|
|
Imunochemická detekce proteinu TNF-α pomocí magnetických částic
Koudelková, Žaneta
Diplomová práce se zabývá optimalizací a vývojem metody pro imunochemickou detekci cytokinu TNF-α založené na principu sendvičové ELISA s využitím magnetických částic. Pro analýzu byly využity magnetické částice funkcionalizované pomocí karboxylových skupin, které umožňují vazbu protilátek. Optimalizací podmínek aktivace částic bylo stanoveno optimální pH MES pufru, koncentrace EDC a způsob aktivace. V druhé části práce byly optimalizovány podmínky průběhu sendvičové ELISA na magnetických částicích. Optimální inkubační doba s antigenem byla stanovena na 3 hodiny a inkubační doba s detekční protilátkou na 1,5 hodiny. Optimalizované podmínky aktivace částic a ELISA byly využity při tvorbě kalibrační křivky standardu TNF-α. Optimalizovaný protokol ELISA na magnetických částicích může být využit ke snadné a efektivní analýze komplexních vzorků jako je krevní sérum, moč nebo sliny.
|
|
|
Slepičí protilátky jako nástroj imunodetekce cytochromů P450
Mácová, Iva ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblas, Tomáš (oponent)
Cytochrom P450 je významný enzym katalyzující velké množství reakcí metabolismu endogenních i exogenních látek. Existují látky, které zvyšují expresi tohoto enzymu, což může vést k aktivaci karcinogenů a vzniku rakoviny. Mezi tyto látky patří i dnes velmi propagované chemopreventivní látky, které jsou masově užívané ve formě potravinových doplňků. Je tedy důležité mít k dispozici metody k určení indukce cytochromu P450. Jednou z takových metod je imunodetekce cytochromu P450 metodou Western blotting. K detekci proteinů na membráně slouží specifické protilátky získané většinou ze savců. V této bakalářské práci je dokázáno, že stejně dobře však mohou posloužit i protilátky získané ze slepičích vajec. Těmito vaječnými protilátkami byly detekovány cytochromy P450 1A1 a 1A2 v jaterních mikrosomech po exposici potkanů modelové chemopreventivní látce β-naftoflavonu.
|
|
|
Studium vybraných flavonoidů jako modulátorů cytochromu P450 3A4
Skotnicová, Aneta ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblihová, Jitka (oponent)
Flavonoidy jsou sekundární metabolity rostlin vykazující širokou škálu biologických aktivit. Velká pozornost jim je v nována hlavn pro jejich antioxida ní vlastnosti. Proto se v sou asné dob zvyšuje konzumace t chto p írodních látek p edevším ve form potravních dopl k . Navíc tyto slou eniny vykazují antivirové, protizán tlivé i hepatoprotektivní ú inky a n které z nich mají také mutagenní a/nebo prooxida ní vlastnosti. Mimo jiné jsou d ležité interakce flavonoid s biotransforma ními enzymy, nap . cytochromy P450, ímž mohou zasahovat do metabolismu lé iv nebo proces kancerogenese. V této bakalá ské práci byl studován vliv vybraných flavonoidních slou enin dihydromyricetinu a myricetinu na expresi a aktivitu cytochromu P450 3A4. Po premedikaci potkan t mito flavonoidy nebyla zjišt na indukce CYP3A4. Dihydromyricetin i myricetin však inhibují CYP3A4. Byla stanovena jejich koncentrace, p i které je dosaženo 50% maxima inhibi ního efektu, pro dihydromyricetin IC50 = 25 µM a pro myricetin IC50 = 24 µM. Klí ová slova: Imunodetekce, HPLC, inhibice, indukce
|
|
|
Development, characterization and use of anti-orphan cytochrome P450 antibodies
Hrdinová, Johana ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblas, Tomáš (oponent)
Cytochromy P450 jsou důležité enzymy účastnící se metabolických pochodů, které využívají exogenní i endogenní látky jako substráty pro různé enzymatické reakce. Tyto enzymy mohou také jako substrát využít prekarcinogeny a aktivovat je na karcinogeny, což může vést k rozvoji rakoviny. Některé chemopreventivní látky mohou zvyšovat aktivitu cytochromů P450, a tím i riziko rozvoje rakoviny. Proto je důležité věnovat náležitou pozornost studiu mechanismu účinku těchto enzymů a vlivu chemopreventivních sloučenin na jejich aktivitu. mRNA exprese většiny isoforem cytochromů P450 je pozorovatelná ve zdravých (netransformovaných) tkáních, například játrech, mozku, srdci, tlustém střevě, ledvinách či placentě. Přesto existuje několik cytochromů P450, jejichž mRNA jsou v netransformovaných tkáních exprimovány málo, zatímco jejich exprese v transformovaných tkáních je znatelně vyšší. Jedním z takovýchto enzymů je CYP2W1, který může být použit jako prognostický marker kolorektální rakoviny - proto je užitečné mít schopnost detekovat přítomnost tohoto enzymu v různých tkáních. Detekce cytochromů P450 může být dosaženo metodou Western blot. V této metodě je imunodetekce provedena s využitím specifických protilátek. Pro tyto účely jsou nejčastěji používány savčí protilátky (IgG), ale protilátky izolované z...
|
|
|
Slepičí protilátky jako nástroj imunodetekce cytochromů P450
Mácová, Iva ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblas, Tomáš (oponent)
Cytochrom P450 je významný enzym katalyzující velké množství reakcí metabolismu endogenních i exogenních látek. Existují látky, které zvyšují expresi tohoto enzymu, což může vést k aktivaci karcinogenů a vzniku rakoviny. Mezi tyto látky patří i dnes velmi propagované chemopreventivní látky, které jsou masově užívané ve formě potravinových doplňků. Je tedy důležité mít k dispozici metody k určení indukce cytochromu P450. Jednou z takových metod je imunodetekce cytochromu P450 metodou Western blotting. K detekci proteinů na membráně slouží specifické protilátky získané většinou ze savců. V této bakalářské práci je dokázáno, že stejně dobře však mohou posloužit i protilátky získané ze slepičích vajec. Těmito vaječnými protilátkami byly detekovány cytochromy P450 1A1 a 1A2 v jaterních mikrosomech po exposici potkanů modelové chemopreventivní látce β-naftoflavonu.
|
host ::
RSS.