|
|
Detekce a identifikace patogenu konopí setého (Cannabis sativa)
Jarošová, Natálie
Cílem této práce byla detekce a identifikace Hop Latent Viroidu u rostlin Cannabis sativa. Tento Viroid, který nemusí mít žádné příznaky na rostlinách, jak z názvu vyplívá. Jedna z mála možností detekce vychází z principu polymerázové řetězové reakce – PCR. Za využití chloroform fenolové reakce se povedlo izolovat RNA Viroidu, která byla posléze využita jako templát pro cDNA a následně multiplikována metodou PCR. Po úspěšném provedení PCR byly vzorky naneseny na agarózový gel a vyhodnoceny srovnáním s velikostním markerem. Pro testování protokolu detekce a identifikaci patogena byly použity pozitivní vzorky z firmy Genetia Biosciences a pro následné testování reálných vzorků z kolekce genotypů z Ústavu biologie rostlin, byly identifikovány rostliny s přítomností, ale i absencí Hop Latent Viroidu.
|
|
|
Funkční analýza overexprese genu pro transkripční faktor typu Myb z rajčete, potenciálního targetu infekce viroidem PSTVd
ONDRUŠ, Jaroslav
The main aim of this thesis was to find out whether gene Trifoliate, encoding a transcription factor from Myb family could be target of viroid PSTVd and is involved in its unknown interactions with host plant molecules, responsible for PSTVd pathogenesis. For this purpose, transformation of wild type plants Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana, Nicotiana tabacum, and mutant lof-1 Arabidopsis thaliana with Trifoliate was made, changed anatomy and morphogenesis of transformants has been observed. Due to our research and already known facts we suggest Trifoliate has a great importance in regulation of specific organs development. Manipulation with expression of this gene in some cases leaded to triggering similar sympthoms as PSTVd causes.
|
|
| |
|
|
Analýza exprese vybraných regulačních faktorů chmelu v návaznosti na projevy viroidní patogeneze
FÜSSY, Zoltán
Cílem práce bylo zjistit, zda dochází u rostlin infikovaných viroidem kromě změn morfogeneze a metabolomu také ke změnám exprese známých chmelových transkripčních faktorů (TF). Z předchozích výzkumů bylo zjištěno zapojení zkoumaných TF, konkrétně faktorů HlMyb1, HlMyb3, HlbHLH, HlbZIPA a HlbZIP2, v regulaci produkce sekundárních metabolitů v hlávkách. Byly připraveny infekční vektory obsahující dimery dvou blízce příbuzných viroidů, HSVd ("hop stunt viroid") a CPFVd ("cucumber pale fruit viroid"). Pro infekci chmelu (Humulus lupulus L.) byla použita metoda biolistické inokulace mladých rév. Kvůli vysokému obsahu flavonoidů v listech byl pro pokusy vybrán kultivar Admiral. Infekce chmelu oběma druhy viroidů byla potvrzena pomocí "Northern" hybridizace a dot blotu. Rostliny infikované viroidem HSVd vykazovaly silné symptomy, zakrslost, epinastie a tuhost listů. Zajímavým pozorováním bylo odbarvení řapíků u rostlin infikovaných viroidem HSVd, zřejmě kvůli zastavení produkce anthokyanů. Podobné symptomy byly pozorovány také u rostlin infikovaných CPFVd, nicméně nebyly tak intenzivní. U symptomatických rostlin byla provedena analýza HPLC, při které byla oproti kontrolním rostlinám porovnávána změna hladin flavonolových glykozidů, fenolických kyselin, hořkých kyselin a xanthohumolu. V listech a řapících HSVd-infikovaných rostlin byl pozorován signifikantní pokles obsahu flavonolových glykozidů a fenolických kyselin. Na druhou stranu byl u pletiv infikovaných HSVd pozorován nárůst obsahu xanthohumolu a hořkých kyselin ve srovnání se zdravou kontrolou. Na rozdíl od HSVd byl u rostlin infikovaných CPFVd zjištěn pokles obsahu všech zkoumanách sekundárních metabolitů. Tento rozdíl naznačuje odlišnou odpověď metabolické dráhy hostitelské rostliny na patogenezi viroidů CPFVd a HSVd. Pro semikvantitativní stanovení hladin TF u kontrolních a infikovaných pletiv byla použita metoda RT-PCR. Pro kvantitativní stanovení mRNA předpokládaných TF HlbZIPA a HlbZIP2 v pletivu řapíků rostlin infikovaných HSVd byla použita analýza RealTime RT-PCR. Byla zjištěná zvýšená hladina mRNA faktorů bZIP u infikovaného materiálu, což naznačuje zapojení těchto faktorů v odpovědi hostitelské rostliny na infekci HSVd. Pomocí termodynamických metod TGGE a analýzy heteroduplexů byly identifikovány sekvenční varianty HlbZIP2. Dle porovnání sekvence aminokyselin HlbZIP2 s databankou známých proteinů, patří tento předpokládaný TF do skupiny proteinů bZIP se zapojením signalizace stresu a ABA u A. thaliana.
|
host ::
RSS.