace pomoci MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie nestanovila žádnou lipázu. Proces degradace v PCL vzorcích byl vyhodnocen také na základě hmotnostních úbytků, které byly zjištěny ve všech typech médií inokulovaných BS pravděpodobně v důsledku synergického účinku enzymaticky-katalyzované a biotické hydrolýzy v alkalickém prostředí. . Modelová degradační studie PCL a jeho kompozitu s oxidem grafenu (2.7 hm.%, GO) byla provedena v přítomnosti bakterie Bacillus subtilis v NBG při 30 °C a počátečním pH 7 po dobu tří týdnů. Hmotností úbytky PCL filmů se postupně zvyšovaly během celého degradačního testu až ke 12 hm%. Degradace PLC/GO kompozitu probíhala pomaleji, což je prokázáno maximální hmotnostním úbytkem 5 hm%. Podobný charakter elučních křivek PCL a jeho kompozitu stanovený pomocí SEC potvrzoval snížení molární hmotnosti po degradaci.
|
|
|
Microbial lipases and their application
Pavlačková, Jana ; Flodrová, Dana (referee) ; Omelková, Jiřina (advisor)
This diploma thesis is focused on the study of the preparation for fat separators and wastewater pipes that contains the microorganisms with lipolytic activity. Theoretical part of this thesis describes lipases, microorganisms producing this enzymes and usage of lipases. In this part possibilities of identification of microorganisms are presented too. The practical part is concerned with the study of commercial preparation Sany Duo Spezial with proven presence of microorganisms with lipolytic activity. These microorganisms were identified by means of the PCR method. This method identified mictoorganisms like genus Bacillus sp. Next characterization of the preparation was focused on the determination of COD and the investigation of the influence of various conditions of culture medium on the lipases production and their activity. The effect of temperature, ions and pH was studied. Lipolytic activity was determine spectrophotometricaly with usage of p-nitrophenyllaurate whitch dissociates to yellow product p-nitrophenol.
|
|
|
The study of enzyme activities in compost
Pernicová, Iva ; doc.Mgr.Pavlína Pelcová, Ph.D. (referee) ; Voběrková, Stanislava (advisor)
This thesis deals with the determination of enzyme activities in compost for consideration their changes during the composting. The changes in the activity of particular enzymes serve as the indicators of the activity of microorganisms, which are found in the compost. In the practical part of the work the changes in activity of proteases, cellulases, lipases, dehydrogenases and ureases within 21 days of composting under laboratory conditions were determined. The change in pH was observed as well. The changes in the pH-values and all enzyme activities except ureases present in the first week the same trend associated with the use of available substrates. The changes in the activities of the key enzymes in compost under laboratory conditions were compared with the changes in activities in compost under real conditions, which is the indicator of the different composting process under the given circumstances.
|
|
|
The application of microorganisms to the degradation of lipids
Vaňásek, Jakub ; Voběrková, Stanislava (referee) ; Omelková, Jiřina (advisor)
This bachelor thesis is focused on the study of commercial products for degradation of lipids in waste water. This commercial products contain microorganisms with lipolytic activity. Theoretical part of this thesis describes lipids, lipases, mikroorganisms which produce lipolytic enzymes and basical principles of cleaning of waste water. In this part analytical methods of lipids isolation are presented too. The practical part of this thesis is concerned with the study of three commercial products. These products were tested for the content of microflora. Subsequently the restriction analysis was performed. Using this method the microorganisms were identified as Bacillus sp. Furthermore the growth curves were determined. This curves show growth of biomass. Then the pH during cultivation and lipolytic activity of microorganisms were determined. Lipolytic activity was determined by spectrofotometric method with using of p-nitrophenyllaurate.
|
guest ::
