|
|
Imunochemická detekce proteinu TNF-α pomocí magnetických částic
Koudelková, Žaneta
Diplomová práce se zabývá optimalizací a vývojem metody pro imunochemickou detekci cytokinu TNF-α založené na principu sendvičové ELISA s využitím magnetických částic. Pro analýzu byly využity magnetické částice funkcionalizované pomocí karboxylových skupin, které umožňují vazbu protilátek. Optimalizací podmínek aktivace částic bylo stanoveno optimální pH MES pufru, koncentrace EDC a způsob aktivace. V druhé části práce byly optimalizovány podmínky průběhu sendvičové ELISA na magnetických částicích. Optimální inkubační doba s antigenem byla stanovena na 3 hodiny a inkubační doba s detekční protilátkou na 1,5 hodiny. Optimalizované podmínky aktivace částic a ELISA byly využity při tvorbě kalibrační křivky standardu TNF-α. Optimalizovaný protokol ELISA na magnetických částicích může být využit ke snadné a efektivní analýze komplexních vzorků jako je krevní sérum, moč nebo sliny.
|
|
|
Slepičí protilátky jako nástroj imunodetekce cytochromů P450
Mácová, Iva ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblas, Tomáš (oponent)
Cytochrom P450 je významný enzym katalyzující velké množství reakcí metabolismu endogenních i exogenních látek. Existují látky, které zvyšují expresi tohoto enzymu, což může vést k aktivaci karcinogenů a vzniku rakoviny. Mezi tyto látky patří i dnes velmi propagované chemopreventivní látky, které jsou masově užívané ve formě potravinových doplňků. Je tedy důležité mít k dispozici metody k určení indukce cytochromu P450. Jednou z takových metod je imunodetekce cytochromu P450 metodou Western blotting. K detekci proteinů na membráně slouží specifické protilátky získané většinou ze savců. V této bakalářské práci je dokázáno, že stejně dobře však mohou posloužit i protilátky získané ze slepičích vajec. Těmito vaječnými protilátkami byly detekovány cytochromy P450 1A1 a 1A2 v jaterních mikrosomech po exposici potkanů modelové chemopreventivní látce β-naftoflavonu.
|
|
|
Studium vybraných flavonoidů jako modulátorů cytochromu P450 3A4
Skotnicová, Aneta ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblihová, Jitka (oponent)
Flavonoidy jsou sekundární metabolity rostlin vykazující širokou škálu biologických aktivit. Velká pozornost jim je v nována hlavn pro jejich antioxida ní vlastnosti. Proto se v sou asné dob zvyšuje konzumace t chto p írodních látek p edevším ve form potravních dopl k . Navíc tyto slou eniny vykazují antivirové, protizán tlivé i hepatoprotektivní ú inky a n které z nich mají také mutagenní a/nebo prooxida ní vlastnosti. Mimo jiné jsou d ležité interakce flavonoid s biotransforma ními enzymy, nap . cytochromy P450, ímž mohou zasahovat do metabolismu lé iv nebo proces kancerogenese. V této bakalá ské práci byl studován vliv vybraných flavonoidních slou enin dihydromyricetinu a myricetinu na expresi a aktivitu cytochromu P450 3A4. Po premedikaci potkan t mito flavonoidy nebyla zjišt na indukce CYP3A4. Dihydromyricetin i myricetin však inhibují CYP3A4. Byla stanovena jejich koncentrace, p i které je dosaženo 50% maxima inhibi ního efektu, pro dihydromyricetin IC50 = 25 µM a pro myricetin IC50 = 24 µM. Klí ová slova: Imunodetekce, HPLC, inhibice, indukce
|
|
|
Slepičí protilátky jako nástroj imunodetekce cytochromů P450
Mácová, Iva ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblas, Tomáš (oponent)
Cytochrom P450 je významný enzym katalyzující velké množství reakcí metabolismu endogenních i exogenních látek. Existují látky, které zvyšují expresi tohoto enzymu, což může vést k aktivaci karcinogenů a vzniku rakoviny. Mezi tyto látky patří i dnes velmi propagované chemopreventivní látky, které jsou masově užívané ve formě potravinových doplňků. Je tedy důležité mít k dispozici metody k určení indukce cytochromu P450. Jednou z takových metod je imunodetekce cytochromu P450 metodou Western blotting. K detekci proteinů na membráně slouží specifické protilátky získané většinou ze savců. V této bakalářské práci je dokázáno, že stejně dobře však mohou posloužit i protilátky získané ze slepičích vajec. Těmito vaječnými protilátkami byly detekovány cytochromy P450 1A1 a 1A2 v jaterních mikrosomech po exposici potkanů modelové chemopreventivní látce β-naftoflavonu.
|
host ::
RSS.