|
|
Influence of lamin A/C on paternal pronucleus DNA demethylation
Václavková, Vendula ; Fulková, Helena (vedoucí práce) ; Žatecká, Eva (oponent)
Po oplození dochází k řadě dynamických epigenetických změn, které přestavují genom gamet a zajišťují totipotenci zygoty. Procesy je možné pozorovat v obou rodičovských prvojádrech, avšak aparát zajišťující epigenetickou dynamiku se pravděpodobně nachází v mateřském oocytu, konkrétně v jeho zárodečném váčku (germinal vesicle GV). GV je možné rozdělit na dvě frakce: solubilní a nesolubilní. Pravděpodobnou schopností solubilní frakce je remodelace hlavičky spermie a zajištěné vznik otcovského prvojádra, zatímco na reprogramování otcovského genomu a zajištění vývojové competence by se mohla podílet nesolubilní frakce. Tato práce se věnovala jedné z epigenetických modifikací a to DNA metylaci, respektive její rychlé ztrátě po oplození. Jedna z možností, jak k tomuto ději může dojít, je oxidace metylovaných bazí a jejich následná oprava a záměna pomocí opravného mechanismu base excision repair (BER). V této práci jsme testovali, zda protein lamin A/C, součást nesolubilní frakce, je možným kandidátem, který může zahájit aktivní demetylaci DNA prostřednictvím BER. Pro práci bylo potřeba připravit takové GV oocyty, které by obsahovali jak solubilní část GV, tak protein lamin A/C. K získání cytoplastů obsahujících solubilní frakci GV byla použita metoda selektivní enukleace. Tyto cytoplasty byly oplozeny in...
|
|
|
Interakce hlavního kapsidového proteinu polyomavirů s jadernými laminy
Žáčková, Sandra ; Horníková, Lenka (vedoucí práce) ; Šroller, Vojtěch (oponent)
Tato práce se soustředí na studium interakcí virových strukturních proteinů myšího polyomaviru (MPyV) a BK viru se strukturou jaderné laminy. Cílem bylo objasnit, zda a případně jakým způsobem virus, potažmo virové strukturní proteiny, interagují s jadernou laminou a jak tyto interakce ovlivňují její vlastnosti. Předpokládali jsme, že exprese virových proteinů bude indukovat rozrušení struktury jaderné laminy, které následně umožní únik virionů z jádra v závěrečné fázi infekce. Strukturní proteiny MPyV byly exprimovány z expresního vektoru pMPyV LATE, který zajistil lokalizaci virového proteinu VP1 podobnou jako u infikovaných buněk - převážně v perinukleárních oblastech jádra. Zároveň v těchto buňkách byly nalezeny defekty v barvení jaderné laminy indikující její narušení tak, jak je tomu v buňkách infikovaných MPyV. Pro experimenty jsme používali ještě expresní vektor pMPyV mut3 VP1 kódující mutovaný protein VP1. Při transientní expresi v buňkách vykazoval mutovaný protein VP1 sice difúzní jadernou lokalizaci, ale pozorovali jsme výrazné deformace a poruchy barvení jaderné laminy, které naznačují významnou roli proteinu VP1 ve změnách vlastností jaderné laminy v infikovaných a transfekovaných buňkách. Zjistili jsme, že největší množství proteinu VP1 v buňkách po transfekci pMPyV LATE a v pozdní...
|
host ::
RSS.